国家自然科学基金(30771863)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 相关作者：李晖李凤兰孙美娜赵汉东何娟更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学天津现代职业技术学院齐齐哈尔市第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目黑龙江省大学生创新创业训练计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SCN5A基因单核苷酸多态性位点H558R与慢型克山病合并高血压及其心电图特征的相关性研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究克山病地区人群SCN5A基因单核苷酸多态性（SNP）位点H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心律失常发生之间的关系。方法2006—2010年，在黑龙江省齐齐哈尔市富裕县，选取39例慢型克山病合并高血压患者作为病例组，63例高血压患者作为对照组，应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析以及PCR直接测序技术。检测病例组与对照组人群SCN5A基因的Exon12SNP位点H558R，并检查病例组与对照组的心电图特征，采用病例对照研究分析方法分析H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心电图特征之间的相关性。结果H558RTC基因型可能会降低慢型克山病合并高血压的发病风险[比值比（OR）=0．288，95％可信区间（a）：0．104～0．794，P=0．016]以及降低慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的风险（OR=0．061，95％CI：0．006～0．612，P=0．017）。结论SCN5A基因SNP位点H558R可能是慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的易感因子。
- 姜山方传丰刘汉文舒畅程禾何娟李凤兰李晖
- 关键词：克山病单核苷酸多态性SCN5A基因心率失常
- 悬浮培养CHO细胞生产重组人促红细胞生成素条件的优化被引量：1
- 2012年
- 目的:通过对贴壁培养CHO细胞筛选驯化,得到高表达的细胞后进行悬浮培养生产重组人促红细胞生成素(rHuEPO)。方法:利用96孔板和24孔板对CHO细胞进行筛选,得到高表达细胞株后进行驯化,使其适合悬浮培养,经过摇瓶扩增后接种到生物反应器中无血清培养,每天监测葡萄糖含量,测rHuEPO表达量。结果:悬浮培养CHO细胞生产rHuEPO,生产周期短,表达量比贴壁培养高出很多,操作方便,减少污染,易于放大,并建立了适合悬浮培养的CHO细胞株,为工业化悬浮培养CHO细胞生产rHuEPO提供了技术基础。结论:经过工艺优化后利用无血清悬浮培养生产促红细胞生成素平均表达量较贴壁培养高,生产周期短,有利于降低生产成本。
- 杨栋牛红军陆刚史嘉林孙浩明李晖
- 关键词：重组人促红细胞生成素
- 低氧对大鼠心肌细胞蛋白激A活性与SCN5A基因表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究低氧对培养大鼠心肌细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)与SCN5A基因表达的影响。方法将原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞随机分为5组:对照组、低氧(5%CO2+2%O2+93%N2)培养1h组、6 h组、12 h组和24 h组,利用非放射性方法测定各组细胞内PKA活性,利用RT-PCR和Western blot等方法检测各组SCN5A基因表达情况。结果各组PKA活性:低氧1h组和低氧6 h组高于正常组(P<0.01),低氧12 h组和24 h组低于正常组(P<0.01)。SCN5AmRNA相对表达量与蛋白质表达量:低氧1h组和低氧6h组显著高于对照组;低氧12 h组和低氧24 h组显著低于对照组。结论低氧对培养细胞内PKA活性与SCN5A基因的表达有一定调节作用,且对PKA的作用早于对SCN5A基因表达的作用,PKA可能参与影响大鼠心肌细胞缺氧后SCN5A基因的表达。
- 马宁李凤兰陈诗慧李金波刘端阳李晖
- 关键词：蛋白激酶A心肌细胞低氧SCN5A
- 硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响
- 2014年
- 目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组，分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后，用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞SEPSECS蛋白表达，流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测各组细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13，SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）；SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）。转染后，各组细胞周期未见明显改变（P 均〉0.05）。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时，SEPSECS低表达组MDA含量[（15.8±0.5）、（19.6±1.5）μmol/L]明显高于对照组[（12.4±0.1）、（17.1±0.5）μmol/L，P均〈0.05]，SEPSECS高表达组MDA含量[（10.8±0.4）、（14.2±1.1）μmol/L]明显低于空载体转染组[（12.7±0.7）、（16.2±1.1）μmol/L，P均〈0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低，且 H2O2为800、1000μmol/L 时，SEPSECS 低表达组SOD 含量[（7.7±0.4）、（2.4±0.3）μmol/L]明显低于对照组[（10.0±1.0）、（6.0±0.6）μmol/L，P均〈0.05]， SEPSECS高表达组SOD含量[（1
- 赵汉东孙美娜李凤兰李晖
- 关键词：过氧化氢细胞培养技术
- α-芋螺毒素特异性结合受体-神经型烟碱乙酰胆碱受体的同源模建及功能预测被引量：5
- 2012年
- 目的探讨神经型烟碱乙酰胆碱受体能被其竞争性拮抗剂α-芋螺毒素选择性阻断的机理。方法采用同源模建的方法构建神经型烟碱乙酰胆碱受体α-7亚型的三维空间结构,并利用分子对接的方法与已知空间构像的α-芋螺毒素对接。结果已构建的神经型烟碱乙酰胆碱受体α-7亚型结构合理,并与已知空间构像的α-芋螺毒素对接成功。结论传统的烟碱型乙酰胆碱受体拮抗剂缺乏专一性,而靶向神经元神经型烟碱乙酰胆碱受体的α-芋螺毒素种类多,特异性强,与不同亚单位组成的受体亲和力不同,应用潜力很大。
- 赵雪娇姜山何娟孙美娜李晖
- 关键词：同源模建分子对接
- 低硒对小鼠心肌钾离子通道基因mRNA表达的影响．被引量：1
- 2014年
- 目的研究钾离子通道基因mRNA在低硒小鼠心肌组织中的表达。方法C57BL／6小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22g，按体质量随机分为4组，每组10只小鼠（雌雄各半），其中低硒4周组、12周组、24周组分别采用低硒饲料（硒含量为0．004mg／kg）喂养4周、12周、24周，对照组则给予正常饲料（硒含量为0．256mg／kg）。将各组小鼠断颈处死，取小鼠心脏，Trizol法提取RNA，采用实时荧光定量PCR（reM—timePCR）方法检测钾离子通道基因（KCNA4、KCND2、KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNJl2、KCNQl）mRNA的表达。结果低硒4周组钾离子通道基因KCNA4、KCND2mRNA[（25．3±0．09）、（4．85±0．05）]表达高于对照组（1．00±0．00、1．00±0．00，P均〈0．05）；低硒24周组钾离子通道基因KCNJl2mRNA（22．7±0．10）表达高于对照组（P〈0．05）；KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNQlmRNA表达与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论低硒能够影响小鼠心肌钾离子通道基因的表达。
- 孙美娜李凤兰赵汉东李晖
- 关键词：硒小鼠钾离子通道
- 低硒小鼠氧化应激与不同组织线粒体DNA D-Loop区突变的相关性研究被引量：1
- 2011年
- 目的初步探讨低硒、氧化应激和线粒体DNA D-Loop区突变三者之间的相关性。方法采用人工饲养的方法建立低硒小鼠模型,分为低硒30天、90天和正常组;原子吸收法检测肝脏硒含量;HE染色检测低硒对小鼠各脏器(心脏、肝脏、肾脏、脑)的病理形态学影响;基因芯片检测氧化还原酶类基因的表达并通过检测机体GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)、SOD(超氧化物歧化酶)和MDA(丙二醛)的含量进行机体抗氧化应激能力的检测;PCR-SSCP技术结合DNA测序筛选线粒体DNA D-Loop区的突变。结果成功建立低硒小鼠模型;低硒小鼠各脏器(心脏、肾脏、脑)均出现不同程度的病理形态学改变;低硒状态下机体处于高氧化应激状态,且随着低硒时间的延长机体的抗氧化状态减弱。在低硒组和对照组中均发现线粒体DNA D-Loop区存在一个多态性位点16 154位(A/T)rs33254715。结论低硒与单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点:16 154(A/T)的发生并无直接联系,它既不随着低硒时间的延长而积累,也不存在组织特异性。
- 钟冉李凤兰张学凤崔健初尔复陈德庆李晖
- 关键词：低硒氧化应激线粒体DNA单核苷酸多态性
- 饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1与硒蛋白P表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮用蒸馏水，第12周断颈处死；低硒各组饲以低硒饲料（含硒量为0．015mg／kg），分别于第4、12、24周时断颈处死。采用蛋白印迹（Western blot）法检测小鼠肝、肾、脑组织SBPl与SelP蛋白表达。结果低硒4、12、24周组小鼠肝组织中SBP1和SelP蛋白表达分别为0．11±0．01、0．36±0．01、0．59±0．02和0．41±0．01、0．39±0．02、0．25±0．02；肾脏组织中分别为0．60±0．03、0．20±0．02、0．03±0．01和O．88±0．01、0．73±0．03、0．85±0．02；脑组织中分别为0．54±0．03、0．11±0．01、0．01±0．01和0．50±0．02、0．49±0．03、0．38±0．02。低硒各组小鼠肝脏、肾脏、脑组织SBP1、SelP蛋白表达与对照组（1．00±0．00、1．00±0．00）比较明显降低（P均〈0．05），其中各脏器中SBPI的表达量随低硒喂养时间的延长各有不同．肝脏先降低后回升，肾脏和脑组织则持续降低。结论低硒饮食对小鼠肝、肾、脑组织内SelP和SBP1的表达量有一定的影响．
- 孙美娜赵汉东张一彤李晖
- 关键词：硒硒蛋白P
