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鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建被引量：3: 2008年; 鸡β-防御素是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal-2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM-TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM-T-Gal-2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL-c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL-c2x-Gal-2重组质粒。; 王海英祁克宗彭开松孙洁; 关键词：克隆

防御素肽研究进展被引量：1: 2010年; 防御素是近年来发现的一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽,由38～100个氨基酸残基组成,且分子内富含二硫键,在天然性免疫和获得性免疫中发挥着重要的作用。由于其具有牢固的分子骨架、广泛的分布及生物活性功能,通过研究开发其在药用方面的价值,为人们替代传统抗生素提供了新途径。作者简述了防御素的结构特征与功能、分布、生物学活性、模拟肽的设计及应用前景。; 屠利民彭开松王莹莹祁克宗; 关键词：防御素生物学活性

细菌对阳离子抗菌肽产生耐药性的分子策略: 生物源的阳离子抗菌肽是物种亿万年进化中保留的有效天然防御(免疫)因子,已成为近年国内外寻求传统抗生素替代品的焦点,并部分进入了临床试验阶段。但目前对阳离子抗菌肽和细菌之间斗争的许多细节,还没有彻底阐明,至于阳离子抗菌肽的...; 彭开松龚月娟佘锐萍祁克宗涂健; 关键词：细菌耐药机制; 文献传递

鸡β防御素Gallinacin-8基因乳酸菌表达载体的构建: 鸡β-防御素gal-8是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。本研究从已构建的重组质粒pGEM-T Easygal-8-8中克隆出gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pNZ8048,构建重组质粒pNZ804...; 杨涛钟瑾涂健彭开松祁克宗; 关键词：原核表达乳酸乳球菌; 文献传递

鸡β-防御素Gallinacin-8基因片段的克隆与序列分析被引量：1: 2008年; 本试验从鸡的肝脏中提取总RNA,根据GenBank公布的鸡β-防御素Gallinacin-8(简称gal-8)基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术扩增出大小为201bp的鸡β-防御素gal-8的基因片段。通过序列分析得知其由66个氨基酸组成,包括20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片肽及41个氨基酸的成熟肽。BLAST分析表明与GenBank中已公布的序列相比较缺失2个碱基,其同源性达到98%。将该基因克隆进pGEM-T Easy载体中,并转化大肠杆菌感受态DH5α,经筛选和测序鉴定获得了阳性重组质粒。从重组质粒中扩增出的成熟肽,大小约123bp。试验为进一步构建重组核蛋白及表达具有广谱抗微生物活性的防御素提供了实验基础。; 杨涛祁克宗彭开松涂健高恒江龙海; 关键词：Β防御素克隆

荷斯坦奶牛杀菌/通透性增加蛋白氮端基因原核表达载体的构建被引量：2: 2009年; 根据高恒[5]的方法,应用RT-PCR技术,从荷斯坦奶牛嗜中性粒细胞mRNA中扩增出杀菌/通透性增加蛋白N端DNA,将该序列与原核表达载体pGEX-4T-1连接,构建重组质粒pGEX-4T-1-BPI。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。实验结果表明获得了BPIN端长度为714bp的DNA序列,序列分析证实在第503位出现了点突变。重组质粒诱导表达后,经SDS-PAGE电泳检测重组蛋白约在52kD处出现特异性蛋白条带,与目的蛋白的分子量一致。表明实验成功地获得了BPI重组蛋白。; 高恒宋延华温纳相祁克宗; 关键词：荷斯坦奶牛

鸡β-防御素-2(Gal-2)基因在大肠杆菌中的融合表达与纯化被引量：3: 2008年; 本试验通过优化基因工程菌pMAL-c2X-Gal-2-TB1的表达条件,找到使融合蛋白表达量达到最大的最佳表达条件,后采用Amylose树脂预装柱对可溶性目的蛋白分离、纯化和FactorXa因子酶切,为了得到Gal-2,再次过柱纯化,每一步产物用SDS-PAGE方法检测。结果融合蛋白的分子量约为50KD,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的36%;纯化后的融合蛋白纯度达90%以上,且经再次纯化得到纯度较高的Gal-2。; 王海英; 关键词：蛋白纯化

安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)在毕赤酵母细胞内的表达: 2010年; 目的:构建安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)基因的真核表达载体,表达gal-2蛋白。方法:提取鸡肺组织中总RNA,应用RT-PCR技术获得鸡β-防御素2(gal-2)全长cDNA基因片段,经PCR获得gal-2的成熟肽基因片段,并将其克隆入真核表达载体pPIC3.5K中,构建重组表达质粒pPIC3.5K-gal-2;经测序鉴定正确后,电转化巴斯德毕赤酵母菌GS115。经甲醇诱导表达gal-2蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:通过电转化方法成功将经酶切线性化的重组表达质粒整合入宿主菌基因组中,并在甲醇诱导的条件下成功表达出了目的蛋白。结论:成功构建了重组真核表达质粒pPIC3.5K-gal-2;并借助巴斯德毕赤酵母细胞表达出了gal-2的蛋白,其分子量大约为4.1kDa。该研究为下一步应用基因工程和蛋白质工程技术进行gal-2蛋白的规模化生产奠定了基础。; 屠利民彭开松涂健王强王莹莹祁克宗; 关键词：蛋白表达

4株芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析被引量：4: 2018年; 从水产饲料中分离得到4株菌株,分别命名为A2、A3、A4、A5。通过16S r DNA基因序列分析,结合电镜结构观察、生长特征分析、产酶试验以及抑菌试验发现,菌株细胞形态为杆状,革兰氏染色呈阳性;A2、A4、A5菌株最适生长温度为45℃,A3菌株最适生长温度为50℃;4个菌株均产蛋白酶,A2菌株产蛋白酶能力最强;A2、A3菌株产淀粉酶,A4、A5菌株基本不产淀粉酶;4株菌株对大肠杆菌都没有抑菌作用,A2和A5菌株对共培养的沙门氏菌分别有31.2%和22.9%的抑菌效果。序列分析表明,A2菌株属于嗜热枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),A3、A4、A5菌株属于嗜热地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。通过对4株芽孢杆菌进行初步分析研究,可为后续试验以及微生态饲料添加剂的开发及应用奠定基础。; 石水琴蒋雯袁林祁克宗涂健宋祥军; 关键词：芽孢杆菌生物学特性嗜热微生物饲料添加剂

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