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应用噬菌体展示技术研究过敏原表位的新进展被引量：4: 2004年; 过敏原表位的确认和定位是开展过敏症免疫干预治疗的基础 ,噬菌体展示技术已广泛应用于过敏原的研究及模拟表位肽筛选。近年来 ,利用这一技术已确认多种主要过敏原模拟表位 ,包括桦树花粉过敏原Betv1的模拟位、尘螨过敏原Derp1的IgE构象模拟位、牛奶过敏原 β 乳球蛋白 (BLG )的线性表位及一种泛过敏原肌动抑制蛋白 (profilin )的环 9肽模拟位等。噬菌体展示模拟位的结构与功能分析显示一定的应用前景 ,将为过敏症诊断和免疫治疗提供新途径。; 黄峙杨红宇向军俭; 关键词：噬菌体展示表位模拟位过敏症

食品过敏原体外激发小鼠致敏肥大细胞组胺释放被引量：14: 2005年; 目的检测食品过敏原体外激发小鼠致敏肥大细胞的组胺释放率,探讨食品过敏原鉴定与评价方法。方法以河虾蛋白和鸡卵清蛋白,氢氧化铝佐剂免疫Balb/c小鼠,建立IgE高反应性食物过敏动物模型。间接ELISA测定激发后第7,14,21天血清中过敏原sIgE水平;并在激发后第14天分离小鼠腹腔肥大细胞,过敏原体外激发,荧光光度法检测组胺释放量,计算释放率,Student’s统计分析显著性意义。结果①模型组小鼠血清sIgE水平比对照组明显升高,且在过敏原激发后第14天sIgE效价最高,河虾和鸡卵清蛋白组分别达到1/6400和1/3200。②鸡卵清蛋白组定向组胺释放率达60.75%;河虾组腹腔或皮下免疫分别达到71.53%和88.48%,所有模型组与对照组比较均呈显著差异(P<0.05)。结论利用小鼠过敏模型,检测食品过敏原体外激发组胺释放率可能成为食品过敏原鉴定与评价的方法。; 向军俭张在军毛露甜邓宁杨红宇; 关键词：食品体外组胺释放 IGE水平腹腔肥大细胞蛋白组分

Dot-ELISA法同时检测多种食品过敏原的实验研究被引量：21: 2005年; 通过花生、虾、蛋清过敏原浸液皮下免疫复制小鼠过敏模型,获特异性IgE的小鼠血清进行方法学研究。将不同的过敏原以适当浓度点状吸附于硝酸纤维素膜(NC膜)上,与待检血清作用,再依次与生物素化羊抗鼠IgE第二抗体,亲和素偶联的辣根过氧化物酶反应,DAB显色。结果表明:获得了小鼠抗花生、虾、蛋清过敏原高效价特异性IgE血清。Dot-ELISA法各种过敏原最适包被量为2μL(10μg蛋白),待检抗血清最佳稀释度为1∶80,通过肉眼观察NC膜上斑点的显色即可确定待检血清中相应过敏原特异性IgE,且3种过敏原之间无交叉反应性。不同时间同批试剂重复检测结果完全一致,包被过敏原的NC膜4℃可稳定保存3个月。实验初步建立了用含有过敏原特异性IgE的小鼠血清同时检测多种过敏原的Dot-ELISA实验方案,该法简便、特异、稳定、重复性好,可成为食品过敏原鉴定与评价的新方法。; 张在军毛露甜向军俭邓宁黄峙杨红宇; 关键词：DOT-ELISA 食品过敏原特异性IGE

ABC-ELISA法检测牛乳过敏小鼠模型中的特异性IgE被引量：4: 2006年; 目的:建立并优化一种有效检测特异性IgE的方法,以取代皮内试验快速诊断过敏症。方法:用乳清蛋白皮下注射BALB/c小鼠建立牛奶过敏模型,获得小鼠抗血清进行方法学研究。结果:乳清蛋白的最适包被量为500ng,用pH9.4的碳酸盐缓冲液作为包被液,4℃包被过夜效果最佳,选用0.2%的白明胶/1%的BSA封闭效果最好,生物素化抗鼠IgE抗体的最佳反应浓度为1∶1000。结论:建立了检测特异性IgE的生物素-亲和素系统改良的ABC-ELISA法,该法特异、灵敏、安全、简便,可用于临床诊断过敏症。; 毛露甜向军俭张在军; 关键词：ABC-ELISA 食物过敏特异性IGE

牛乳中主要过敏原组分的分离纯化及鉴定被引量：10: 2007年; 目的:分离纯化并鉴定牛乳中引起过敏反应的主要致敏组分。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析了脱脂乳和乳清的蛋白组分,用饱和硫酸铵分段盐析-DEAE离子交换柱层析纯化过敏原蛋白,脱脂乳和乳清蛋白皮下注射Balb/c小鼠获得高效价特异性IgE抗血清用于免疫印迹分析。结果:免疫印迹分析显示β-乳球蛋白(β-Lg)是引起牛乳过敏的主要过敏原,建立了牛乳过敏小鼠模型。结论:明确了牛乳过敏的主要过敏组分,对牛乳过敏症的诊断治疗以及无过敏原牛乳的制备提供了实验依据。; 毛露甜向军俭张在军; 关键词：牛乳食物过敏原免疫印迹

过敏症豚鼠模型的建立及海虾主要过敏原组分的纯化与鉴定被引量：11: 2006年; 旨在建立海虾过敏症豚鼠模型,分析主要过敏原蛋白质组分并将其应用ELISA来提高体外检测的准确性。以海虾蛋白浸液为致敏原,氢氧化铝为佐剂免疫豚鼠,建立豚鼠过敏模型,DEAE阴离子交换纯化主要的过敏原成分,间接ELISA法检测sIgE和IgG。实验结果:模型组血清sIgE和IgG效价分别为18∶0和12∶0480;DEAE阴离子交换层析成功纯化出了海虾中的主要过敏原成分,应用于ELISA检测sIgE效价为13∶20;主要过敏原蛋白检测sIgE效价是蛋白浸液用于检测的4倍。结果表明,海虾过敏症豚鼠模型建立成功,并且纯化的海虾过敏原组分应用于ELISA检测能提高sIgE的检测水平,对海虾过敏症的体外诊断和治疗有一定的意义。; 向军俭李小迪王宏邓宁张在军杨红宇; 关键词：纯化特异性IGE

牛乳清蛋白BALB/c小鼠过敏模型的建立及其优化被引量：9: 2006年; 目的:建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型,并探讨不同佐剂、免疫途径及饲料纯度等因素对建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型的影响。方法:用不含牛乳及乳制品的特制饲料饲养BALB/c小鼠以乳清蛋白致敏,间接ELISA法测定特异性IgE,用荧光法检测体外激发小鼠致敏肥大细胞释放的组胺。结果:成功建立BALB/c小鼠乳清蛋白过敏模型,条件优化结果显示,氢氧化铝佐剂结合皮下注射最好地促进特异性IgE产生;用不含牛奶及其他食物过敏原的特制饲料饲养的小鼠特异性IgE的本底水平低,适于建立小鼠过敏模型,荧光法检测肥大细胞释放组胺的结果与特异性IgE检测结果一致。结论:用特制饲料饲养小鼠,氢氧化铝佐剂结合皮下注射乳清蛋白适于建立BALB/c小鼠过敏症模型,该模型可用于过敏症机理研究。; 毛露甜向军俭张在军杨红宇邓宁; 关键词：乳清蛋白食品过敏原特异性IGE 组胺

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广东省自然科学基金(36708)