南京市卫生局科研基金(ZKX0206)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 5-氮胞苷诱导心肌组织中c-kit^+干细胞分化的实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的:创建小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSC)分离、培养的方法,借助干细胞表面标记c-kit纯化CSC,并用5-氮胞苷诱导CSC分化为心肌细胞。方法:用酶定时消化方法分离提取小鼠心脏组织中的细胞,进行体外培养;免疫磁珠法纯化c-kit阳性细胞,并用流式细胞仪检测纯化后细胞表面标记c-kit、lin和CD34的表达;以免疫细胞化学染色法检测诱导后心肌特异性蛋白T、连接蛋白-43、心肌细胞特异性结蛋白;结合形态学变化,分析不同诱导条件作用结果之间的差异。结果:从C57BL小鼠心肌组织中分离消化所得的细胞中,含有一种小而圆形、折光性强的细胞,经传代培养的细胞增殖速度比原代细胞明显为快,存在较多的类似于干细胞增殖和形态学特点的细胞。用免疫磁珠法可以分选出高纯度的c-kit+CSC,这种CSC基本不表达CD34和lin。在不同诱导条件下,此种CSC可以分化为搏动的细胞,并能表达心肌特异性蛋白。结论:从C57BL小鼠心肌组织中可以获得CSC,用免疫磁珠法可以分选出表型为c-kit+-CD34--lin-高纯度的CSC,经5-氮胞苷诱导或改变CSC生长的微环境后,此种细胞可以分化成心肌细胞,且能形成"心肌球"结构。
- 姜宏施广飞
- 关键词：心肌干细胞分化心肌细胞5-氮胞苷
- 心肌干细胞培养和纯化的实验方法研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨心肌干细胞(CSC)体外分离、培养和纯化方法,以建立重复性好、稳定性高的CSC培养的方法。方法:用不同的消化方法来分C57BL小鼠心脏组织中的细胞,将获得的细胞置于自行拟定的心肌干细胞培养液中培养。以c-kit、Sca-1和Sca-1/c-kit作为干细胞标记,用免疫磁珠法纯化细胞。用流式细胞仪、免疫荧光显微镜、激光共聚焦显微镜检测分选后所得细胞表面标记表达,并对比观察分选前后细胞生长情况,进一步了解CSC的生物学特性。结果:①从小鼠心肌组织中分离培养所得的细胞中,含有一种类似于文献报道中所提及CSC形态的细胞。②用免疫磁珠法可以分选出高纯度的CSC,实验中分选出CSC分别具有c-kit+-CD34--lin-、Sca-1+-CD34low-Lin-、Sca-1+-c-kit+-CD34low-Lin-的表型。③分选后的干细胞经过1～2d的滞留期后,贴壁生长的细胞形态相对均一;而传代后细胞贴壁迅速,细胞形态多样。结论:从C57BL小鼠心脏中可以分离、培养获得CSC,并可用免疫磁珠法得以纯化。
- 姜宏施广飞
- 关键词：心肌干细胞细胞培养纯化
