辽宁省教育厅基金(2008758)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- shRNA干扰Rab9 GTPase表达对麻疹病毒野生株体外增殖的抑制作用
- 2009年
- 目的构建Rab9 GTPase短发夹RNA(shRNA)表达载体,观察其对Rab9 GTPase基因表达和麻疹病毒野生株体外增殖的抑制作用。方法参照GenBank中Rab9 GTPase基因序列设计合成2对Rab9 GTPase基因特异性shRNA,定向克隆入表达载体,构建重组表达载体,酶切鉴定和序列分析证实后脂质体法转染U937细胞,然后感染麻疹病毒野生株,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测转染细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达水平;标准蚀斑试验测定病毒滴度;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;RT-PCR检测转染细胞内双链RNA依赖蛋白激酶(PKR)和2′-5′寡腺甙酸合成酶(OAS-1)的mRNA水平。结果酶切和序列分析证实,成功构建了靶向Rab9 GTPase基因的shRNA表达载体。2个shRNAs均可特异性抑制U937细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达,最高抑制率分别为(90.5±0.2)%和(92.1±0.3)%;蚀斑试验结果表明,shRNAs可以有效抑制麻疹病毒野生株体外增殖,其抑制率可达到90%以上;流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率无明显变化;RT-PCR检测PKR和OAS-1的mRNA水平转染前后无明显变化。结论成功构建Rab9 GTPase特异性shRNA表达载体。shRNAs通过特异性抑制Rab9 GTPase基因表达抑制麻疹病毒野生株体外增殖。
- 史俊岩王舰王斯王美莲罗恩杰
- 关键词：GTPASESHRNA增殖
- 靶向Rab9 GTPase基因shRNA体外抑制麻疹病毒Edmonston株复制的研究被引量：1
- 2011年
- 目的构建靶向Rab9 GTPase基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,观察shRNA对Rab9 GTPase表达和麻疹病毒Edmonston株体外复制的抑制效应。方法按照shRNA的设计要求和Rab9 GTPase基因序列构建靶向Rab9 GTPase基因shRNA表达载体,表达载体经酶切鉴定和序列分析后通过脂质体法转染Vero-E6细胞,然后感染麻疹病毒Edmonston株,通过RT-PCR和Western blot检测转染细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达水平;通过标准蚀斑试验检测病毒滴度,观察shRNA对麻疹病毒Edmonston株复制的抑制效应。结果靶向Rab9 GTPase基因的shRNA可特异性抑制Vero-E6细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达,最大抑制率分别为(86.3±0.7)%和(87.6±0.7)%;蚀斑试验检测Rab9 GTPase基因表达沉默后对麻疹病毒Edmonston株体外复制抑制率达90%以上,且抑制效应至少可持续32 d。结论靶向Rab9 GTPase基因的shRNA能特异性抑制Rab9 GTPase表达和麻疹病毒Edmonston株体外复制,有望成为抗麻疹病毒感染治疗的核酸药物。
- 史俊岩王美莲刘兵罗恩杰
- 关键词：GTPASESHRNA
