国家高技术研究发展计划(863-2001AA215131)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李德新梁米芳孟祥芝孙玉兰胡孔新更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 用表达T7RNA聚合酶细胞系拯救麻疹病毒微复制子被引量：4
- 2007年
- 构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系,用于提高拯救麻疹病毒微复制子效率。PCR扩增T7RNA聚合酶基因,克隆到真核表达载体,转染Vero细胞,用G418筛选到稳定表达的细胞株Vero/pcDNA3-T7。用Westernblotting证明了T7RNA聚合酶在细胞中的表达。将T7启动子控制绿色荧光蛋白表达的质粒转染该细胞后,绿色荧光蛋白在细胞株中得到表达。反向插入报告基因的微复制子转染感染麻疹病毒的Vero/pcDNA3-T7细胞后,细胞中能够检测到报告基因的表达。用细胞系取代痘苗病毒系统,可以提高拯救效率。
- 修梅红王芹唐丽华曹守春李伟红韦燕陆鹏梁米芳李德新
- 关键词：细胞系麻疹病毒
- 麻疹病毒全长cDNA构建及其感染性的研究被引量：5
- 2004年
- 为发展新型疫苗和改造目前使用的麻疹病毒疫苗,以麻疹病毒疫苗株为模板,构建了具有感染性的麻疹病毒cDNA克隆。用RT-PCR分6段扩增出麻疹病毒全长基因,通过酶切、拼接构建麻疹病毒疫苗株CC-47的全长正链cDNA序列,并精确地置于T7启动子控制下与丁型肝炎病毒核酶序列之前。克隆麻疹病毒CC-47株蛋白N、P、L编码区质粒并置于T7启动子控制下,用4个质粒共转染哺乳动物细胞,在表达T7RNA聚合酶的重组痘苗病毒VTF7-3的作用下进行病毒拯救。经免疫荧光、PCR等方法检测证实,获得了具有感染性的麻疹病毒。所拯救的病毒在哺乳动物细胞连续传3代后,仍能检出病毒抗原和核酸。
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- 关键词：麻疹病毒全长CDNA感染性疫苗
