国家自然科学基金(81172539)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院第三军医大学西南医院更多>>
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- MicroRNA-206可能通过调控Cx43表达调节人乳腺癌细胞的转移能力被引量：6
- 2014年
- 目的通过干预人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中微小RNA206(microRNA-206,miR-206)的表达,观察连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达以及细胞在增殖、迁移和侵袭能力等方面的变化。方法使用荧光定量RTPCR(qRT-PCR)检测正常乳腺细胞MCF-10A和MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-206的表达水平。通过构建慢病毒载体转染MCF-7及MDA-MB-231细胞,分别升高和降低miR-206的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Cx43的mRNA及蛋白表达水平的变化。利用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力。结果 MCF-7和MDA-MB-231中miR-206的表达均明显低于正常细胞株;其中MCF-7细胞中miR-206表达水平较MDAMB-231中低,Cx43表达水平较MDA-MB-231中高。转染慢病毒包装靶向增强miR-206表达的shRNA载体LV-hsa-miR-206(1569-11)后,MCF-7细胞的miR-206表达明显上升,Cx43的mRNA表达水平及蛋白表达水平均明显下降;细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。转染慢病毒包装靶向抑制miR-206表达的shRNA载体LV-hsa-miR-206-inhibition后,MDAMB-231细胞的miR-206表达明显下降,Cx43 mRNA表达水平及蛋白表达水平均明显上升;细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显增强;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论干预miR-206的表达可导致Cx43表达水平的变化,并影响人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力;miR-206可能通过抑制Cx43的表达调节了乳腺癌细胞的转移能力。
- 杜俊泽范林军齐晓伟孙鹏王明浩明佳姜军
- 关键词：连接蛋白43细胞运动肿瘤侵袭
- 微小RNA-206过表达慢病毒载体构建及其对MCF-7乳腺癌细胞生物学特性的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 构建微小RNA-206（miR-206）的慢病毒载体转染MCF-7细胞,观察转染效率和细胞生物学特性的改变.方法 针对miR-206有效的靶序列设计合成寡链DNA,经过退火、连接、聚合酶链反应（PCR）筛选、测序鉴定、慢病毒包装、共转染等步骤获得慢病毒LV-hsa-miR-206,将其转染MCF-7细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-206表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 PCR扩增出插入片段,目的基因的测序结果与GeneBank序列一致.感染慢病毒后,MCF-7的miR-206表达由1.000增加至120.331±1.801;细胞增殖能力显著降低,在转染后第2天由1.420±0.052降低为1.275±0.147,第3天由1.762±0.089降低为1.387±0.093,第4天由2.045±0.235降低为1.269±0.103,凋亡细胞和G2期细胞比例显著增加.结论 成功构建LV-hsa-miR-206慢病毒载体,并在MCF-7细胞中成功表达,miR-206表达水平增加导致细胞的生物学特性发生明显变化.
- 明佳杜俊泽王寅欢姜军
- 关键词：重组慢病毒载体乳腺癌
