国家自然科学基金(60078021)
- 作品数：23 被引量：99H指数：7
- 相关作者：顾瑛刘凡光曾晶戴维德李晓松更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院北京理工大学北京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学机械工程更多>>
- 血卟啉单甲醚在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位被引量：6
- 2003年
- 目的 :研究血卟啉单甲醚 (HMME)在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位 ;方法 :孵育时间分别为 2小时、12小时、2 4小时 ,四种荧光探针标记四种细胞器。倒置荧光显微镜和致冷CCD探测HMME和探针荧光图像。定性比较两种荧光分布模式 ,并定量计算高探针荧光区域与细胞内HMME荧光均量比I2 /I1;结果 :三种孵育时间下 ,HMME荧光均呈胞浆弥散分布 ,且在核周附近的高尔基体灰度较高 ,细胞核几乎无荧光分布。I2 /I1高低顺序 2小时组 :高尔基体 >内质网 >线粒体 /溶酶体 ;12小时组 :高尔基体 >溶酶体 >内质网 /线粒体 ,且内质网组显著下降与高尔基体组略有下降伴随溶酶体组显著上升 ;2 4小时组 :高尔基体 >线粒体 /内质网 >溶酶体 ,且溶酶体组显著下降与高尔基体组一定下降伴随线粒体组与内质网组显著上升 ;结论 :倒置荧光显微镜和致冷CCD能有效应用于光敏剂亚细胞定位研究 ,定量分析方法对弥散分布光敏剂尤其适合 ;三种孵育时间下 ,高尔基体为HMME主要定位点 ,细胞核几乎无分布。短孵育时间 ,内质网有一定分布 ;中孵育时间 ,由内质网(主要 )和高尔基体到溶酶体再分布 ;长孵育时间 ,由溶酶体和高尔基体到线粒体和内质网再分布。
- 王雷戴维德李家泽刘凡光顾瑛李晓松曾晶
- 关键词：血卟啉单甲醚鼠肺毛细血管内皮细胞亚细胞定位光动力疗法
- 血卟啉单甲醚细胞内分布的荧光显微成像被引量：9
- 2003年
- 目的 :探索将荧光显微成像应用于血卟啉单甲醚 (HMME)细胞内分布研究 ;方法 :应用倒置荧光显微镜和致冷IC CD分别采集HMME在人体食管癌细胞和鼠肺毛细血管内皮细胞内的荧光显微数字图像 ,并在计算机中进行图像处理 ;结果 :不同浓度和不同时间下 ,HMME在两种细胞中均主要分布于胞浆及其中各细胞器内 ,而在细胞核内几乎无分布 ;结论 :倒置荧光显微镜和高灵敏度致冷ICCD可有效应用于低荧光效率光敏剂细胞内分布研究 ;细胞核不是HMME在两种细胞内的主要定位点 。
- 王雷戴维德李家泽刘凡光顾瑛
- 关键词：光动力疗法血卟啉单甲醚细胞内分布荧光显微镜ICCD
- 血卟啉单甲醚在A549肺癌细胞内亚细胞分布的动态变化
- 2008年
- 目的:探讨血卟啉单甲醚(Hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在A549肺癌细胞内亚细胞分布的动态变化。方法:传代培养A549肺癌细胞,分别与光敏剂HMME孵育2 h和12 h。应用由荧光显微镜及电感耦合器材(Charge-coupled device,CCD)组成的高分辨率荧光显微成像系统,结合荧光探针标记技术,采用细胞器-细胞荧光强度比值法研究HMME在不同时间的亚细胞分布情况。结果:在2 h和12 h两个孵育时间点高尔基体的平均荧光强度比值(J1/J2)值都最高;随着孵育时间延长,A549细胞的四种细胞器J1/J2值都升高且溶酶体幅度最大。结论:孵育时间是影响HMME亚细胞分布的一个重要因素。随着孵育时间的延长,A549肺癌细胞各细胞器吸收HMME能力逐渐增强,尤以溶酶体显著。
- 戴维德李晓松曾晶刘凡光顾瑛
- 关键词：孵育时间血卟啉单甲醚细胞内分布
- 线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用被引量：8
- 2004年
- 目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。
- 丁新民刘凡光顾瑛曾晶戴维德李晓松
- 关键词：线粒体血卟啉单甲醚PDTHELA细胞细胞凋亡光动力学疗法
- 三套荧光显微成像系统在光敏剂亚细胞定位研究中的应用比较被引量：2
- 2005年
- 目的:对三套荧光显微成像系统在国产新型光敏剂HMME亚细胞定位研究中的应用特点及适用范围进行了比较与评价。方法:分别应用LSCM、CCD、ICCD荧光显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针Rhodamine 123、DIOC6(3)标记细胞内线粒体和内质网。采用细胞器-细胞荧光强度比值法,对HMME进行单细胞内分布的定性与定量研究。结果:LSCM和CCD成像系统能采集到浓度达到160μg ml时的HMME的荧光图像,获得荧光探针图像信息显示所标记的细胞内线粒体和内质网平均荧光强度比值(J1 J2值)都明显高于细胞内J1 J2值。而ICCD成像系统只需HMME浓度为5μg ml,荧光图像特点都呈胞浆中荧光强度较高且分布不均,细胞核区荧光较弱的中空现象。ICCD系统对细胞器探针荧光图像在空间分辨上不理想。结论:LSCM与CCD成像系统限于其探测灵敏度,对于弱荧光性光敏剂,适用于其高孵育浓度条件下的亚细胞定位研究。二者获得的结果相一致:孵育24h,HMME在鼠肺内皮细胞线粒体和内质网有分布而几乎不进入细胞核。ICCD成像系统可不受孵育浓度条件的限制,实现光敏剂极微弱荧光的有效探测,但空间分辨率较低。
- 戴维德李晓松曾晶丁新民刘凡光顾瑛
- 关键词：光敏剂亚细胞定位
- 光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的发生特点。方法将血卟啉单甲醚(hem atoprophyrin monomethyl ether,HMME)与传代培养ECV304细胞共同孵育12h后,采用荧光探针标记技术和细胞器-细胞荧光强度比值法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析。应用荧光显微镜汞灯照射以激发光敏剂产生光动力效应,并加入ROS探针H2DCF-DA检测单线态氧的产生。分别在光照前后采集四种细胞器及DCF的荧光图像并进行荧光强度的定量分析。结果细胞总荧光光强在光照后较光照前降低26.4%;以每种细胞器光照前的平均荧光光强比值为基准,则光照后线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体分别降低了31.1%、23.4%、5.8%和5.0%。线粒体区域在单纯光照和有HMME存在情况下后均检测到DCF荧光的增强。结论光动力效应可能导致亚细胞结构内产生不同数量的单线态氧,会引起不同程度的光漂白作用,线粒体区域HMME光漂白速率较快;线粒体区域产生数量较多的单线态氧,可能是光动力效应的主要作用靶点之一。
- 戴维德李晓松曾晶刘凡光顾瑛
- 关键词：光敏剂细胞内分布
- 高分辨率荧光显微成像技术在光敏剂亚细胞定位研究中的应用
- 2004年
- 目的 探讨应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统研究血卟啉单甲醚 (hematoporphrinmonornethyletherHMME)亚细胞分布的可行性。方法 传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞 ,与HMME共同孵育 2 4h ,选择 4种特异性细胞器荧光探针Rhodamine 1 2 3、Luciferyellow、DiOC6(3)和BODIPY分别标记细胞内线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体 ,应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统 ,分别采集细胞内HMME与细胞器探针的荧光图像。通过计算机图像处理 ,设计采用细胞器 细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位。结果 在参数m的不同取值点 ,HMME在 4种细胞器区域与细胞平均荧光光强比值 (J1 /J2 )的差异有显著性 ,且各细胞器区域J1 /J2 大小排列顺序都为 :高尔基体 >线粒体 >内质网 >溶酶体 ;随参数m的增高 ,HMME在 4种细胞器区域平均光强比值呈下降趋势 ;细胞核区荧光微弱。结论 高分辨率荧光显微成像系统能对HMME及 4种细胞器探针进行荧光成像 ;应用此系统结合荧光定量分析法能对荧光效率极低的光敏剂进行较精确的亚细胞定位研究。
- 戴维德王雷刘凡光顾瑛李晓松丁新民曾晶
- 关键词：HMME亚细胞定位内质网溶酶体细胞器高尔基体
- 激光共聚焦显微成像技术对亚细胞位点光动力损伤的动态观察
- 2005年
- 目的探讨应用激光共聚焦显微成像技术对光动力效应所致亚细胞位点损伤进行动态观察的可行性。方法实验分为HMME+Rhodamine123组、单加HMME组、单加Rhodamine123组和单纯细胞组,后3组作为对照组。传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞,将血卟啉单甲醚(HMME)与内皮细胞共同孵育24h后,加入细胞探针Rhodamine123对线粒体进行染色。应用激光共聚焦显微镜并采用细胞器细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位,随后采集Rhodamine123的荧光图像动态序列。结果HMME+Rhodamine123组的Rhodamine123荧光图像在光照过程中逐渐发生变化:典型的线粒体形态特征逐渐消失,并伴有荧光强度下降,荧光在胞浆内趋于弥散分布,细胞核内出现Rhodamine123的荧光;而单加Rhodamine123组的Rhodamine123荧光图像未发生明显变化。结论应用激光共聚焦显微成像技术能实现亚细胞水平光敏损伤位点的动态光学检测,线粒体和核膜可能是HMME介导的光动力损伤亚细胞位点。
- 戴维德李晓松曾晶刘凡光顾瑛
- 关键词：亚细胞激光共聚焦显微镜亚细胞定位位点肺毛细血管内皮细胞
- HMME在不同溶液中光漂白反应动力学规律被引量：4
- 2007年
- 目的分析国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)在不同溶液中光漂白反应动力学规律,加深对光漂白反应复杂反应过程的理解,并为HMME-PDT治疗微血管病变的数学建模研究提供实验依据和参数。方法根据光化学反应动力学原理,从理论上推导出在单纯溶液和复杂溶液(含可被光氧化的底物)中,单态氧介导的光漂白反应动力学方程,通过对实验测定的漂白数据(不同时间点的HMME浓度)进行拟合,进一步验证理论推导出光漂白反应动力学方程。结果HMME在单一溶液体系(PBS、DMSO)中的光漂白符合1级反应动力学过程,在含底物的复杂体系(白蛋白缓冲液、细胞悬液)中符合2级反应动力学过程。结论HMME在不同溶液体系中的光漂白遵循不同的反应动力学规律。根据化学反应动力学原理进行光漂白等复杂光化学反应过程的数学模拟是可行的,并有利于对复杂光化学反应过程的深入理解。
- 王颖顾瑛刘凡光程刚黄乃艳
- 关键词：血卟啉单甲醚反应动力学
- 光动力学疗法治疗过程中鲜红斑痣病变组织内光敏剂含量检测的初步研究被引量：9
- 2007年
- 目的应用荧光光谱技术监测光动力学疗法治疗过程中鲜红斑痣病变组织内光敏剂含量的变化,分析光漂白产物的生成情况。方法鲜红斑痣患者静脉推注光敏剂PSD-007,即刻以532 nm倍频Nd∶YAG激光器作为光动力治疗光源照射病变组织,同时又作为光敏剂荧光激发光源。在不影响光照的前提下,应用光学多通道分析仪实时采集同一治疗区域不同时间点的荧光光谱。经过光谱分析与处理,得到治疗区局部组织光敏剂含量以及光漂白产物含量随治疗时间变化的曲线图。结果不同患者治疗区局部组织光敏剂荧光变化存在较大的个体差异,但是各病例均呈现先上升后降低的趋势,第1治疗区的最大荧光强度高于第2治疗区域,第1治疗区出现最高荧光峰的时间为治疗开始后的5～15 min。结论通过荧光手段监测光动力治疗时鲜红斑痣病变局部组织内光敏剂荧光的变化可有效地反映光敏剂含量的变化,对于了解光动力反应的进行情况以及预测反应效果具有一定的指导意义,并为制定个性化的光动力治疗方案提高疗效提供依据。
- 李晓松顾瑛刘凡光王雷于常青曾晶
- 关键词：光动力学疗法荧光光谱法光敏剂鲜红斑痣
