国家自然科学基金(30771955)
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 相关作者：季明春龚卫娟潘兴元钱莉李凯更多>>
- 相关机构：扬州大学蚌埠医学院更多>>
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- T细胞受体基因转染过继性免疫治疗的研究进展
- 2009年
- 利用T细胞进行过继性免疫治疗是治疗病毒感染性疾病和肿瘤的理想方法，但是用于治疗的T细胞的特异性、亲和性和数量等限制了其应用，如何获得特异、高效、一定数量的T细胞是目前亟待解决的问题。采用TCR基因转染的方法，将特异性高亲和力TCR转移到受体的T细胞中，可以特异性杀伤受体体内的肿瘤细胞。
- 刘静季明春
- 关键词：T细胞受体过继性免疫治疗
- 可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化被引量：3
- 2008年
- 目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。
- 钱亚云刘静张伟潘兴元龚卫娟季明春
- NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系
- 2016年
- 目的探讨NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系。方法动态监测NOD鼠外周血中CD_4^+NKG2D^+T及CD8+NKG2D^+T细胞在不同周龄频率。利用IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,对其外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率进行分析。将磁珠分选所得CD_4^+NKG2D^+T细胞分别与经CFSE标记的纯CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞共培养4 d,检测体系中CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞CFSE的荧光强度变化。结果 NOD鼠外周血CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率均随其1型糖尿病疾病进程发展逐渐升高,且二者之间呈正相关。IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T细胞频率随CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率降低显著下降。与单独培养的CD_4^+NKG2D-T细胞相比,加入CD_4^+NKG2D^+T细胞的培养体系中,CD_4^+NKG2D-T细胞增殖加快。但CD_4^+NKG2D^+T细胞对CD_8^+T增殖作用不明显。结论 NOD鼠体内存在着一群与1型糖尿病疾病进程正相关的CD_4^+NKG2D^+T细胞,且该群细胞极有可能是通过直接作用于CD_4^+NKG2D-T细胞而间接对CD_8^+T细胞产生作用。
- 王宇航马旻轩徐娅雯李凯潘兴元钱莉龚卫娟季明春
- 关键词：CD8^+T细胞NOD鼠
- 小鼠CD_(40L)基因的克隆与真核细胞表达研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建含有小鼠CD40L基因的重组真核表达载体,并鉴定其在转染细胞中的表达。方法自活化的T细胞经RT-PCR得到小鼠CD40L的cDNA基因,将其克隆入真核表达载体pCMV-Myc,获得重组质粒pCMV-Myc/CD40L,酶切及测序鉴定;脂质体法转染CHO细胞,使用RT-PCR及流式细胞技术分别从mRNA和蛋白水平对CD40L的表达进行检测。结果将pCMV-Myc/CD40L真核表达载体转染CHO细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测证实小鼠CD40L在真核细胞中暂态表达。结论成功地建立表达小鼠CD40L基因的重组真核表达载体,为进一步研究其生物学特性及肿瘤的基因治疗提供了基础。
- 钱莉王骞龚卫娟李国才季明春
- 关键词：真核表达载体基因治疗
- 酵母表面展示IGRP_(206-214)-H-2K^d单链三聚体及对NOD鼠CD8^+T细胞的活化作用被引量：2
- 2016年
- 通过酵母展示表达IGRP206-214-H-2Kd单链三聚体,筛选诱导条件获得高表达的IGRP206-214-H-2Kd单链三聚体酵母用于研究该三聚体诱导NOD鼠CD8+T细胞活化的作用。结果表明:转染IGRP206-214-H-2Kd单链三聚体的真核表达载体的酵母,在含2%D-半乳糖的酵母培养基中,20℃诱导18h,有77.1%的酵母能稳定表达IGRP206-214-H-2Kd单链三聚体蛋白。展示酵母与NOD鼠脾脏细胞共培养24hCD69+表达量最高,占CD8+T细胞的1.89%,共培养96h,CD25+表达量最高,占CD8+T细胞的4.25%,说明酵母展示获得的酵母能稳定表达IGRP206-214-H-2Kd单链三聚体蛋白对NOD鼠CD8+T细胞具有活化作用。
- 徐娅雯李凯王宇航马旻轩伏娇潘兴元钱莉龚卫娟季明春
- 关键词：CD8+T细胞NOD鼠
- IGRP_(206-214)dtSCT四聚体偶联皂草素的制备及初步应用被引量：1
- 2016年
- 以InsB15-23dtSCT原核表达载体为基础,制备dtSCT型IGRP206-214H-2Kd原核表达载体;将获取的融合蛋白IGRP206-214H-2Kd单体,生物素化制成IGRP206-214dtSCT四聚体,进一步将皂草素与IGRP206-214dtSCT四聚体偶联;流式检测皂草素偶联IGRP206-214dtSCT四聚体与NOD鼠脾脏淋巴细胞共孵育体系中IGRP206-214特异性细胞毒性T细胞(CTL)。结果表明:皂草素偶联IGRP206-214dtSCT四聚体与NOD鼠脾脏淋巴细胞共孵育后,IGRP206-214特异性CTL的频率与PBS对照组相比明显下降(P<0.001)。说明偶联皂草素的IGRP206-214dtSCT四聚体在体外能够靶向清除NOD鼠抗原特异性CTL。
- 王宇航窦延徐娅雯马旻轩李凯潘兴元钱莉龚卫娟季明春
- 关键词：CD8+T细胞1型糖尿病NOD鼠
- bcr启动子驱动增强绿色荧光蛋白表达转基因小鼠的制备和初步鉴定
- 2015年
- 目的制备bcr启动子驱动．增强绿色荧光蛋白（bcr—EGFP）转基因小鼠模型，在活体水平验证bcr启动子的启动特异性。方法以慢性髓性细胞白血病（cML）细胞株K562细胞基因组为模板，PCR扩增1．1kbbcr启动子，在扩增产物的上、下游引物加入了AseI、EcoRI酶切位点．AseI、EcoRI双酶切pEGFP—N1真核表达质粒载体，去除载体自身的CMv启动子，并将1．1kbbcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游，构建pbcr-EGFP真核表达载体，并将此重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞，进行表达验证。显微注射法制备bcr-EGFP转基因小鼠，采用PCR方法进行初步整合检测。结果显微注射583枚受精卵，移植到30只受体鼠输卵管中，受体鼠妊娠26只，共生产首建鼠90只，经过PCR检测，甜（♀）、36挣（♂）和81#（♂）等3只F0代为转基因整合阳性鼠。结论成功制备了bcr—EGFP转基因小鼠，为进一步研究bcr启动子在CML转基因小鼠模型制备的安全性和可靠性提供线索和帮助。
- 刘雷王宝珠劳荃蘅刘民薛整风季明春
- 关键词：转基因小鼠
- 膜表达型InsB_(15-23) H-2K^d dtSCT诱生小鼠特异性CTL细胞研究被引量：2
- 2014年
- 通过SOE-PCR构建膜表达型二硫键捕获型单链三聚体(dtSCT)真核表达载体,肌肉免疫4~5周龄NOD母鼠,利用流式细胞术检测小鼠外周血和脾脏中InsB15-23特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞频率。结果表明:dtSCT组NOD小鼠的外周血中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为1.93%±0.55%,与空质粒对照(0.22%±0.11%)有极显著差异(P<0.01);脾脏中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为0.83%±0.31%,与空质粒对照(0.37%±0.20%)亦有极显著差异(P<0.01)。说明膜表达型InsB15-23H-2Kd dtSCT分子在小鼠体内得到表达,且具有类似天然pMHC I复合物的功能,能够为InsB15-23特异性CTL细胞的活化增殖提供第1信号。
- 潘兴元梁锴余鸣鸣陈则东窦延季明春
- 关键词：NOD小鼠
