国家重点基础研究发展计划(2011CB504505)
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 相关作者：邱建华米文娟宋勇莉邢蔚陈俊更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院新疆生产建设兵团更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 顺铂致聋后大鼠耳蜗螺旋神经元NeuroD的表达被引量：2
- 2012年
- 目的检测神经分化因子NeuroD在大鼠耳蜗螺旋神经元顺铂损伤后的表达变化。方法通过免疫组织化学及Real-TimePCR技术,观察耳蜗螺旋神经元损伤1d、3d、5d后NeuroD的表达变化。正常成年SD大鼠32只随机分为对照组(生理盐水5ml/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),用药1d组(顺铂5mg/kg,腹腔注射),用药3d组(顺铂5mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续3d),用药5d组(顺铂5mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),每组8只,建立顺铂耳毒性模型。采用Real-TimePCR、免疫组织化学染色检测不同时间螺旋神经元NeuroD的mRNA及蛋白表达变化。结果成功建立顺铂耳毒性大鼠模型,随着用药时间的延长,神经分化因子NeuroD在耳蜗螺旋神经元中呈动态变化。NeuroD的mRNA和蛋白表达在用药1d及3d组分别为2.17±0.39、1.15±0.20及7.02±0.69、2.42±0.40,与对照组及用药5d组比较具有统计学意义(P值<0.01)。结论 NeuroD在用药1d后开始增加,3d后达到高峰,5d后下降;在用药早期有一过性表达增强,后期表达下降同时听力损失明显。表明NeuroD可能参与顺铂损伤螺旋神经元后的修复过程。
- 王娟王亚菲蒋兴旺米文娟邱建华
- 关键词：NEUROD耳蜗螺旋神经元
- miR-182可以促进耳蜗前体细胞分化为毛细胞被引量：6
- 2014年
- 目的探讨miR-182诱导耳蜗前体细胞向毛细胞分化的作用及机制。方法从新生大鼠耳蜗中分离培养耳蜗前体细胞并用血清诱导分化,BrdU、Nestin免疫荧光染色鉴定细胞自我增殖能力;myosinⅦa和phalloidin免疫荧光染色鉴定其是否具有分化为毛细胞的潜能。分别利用miR-182 mimics和siRNA在新生大鼠耳蜗前体细胞中过表达和低表达miR-182,然后在细胞诱导分化7天后,用流式细胞仪检测分化细胞中myosinⅦa阳性细胞比例,用Western-blot检测支持细胞标志分子中Sox2的变化。结果使用miR-182 mimics进行过表达后,耳蜗前体细胞分化为myosinⅦa阳性表达的细胞比例显著高于对照组,使用miR-182 siRNA进行低表达后此比例显著低于对照组。Western-blot检测显示,Sox2在miR-182 mimics组较对照组降低,miR-182 siRNA组较对照组增加。结论过表达miRN182可以促进耳蜗前体细胞向毛细胞方向分化,ox2可能是此过程中的靶基因。
- 邢蔚闫辉米文娟陈俊邱建华
- 关键词：分化毛细胞
- 噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31表达的影响
- 2012年
- 目的观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31(Cx31)表达的变化。方法选用成年雄性Balb/c小鼠44只,随机分为噪声组和对照组,每组22只。两组小鼠均在实验前检测听性脑干反应(ABR),随后应用声刺激器给予噪声组小鼠高强度白噪声(115dB SPL,6h/d,共2天),并在噪声暴露结束后1h再检测噪声组小鼠ABR。对照组不予噪声刺激。于噪声暴露后4h,每组各取4只小鼠耳蜗做冰冻切片,其余18只小鼠提取耳蜗外侧壁组织总RNA,通过免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx31蛋白的表达,荧光实时定量PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx31mRNA的表达。结果对照组小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx31特异性荧光,血管纹处未见阳性荧光;噪声组小鼠耳蜗外侧壁免疫荧光染色阳性反应较对照组减弱,Cx31mRNA表达量明显低于对照组。结论噪声能下调Cx31在小鼠耳蜗外侧壁组织的表达,Cx31可能参与了噪声性聋的发病机制。
- 王亚菲王娟张鹏志米文娟蒋兴旺王洁邱建华
- 关键词：噪声耳蜗缝隙连接蛋白小鼠
- 庆大霉素耳毒性模型大鼠耳蜗凋亡诱导因子表达及阿司匹林的拮抗作用被引量：3
- 2014年
- 目的研究庆大霉素耳毒性模型大鼠耳蜗凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)表达及阿司匹林的拮抗作用。方法 20只SD大鼠随机分为阿司匹林(acetylsalicylic acid,ASA)+庆大霉素(GM)组(ASA+GM组)和庆大霉素组(GM组),每组各10只动物,GM组腹腔注射GM 120mg·kg-1·d-1,连续21天,ASA+GM组先给予ASA 100mg·kg-1·d-1灌胃,1小时后皮下注射等剂量GM,连续21天;两组动物分别于用药前、用药第7、14、21d行ABR检测,并于用药21d后进行耳蜗毛细胞计数及免疫荧光染色观察两组大鼠耳蜗AIF表达。结果用药第7、14、21dASA+GM组ABR反应阈均低于GM组(P<0.05);用药21d时ASA+GM组耳蜗毛细胞缺失率为7.20%,明显低于GM组(21.51%)(P<0.05),且在两组耳蜗毛细胞亡处均见AIF高表达。结论阿司匹林能拮抗庆大霉素的耳毒性,庆大霉素损伤耳蜗外毛细胞时AIF参与了细胞的凋亡。
- 陈晓栋王烨丁忠家杨佳蕾王曦赵昱岳波陈福权邱建华
- 关键词：阿司匹林庆大霉素毛细胞凋亡凋亡诱导因子
- 谷氨酸损伤体外培养大鼠螺旋神经元中凋亡诱导因子的表达与分布被引量：2
- 2014年
- 目的观察不同浓度谷氨酸（Glu）损伤螺旋神经元中凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor,AIF）的表达与分布变化,探讨利用谷氨酸损伤体外培养螺旋神经元是否与AIF凋亡途径相关。方法取40只出生后0~3天SD仔鼠螺旋神经元行体外培养,所得培养细胞平均分为正常组和10mM、20mM、40mM Glu组,正常组仅给予正常SGNs培养液培养,其余三组分别加入相应浓度谷氨酸和SGNs培养液,培养48h后,应用光学显微镜、免疫荧光染色及实时荧光定量PCR方法观察四组中SGN细胞形态、SGN中AIF的分布及AIF、钙蛋白酶（calpain）、半胱氨酸天冬氨酸3（caspase 3）的表达变化;用TUNEL法观察细胞凋亡。结果 20mM和40mM Glu组SGNs细胞形态改变和细胞凋亡明显,并伴有AIF核转位;不同浓度Glu组AIF和calpain基因表达明显高于正常组（P〈0.05）,但caspase 3表达无明显升高（P〉0.05）。结论谷氨酸损伤体外培养的螺旋神经元过程中,AIF凋亡途径参与了细胞凋亡,calpain的高表达也促进了兴奋性神经递质对SGNs的损伤,但caspase3途径无明显作用。
- 丁忠家唐晓旭陈鑫宋勇莉米文娟王剑陈福权邱建华
- 关键词：螺旋神经元谷氨酸凋亡诱导因子钙蛋白酶
- 热休克蛋白60在药物性聋大鼠模型中的表达变化被引量：3
- 2016年
- 目的探讨HSP60在大鼠耳蜗中的表达及硫酸卡那霉素损伤后的表达变化。方法正常成年雌性SD大鼠20只随机分为两组:对照组(生理盐水)和实验组(硫酸卡纳霉素),按500mg/kg剂量每天给药一次,连续腹腔注射21天。ABR检测听力变化;实时定量PCR和Western Blot分别检测HSP60的m RNA和蛋白表达量的变化;免疫荧光染色观察HSP60在耳蜗中的表达变化及分布。结果 ABR检测显示实验组较对照组明显升高(P<0.05)。实时定量PCR、WesternBlot和基底膜铺片免疫荧光染色的结果显示实验组HSP60表达量降低(P<0.05)。冰冻切片免疫荧光染色,观察到HSP60表达于Corti器上的支持细胞内。结论 HSP60表达于支持细胞,正常生理情况下即表达,慢性药物中毒性耳聋模型中表达量降低,推测HSP60可能参与了药物性耳聋的发生过程。
- 田克勇宋勇莉孙菲王人凤岳波王敏邱建华
- 关键词：热休克蛋白60听力损失支持细胞
- 硫酸卡那霉素联合呋塞米快速致聋大鼠模型的研究被引量：5
- 2014年
- 目的观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)与呋塞米(furosemide,Fur)联合用药建立药物性快速致聋大鼠动物模型的效果。方法 32只SD大鼠随机分为A组(KM+Fur后1天组)、B组(KM+Fur后7天组)、C组(KM+Fur后14天组)、D组(对照组),每组8只动物。A、B、C三组分别经一次性腹腔注射KM 500mg/kg,30分钟后再经腹腔注射Fur 0.2ml/kg,空白对照组按体重给予相同剂量生理盐水。各组在相应的时间点完成听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测当天,分别行耳蜗基底膜铺片及扫描电镜观察耳蜗毛细胞损伤情况,免疫荧光染色观察螺旋神经节细胞亡情况。结果 A、B、C组各频率ABR阈值较正常对照组明显升高(P<0.05);而A、B、C组各频率ABR反应阈差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组耳蜗底回外毛细胞明显缺失,纤毛排列紊乱,螺旋神经节细胞的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的表达量较正常对照组均明显增加(P<0.05)。结论硫酸卡那霉素和呋塞米联合单次腹腔用药24小时后大鼠ABR反应阈明显增高,并可见耳蜗底回毛细胞的明显缺失,KM+Fur联合应用是简单、快速而有效的大鼠耳聋动物模型建模方法。
- 闫辉邢蔚宋勇莉王人凤陈俊邱建华
- 关键词：硫酸卡那霉素呋塞米耳聋动物模型
