安徽省自然科学基金(070413090)
- 作品数：9 被引量：35H指数：4
- 相关作者：汪春兰赵宇白欣卢迪李树宝更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学中国科学技术大学更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金安徽省重点科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组共表达质粒pIRES-hVEGF_(121)cDNA/hBMP-4转染骨髓间充质干细胞对其成骨分化的影响被引量：2
- 2010年
- 背景:在许多情况下,人体组织修复是多因子共同协调作用的结果,因而共表达多基因载体的构建能够满足多因子基因治疗的需要,是近年来基因治疗的新思路。目的:观察重组pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4共表达质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞后的表达及其对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响,为骨缺损的联合基因治疗奠定基础。方法:使用全骨髓培养法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞;流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标志抗原的表达;重组pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4共表达质粒经酶切鉴定后,在脂质体介导下将其转入大鼠骨髓间充质干细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western blot检测;茜素红染色检测转染后大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化能力。结果与结论:流式细胞仪检测显示CD90表达强阳性,CD45表达阴性;重组pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4共表达质粒成功转染至大鼠骨髓间充质干细胞中,并获得有效共表达;转染后第14天,茜素红染色阳性,能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,为骨缺损的联合基因治疗奠定了基础。
- 周志林孙军赵宇汪春兰
- 关键词：骨形态发生蛋白
- 巯基烷基化壳聚糖载绿色荧光蛋白质粒基因纳米粒子的制备与研究被引量：2
- 2010年
- 合成了新型的基因载体巯基烷基化壳聚糖(TACS),采用复凝聚法制备了巯基烷基化壳聚糖基因纳米粒子,并表征其形态和粒径。利用体外转染实验定性评估了纳米粒子的转染效率。结果表明,粒子形态不很均一,粒径在390nm左右;凝胶电泳实验证明了载体能有效地包裹和保护基因不受DNaseⅠ酶的消化;溶解实验证实了巯基化增强了TACS的水溶性;体外基因转染实验证实了TACS能够在人胚胎肾细胞(HEK293)转染基因,并且其转染效率远高于壳聚糖纳米粒子。这些结果表明,巯基烷基化壳聚糖有望成为有价值的基因载体。
- 慕卿赵伟亮白欣李树宝卢迪方月娥赵宇
- 关键词：壳聚糖烷基化基因转染水溶性
- 双基因rhBMP-4/VEGF_(121)在治疗兔桡骨缺损中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的研究双基因rhBMP-4/VEGF121混悬液在骨缺损修复中的作用。方法新西兰成年兔20只,制作40侧桡骨中段15mm骨缺损实验模型,随机分为A、B、C、D组。A组植入rhBMP-4+VEGF121+明胶海绵,B组植入rhBMP-4+明胶海绵,C组植入VEGF121+明胶海绵,D组只植入明胶海绵。并于术后4、8、12周对骨缺损区进行大体、X线片、组织形态学观察,图像分析新生骨小梁的面积。结果A组在12周内骨缺损完全修复,髓腔再通,且同时期内新生骨的数量和质量显著优于其他组;B、C组骨缺损为未完全成熟的板层骨修复,髓腔部分再通,B组骨愈合成熟度较C组佳;D组缺损主要由纤维结缔组织填充。结论双基因rhBMP-4/VEGF121治疗骨缺损比单基因具有更好的促进骨修复再生能力。
- 邢艳莉汪春兰曹东升丁浩王帮河
- 关键词：基因疗法骨形态发生蛋白类
- 壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF_(︱2︱)cDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化被引量：7
- 2009年
- 背景:发展一种安全有效的方法来促进骨缺损是修复重建外科面临的重要问题,自体骨移植仍是目前优先考虑的选择,但供区有限且不可避免地对供区造成新的损害;同种异体骨移植存在免疫排斥反应;非骨性材料移植物在临床实践中的并发症仍居高不下。目的:探讨壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞基因工程学体外实验,于2007-09/2008-04在安徽医科大学与中国医科大学完成。材料:清洁级新西兰大白兔8只,由安徽医科大学实验动物中心提供。壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4为课题组自行构建。方法:无菌条件下抽取兔骨髓,Percoll法体外分离培养骨髓间充质干细胞,通过换液和贴壁吹打法进行纯化扩增。第3代骨髓间充质干细胞80%融合后,按1×108L-1密度接种,实验组采用壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4进行转染,对照组不转染质粒,继续以含10%FBS的L-DMEM普通培养基进行培养21d。主要观察指标:碱性磷酸酶及茜素红染色检测细胞分化情况,扫描电镜观察细胞结构变化。结果:转染14d后实验组碱性磷酸酶染色呈强阳性表达,茜素红染色出现大量棕红色的钙结节,电镜观察细胞内含有大量碱性磷酸酶的小泡,细胞周围大量基质分泌;对照组碱性磷酸酶与茜素红染色均呈阴性,电镜下细胞内几乎没有含碱性磷酸酶的小泡。结论:兔骨髓间充质干细胞在体外经壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染后,可定向分化为成骨细胞。
- 李树宝潘锋白欣王帮河丁浩汪春兰何金生张梅赵宇
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨骨形成蛋白
- 骨形态发生蛋白和血管内皮生长因子在骨组织工程中的协同作用被引量：5
- 2007年
- 目的:总结近年来国内外关于骨形态发生蛋白和血管内皮细胞生长因子在骨组织工程中的协同作用研究进展,为研究骨缺损的联合基因治疗提供启示。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1995-01/2006-12关于骨形态发生蛋白和血管内皮细胞生长因子在骨组织工程中协同作用的文章,检索词为"Bone Morphogenetic Protein,Vascular Endothelial Growth Factor",限定文章语言种类为"English"。同时检索中国期刊全文数据库、万方数据库1998-01/2006-12相关文章,检索词为"骨形态发生蛋白,血管内皮生长因子",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与骨形态发生蛋白和血管内皮细胞生长因子在骨组织工程中协同作用的研究相关,选取近年发表的针对性强的文献,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。排除标准:重复研究的、较陈旧的或非骨组织工程的研究文章。资料提炼:共收集到163篇相关文献,排除125篇内容较陈旧、重复研究的或非骨组织工程的研究文献,对符合纳入标准的38篇文献进行分类整理用于综述。资料综合:①骨形态发生蛋白和血管内皮细胞生长因子在骨组织工程中都有着重要作用。②两者在骨组织工程中的联合应用优势明显,骨形态发生蛋白促进了血管内皮细胞生长因子的表达,血管内皮细胞生长因子有助于骨形态发生蛋白作用的发挥。③关于两者在骨组织工程中协同作用的研究国内外学者已取得了令人鼓舞的成就,构建一种新型的共表达载体是许多研究者热衷的方向。结论:在骨组织工程中,骨形态发生蛋白和血管内皮细胞生长因子联合治疗骨缺损具有广阔前景,但仍有很多方面尚待深入研究。
- 周志林汪春兰赵宇
- 关键词：骨形态发生蛋白血管内皮生长因子
- 巯基烷基化壳聚糖介导pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4真核双表达质粒修复兔桡骨缺损的初步研究被引量：3
- 2009年
- 目的研究以巯基烷基化壳聚糖(TACS)介导的双核共表达质粒(pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4)修复骨缺损的作用。方法以新西兰兔15只(30侧)为实验动物,制作桡骨中段15mm长的骨缺损实验模型,分实验组(左侧桡骨)和对照组(右侧桡骨),实验组植入明胶海绵+双基因混悬液,对照组植入明胶海绵+等量生理盐水,并于术后6周、8周、12周对骨缺损区进行大体观察、X线观察、X线阻射密度测定及组织形态学观察,图像分析骨小梁的生成数量。结果实验组在12周内骨缺损完全修复,且同时期内新生骨的数量和质量显著优于对照组;对照组骨缺损主要由纤维结缔组织填充。结论TACS介导的pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4真核双表达基因具有良好的促进骨缺损修复的能力。
- 邢艳莉汪春兰赵宇王帮河白欣李叔宝卢迪
- 关键词：骨缺损基因治疗骨形态发生蛋白血管内皮细胞生长因子
- 巯基烷基化壳聚糖介导共表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA／hBMP4体外转染的研究被引量：2
- 2009年
- 目的以新型巯基烷基化壳聚糖（TACS）为载体介导重组共表达质粒pIRES—hVEGFl2lcDNA／hBMP4体外转染大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs），探讨TACS用作骨组织工程中基因载体的可行性。方法复凝聚法制备TACS-基因纳米粒，检测其形态和粒径；全骨髓培养法分离、培养大鼠MSCs；将纳米粒转染第3代大鼠MSCs，并设壳聚糖组、脂质体组及裸质粒组分别为实验对照、阳性对照及阴性对照，噻唑蓝（MTT）比色法测定TACS的细胞毒性。分别于转染后3、4d提取MSCs的总RNA、总蛋白，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测目的基因的表达。结果TACS能有效包裹和保护共表达质粒，TACS组细胞存活率（73．18±6．56）％，明显高于脂质体组（45．92±4．93）％（P〈0．01）。除阴性对照组外，RT-PCR和Western blot均检测到转染后MSCs中hVEGFl2l及hBMP4的表达，TACS组目的蛋白表达量低于脂质体组（P〈0．05），但明显高于壳聚糖组（P〈0．01）。结论共表达质粒在TACS介导下成功转染大鼠MSCs并获得表达。TACS细胞毒性小，且较未改性壳聚糖转染效率明显提高。
- 卢迪慕卿赵宇白欣方月娥汪春兰
- 关键词：间质干细胞血管内皮生长因子骨形态发生蛋白转染
- 壳聚糖及其衍生物在骨组织工程中的应用被引量：6
- 2009年
- 壳聚糖是天然多糖类高分子化合物甲壳素的脱乙酰产物,具有来源丰富、生物相容性好、可生物降解等优点,在骨组织工程中可以加工成用于细胞移植和组织再生的多孔支架、生长因子的缓释载体及外源基因的递送载体,也可加工成微球或水凝胶等形式用作骨组织工程的可注射性支架,在骨组织工程研究领域壳聚糖及其衍生物具有广阔的应用前景。但由于壳聚糖复合支架的机械性能较弱、在体内的降解时间难以精确控制、壳聚糖用作基因载体转率效率偏低等原因,目前大多研究只处于体外和动物体内实验阶段,随着材料科学与生命科学的发展,壳聚糖将广泛用于骨组织缺损的临床治疗实践中。
- 卢迪赵宇汪春兰
- 关键词：壳聚糖衍生物
- 新型基因载体巯基烷基化壳聚糖的制备及体外性质的初步研究被引量：7
- 2009年
- 目的制备巯基烷基化壳聚糖(TACS)载基因纳米粒,并对其体外相关性质进行初步研究。方法复凝聚法制备TACS/pDNA复合纳米粒子,并用透射电镜对其的形态和粒径进行观察和表征;凝胶阻滞分析观察其对基因的保护情况;以Lipofectamine 2000转染试剂作为阳性对照,检测其对人胚胎肾细胞(HEK293)的转染活性;四噻氮唑盐(MTT)比色法测定其对细胞活性的影响。结果TACS/pDNA复合纳米粒子形态不很均一,粒径在390nm左右;凝胶阻滞分析证明了载体能有效地包裹和保护基因不受DNaseⅠ酶的消化;体外基因转染实验证实了TACS纳米粒子能够有效地转染HEK293,其转染效率远高于壳聚糖纳米粒子,略低于脂质体;MTT测定其对细胞活力影响甚微,对细胞的毒性明显低于脂质体。结论TACS有望成为一种有价值的新型基因载体。
- 白欣慕卿李树宝张梅何金生方月娥汪春兰赵宇
- 关键词：壳聚糖转染
