重庆市卫生局医学科研项目(06-2-028)
- 作品数：8 被引量：34H指数：4
- 相关作者：吴诚义董华英陈元文蔡建英屈洪波更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学重庆市第五人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学电子电信更多>>
- 上调miR-21表达水平对胃癌Kato Ⅲ细胞中CD44 mRNA及蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨上调微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表达对胃癌KatoⅢ细胞中肿瘤干细胞(CSCs)标志物CD44mRNA及蛋白表达的影响,为胃癌细胞的恶性行为相关研究提供依据。方法:常规培养胃癌KatoⅢ细胞株,分为空白对照组和实验组,实验组又分为KatoⅢ/miR-21组和KatoⅢ/control组,分别予以miR-21模拟物(hsa-miR-21mimics)或其阴性对照(hsa-miR-21control)转染KatoⅢ细胞;通过荧光定量RT-PCR和Western blotting法分别检测CD44mRNA和蛋白在KatoⅢ/control组细胞和KatoⅢ/miR-21组细胞中的表达水平。结果:miR-21在KatoⅢ/control组细胞和KatoⅢ/miR-21组细胞中的表达水平分别为0.109 91±0.013 99和1.000 00±0.107 41,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);CD44mRNA在KatoⅢ/control组细胞和KatoⅢ/miR-21组细胞中的相对表达水平分别为0.674 58±0.064 53和2.342 23±0.223 47,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);CD44蛋白在KatoⅢ/control组细胞和KatoⅢ/miR-21组细胞中的相对水平分别为0.045 929±0.007 396和0.176 048±0.009 900,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:外源性上调miR-21表达水平能够诱导KatoⅢ细胞中CD44mRNA及蛋白的过表达,可能诱导CD44+胃癌CSCs的转化。
- 蔡建英杨效东周明川
- 关键词：微小RNA-21CD44肿瘤干细胞
- ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌的癌干/祖细胞生物学行为比较被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌的癌干/祖细胞生物学行为差异。方法:通过无血清培养方法获取富含乳腺癌癌干/祖细胞的非粘附乳腺球(mammospheres,MSs):体外无血清培养微球体细胞(mammospheres-derived cells,MSDCs)并绘制生长曲线,评价ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌MSDCs的增值能力;应用无血清连续克隆形成实验,计算MSDCs的MSs形成率(mammospheres forming efficiency,MSFE),比较两种MSDCs的自我更新能力;通过添加血清的培养方法诱导MSDCs分化,绘制生长曲线,比较两种MSDCs的分化能力:构建NOD/SCID小鼠模型,比较两种MSDCs移植瘤的生长差异。结果:ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌均能培养出MSs,ER阴性乳腺癌的MSs生长速度快,直径大,包含的细胞数量多;ER阴性乳腺癌的MSDCs具有更强的体外增殖能力、自我更新能力、分化能力和免疫缺陷动物体内致瘤能力。结论:ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌的癌干/祖细胞生物学行为存在明显的差异,两种类型的乳腺癌可能起源于不同的乳腺癌干/祖细胞。
- 董华英吴诚义陈元文
- 关键词：雌激素受体肿瘤干细胞细胞
- 化疗后乳腺癌组织中干细胞微球体的分离、培养及鉴定被引量：6
- 2011年
- 目的:对从接受新辅助化疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织中分离出的化疗微球体(CMSs)进行培养和鉴定,为获取乳腺癌干细胞的新方法的建立提供理论依据。方法:①将获得的CMSs接种在添加生长因子的DMEM/F12培养基中,观察CMSs的生长情况;②通过单克隆形成实验检测化疗微球体细胞(CMSDCs)的克隆形成和自我更新能力;③CMSDCs贴壁培养在含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基中,观察其分化能力;④免疫细胞化学检测CMSDCs及其分化细胞CK14、CK18和CK19的表达;⑤流式细胞术(FCM)检测CMSDCs及其分化细胞中ALDH1+细胞的含量;⑥构建NOD/SCID小鼠移植瘤模型,观察CMSDCs的致瘤能力。结果:CMSs在无血清培养基中继续呈球状生长,3d后球体表面出现坏死的细胞层;CMSDCs可以连续传代形成新的CMSs,新生球体折光性强,表面无坏死层;在添加血清的培养基中的CMSDCs可以分化产生梭形的单层细胞;CMSDCs表达乳腺干细胞标记物CK19,不表达分化标记物CK14和CK18;CMSDCs和分化细胞中ALDH1+细胞的比例分别为为17.41%～23.57%和0.50%～1.28%;103个CMSDCs即可在NOD/SCID小鼠体内形成与原发肿瘤性质相同的移植瘤。结论:CMSs富含乳腺癌干细胞,与悬浮培养所获得的乳腺癌干细胞微球体类似,提示从化疗后的乳腺癌组织中分离癌干细胞微球体可能成为乳腺癌干细胞获取的新途径。
- 董华英吴诚义陈元文
- 关键词：肿瘤干细胞细胞鉴定
- ALDHl与干细胞和肿瘤干细胞的分选鉴定被引量：4
- 2011年
- 乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)是一种可以将醛类氧化为乙酸的胞质溶酶,其在胚胎干细胞和成体干细胞中表达增高,对维持干细胞(stem cell,SC)的"干性"中起着重要作用。近年发现,ALDH1在肿瘤干细胞(cancerstem cell,CSC)中表达也升高。基于ALDH1活性的Aldefluo分析法已成功分选和鉴定造血干细胞、乳腺干细胞和神经干细胞等多种SC,也已成功分选和鉴定白血病干细胞、乳腺癌干细胞、肺癌干细胞、膀胱癌干细胞和头颈部肿瘤干细胞等多种CSC。免疫组化原位染色能有效检测ALDH1活性,从而也可鉴定SC和CSC,目前正在研究将此方法应用于临床评估肿瘤患者的预后。ALDH1已成为分选和鉴定SC和CSC的通用标志物之一,是SC研究的得力工具。
- 董华英吴诚义
- 关键词：干细胞肿瘤干细胞分选
- HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义
- 2013年
- 目的:研究缺氧诱导因子2α(HIF-2α)及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体(MSs)裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制。方法:原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照。免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平。结果:原代MSs具有较强的动物成瘤性。免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达。Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量(P<0.05);HIF-2αmRNA及ABCG2mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量(P<0.05)。结论:HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制。
- 范原铭吴诚义屈洪波韩明利
- 关键词：三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2
- ALDH^1+、CD44^+/CD24^-重叠与乳腺癌基因亚型和临床因素的相关性研究被引量：7
- 2013年
- 目的比较ALDH1+和CD44+/CD24-作为人乳腺癌干细胞标志物时在基因亚型中的分布及与临床相关因素相关方面的异同,并了解两种标志物互补后在基因亚型中的分布和临床因素的相关性。方法采用免疫组织化学单染、双染技术检测203例未接受放化疗乳腺癌患者肿瘤组织中重叠表达ALDH1+、CD44+/CD24-表型的情况。结果所有乳腺癌组织中重叠表达ALDH1+/CD44+/CD24-表型为5%,主要存在于HER-2(18%)型和Triple negativ型(45%),病理类型主要为浸润性导管癌,其2年无病生存率低于其他表型(P<0.05)。结论少数乳腺癌患者(5%)为ALDH1+/CD44+/CD24-/low表型,主要存在于Triple negative型,病理类型主要为浸润性导管癌,2年无病生存率低于其他表型。ALDH1+和CD44+/CD24-可能标志不同层次的乳腺癌干细胞,未来采用免疫组织化学技术互补检测ALDH1+和CD44+/CD24-可能预测患者预后。
- 曾妮韩明利屈洪波朱志坤蔡建英陈力学吴诚义
- 关键词：干细胞标志物乳腺癌ALDH1CD24
- 乳腺癌新辅助化疗后的癌干细胞分离培养被引量：11
- 2010年
- 目的从不同周期新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs),观察其体外增殖和分化特性,研究新辅助化疗对BCSCs分离培养的影响。方法在添加生长因子的无血清培养基(serumfree media,SFM)中悬浮培养细胞获得富含BCSCs的微球体(mammospheres,MSs),通过克隆形成实验研究微球体细胞(mammospheres-derived cells,MSDCs)的自我更新能力;在添加5%胎牛血清的培养基中培养MSDCs诱导其分化,研究其分化能力;免疫细胞化学检测ESA和Nestin在MSDCs中的表达;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测MSDCs中的AL-DH1+细胞含量。结果化疗1个周期的5例乳腺癌标本经培养均无MSs形成,化疗2个周期的6例标本经培养其中3例有MSs形成,化疗3个周期以上的9例标本中的5例可以直接分离出MSs,其余4例仅得到少量坏死的细胞和组织碎片;MSDCs在含血清的培养基中贴壁分化;MSDCs均含有ALDH1+细胞。结论从新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离BCSCs宜选取化疗2个周期后的标本;新辅助化疗可以富集BCSCs;ALDH1+表型的BCSCs比CD44+CD24-表型的BCSCs在乳腺癌中分布更加广泛。
- 董华英吴诚义陈元文
- 关键词：乳腺肿瘤化疗肿瘤干细胞细胞分离细胞培养
- 长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性被引量：11
- 2010年
- 目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性。方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力。FCM法检测CD44+/CD24-/low细胞的含量。结果:接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞。随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化。CD44+/CD24-/low细胞仅存在于基底样乳腺癌标本。来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异。结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变。
- 陈元文吴诚义陈鑫汤为学董华英
