国家自然科学基金(30870750)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- 碱性成纤维细胞生长因子转基因治疗对放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的改善作用被引量：3
- 2009年
- 目的观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）转基因治疗对放射性脑损伤（RIB）模型鼠学习记忆能力的影响，为探索治疗RIB的新途径提供实验基础。方法PCR法克隆出bFGF基因片段，酶切后连接法构建bFGF．pcDNA3．1（＋）质粒。分组采用直线加速器对Sprague—Daw—ley大鼠进行全脑单次25Gy照射，bFGF转基因治疗组采用侧脑室注射bFGF—pcDNA3．1（＋）质粒，并设未照射组为对照。在照射前及照射后7d，20d，60d分别进行Morris水迷宫试验，分析各组大鼠行为学检测结果，采用平均逃避潜伏期和搜索策略2个指标评价大鼠学习记忆能力，同时观察各组脑组织病理变化。结果各组大鼠放射前平均逃避潜伏期和搜索策略得分无统计学差异，bFGF治疗组、照射组和对照组在照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性（P〈0．05））。bFGF治疗组在放射后7d、20d平均逃避潜伏期[（68．42±11．35）s、（50．87±12．06）s]和搜索策略[（16．89±2．08）％、（19．98±2．14）％1明显下降，60d时潜伏期[（40．28±10．87）S]和搜索策略[（26．42±2．59）％]恢复至照射前水平，放射组60d后仍没有恢复。照射组病理检查显示海马和皮层神经元轻度变性，胞体萎缩，白质区域较对照组呈现组织结构梳松、血管周隙扩大等表现；bFGF治疗组病变程度明显较照射组轻。结论25Gy射线照射可降低大鼠学习记忆能力，bFGF转基因治疗可逆转放射造成的大鼠学习记忆能力下降。
- 刘运林周海红刘军肖颂华邢诒刚
- 关键词：放射性脑损伤学习记忆转基因治疗碱性成纤维细胞生长因子
- 外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导神经干细胞凋亡的抑制效应被引量：4
- 2009年
- 背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一，而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用，但其机制尚不清楚。目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17．2神经干细胞凋亡的抑制作用。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，于2006-11／2008—06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料：C17．2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。方法：以直线加速器进行总量为8Gy外照射C17．2神经干细胞建立离体放射性损伤模型，以1×10^7L^-1的细胞浓度接种C17．2神经干细胞悬液至96孔板，每孔加细胞悬液200uL，按0，25，50，100μg／L（0μg／L作对照）分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高，C17．2神经干细胞增殖比明显增加（P〈0．01），呈现明显剂量效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100ug／L时活性最强，未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25，50ug／L碱性成纤维细胞生长因子组（P〈0．01），25，50，100μg／L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比，差异具有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17．2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。
- 周海红刘运林刘军肖颂华邢诒刚赵斌
- 关键词：放射性脑损伤碱性成纤维细胞生长因子神经干细胞凋亡
- 外源性bFGF抑制辐射诱导的C17．2神经干细胞凋亡的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对辐射诱导的C17．2神经干细胞mSOs）凋亡的影响，探讨细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）在bFGF对辐射诱导的C17．2NSCs凋亡的抑制效应中的作用。方法以直线加速器照射C17．2NSCs建立离体放射性损伤模型，MTT法检测细胞活性．流式细胞仪检测不同浓度的外源性bFGF和U0126对细胞凋亡的影响。结果外源性bFGF浓度为0-100ng／mL时，细胞凋亡率可由（12．78±1．04）％降低至（4．83±0．31）％，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；加入U0126后细胞凋亡率为（8．42±0．71）％，DMSO对照组为（4．71±0．42）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性bFGF对辐射引起的C17．2 NSCs凋亡具有抑制作用，ERK1／2参与该效应。
- 周海红刘运林肖颂华刘军吕瑞妍赵斌
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子细胞外信号调节激酶1/2神经干细胞
- 同型半胱氨酸对海马神经元细胞HT22的毒性作用及其机制的探讨被引量：7
- 2009年
- 目的探讨同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞的毒性作用及其可能的相关机制。方法使用不同浓度的同型半胱氨酸（0、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5mmol／L）作用于分化培养后的HT22细胞，采用MTS分析检测细胞活力的变化，并同时使用N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂MK801和美金刚进行干预处理，进一步检测其对细胞活力的影响：使用Hoechst33342和PI染色观察细胞死亡的形态学变化。结果同型半胱氨酸对分化培养后的HT22细胞具有剂量反应关系的毒性作用，半数有效浓度约在1．25mmol／L。Hoechst33342和PI染色结果显示低浓度同型半胱氨酸（1．0mmol／L）主要引起细胞凋亡，而随着同型半胱氨酸浓度的增加（2．0mmol／L），细胞则主要以坏死的形式存在。NMDA受体拮抗剂MK801和美金刚可有效的抑制同型半胱氨酸的神经细胞毒性，分别在10μmol／L浓度时显示最为明显的抑制作用，同单纯同型半胱氨酸作用组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论同型半胱氨酸对海马神经元细胞系HT22细胞具有明显的毒性作用，主要导致细胞的凋亡和坏死；其产生的神经毒性在很大程度上是通过激活NMDA受体起作用的。对于同型半胱氨酸-NMDA受体之间的作用的进一步研究将会提供神经元坏死的一个重要的研究方向。
- 刘军肖颂华刘中霖吕瑞妍
- 关键词：同型半胱氨酸细胞凋亡N-甲基-D-天冬氨酸受体
- 人血管内皮生长因子165慢病毒载体的构建及其抗放射所致细胞凋亡的作用
- 2011年
- 【目的】构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22细胞,并进一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用。【方法】PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体;通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体;采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞,采用实时RT-PCR及Western Blot检测hVEGF165基因在HT22细胞中的表达情况。进一步对单纯HT22细胞、空质粒转染组以及hVEGF165转染组HT22细胞进行0、5、10 Gy的X线照射,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】hVEGF165基因片段重组到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,酶切后电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与GenBank序列完全一致,转染HT22后hVEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高。而且同各对照组相比,hVEGF165可以降低细胞放疗后的凋亡率。【结论】pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-hVEGF165慢病毒表达载体构建成功,其转染HT22细胞后可获得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的表达,hVEGF165具有抗放射所致细胞凋亡的作用。
- 赵仲艳韦映梅黎祥喷吕瑞妍肖颂华刘中霖邢诒刚刘军
- 关键词：人血管内皮细胞生长因子慢病毒
- VEGF转基因神经干细胞移植对大鼠急性放射性脑损伤后脑组织中NSE表达的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)转染的神经干细胞(NSC)对放射性脑损伤的影响。方法:将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、放射性脑损伤组、NSC和转染VEGF的NSC治疗组,放射性脑病模型成功制备后1周脑内移植转染VEGF的NSC,移植后1周、2周、3周、4周和6周末取其脑组织,用免疫组织化学法测定神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞数,Western blotting法检测NSE蛋白表达情况。结果:与对照组相比,放射性脑损伤组大鼠脑组织中NSE阳性细胞数显著下降(P<0.05);与放射性脑损伤组相比,NSC治疗组和转染VEGF的NSC治疗组在移植3周后NSE阳性细胞数明显增加(P<0.05),与NSC治疗组比较,在移植6周末转染VEGF的NSC治疗组NSE的阳性细胞数增加更明显(P<0.05)。与放射性脑损伤组比,NSC治疗组和转染VEGF的NSC治疗组在移植3周末NSE蛋白表达量明显增加(P<0.05),与NSC治疗组比较,在移植6周末转染VEGF的NSC组NSE蛋白表达量增加更明显(P<0.05)。结论:转染VEGF的NSC移植可提高放射性脑损伤组织中NSE的含量。
- 肖颂华段朝晖沈庆煜邢诒刚彭英陶恩祥刘军
- 关键词：血管内皮生长因子神经元特异性烯醇化酶神经干细胞
- 全脑照射对迟发性脑损伤大鼠学习记忆能力和海马突触结构的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨放射线全脑照射对大鼠迟发性脑损伤后学习记忆能力和海马突触结构的影响.方法 分组采用直线加速器对SD大鼠进行全脑照射,剂量分别为20 Gy和30 Gy.在照射前和照射后120d分别进行Morris水迷宫实验,分析各组大鼠行为学检测结果 ,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习记忆能力;同时用电镜和计算机图像分析仪观测模型鼠海马CA3区Gray Ⅰ型突触界面结构参数的变化.结果 20 Gy照射后120 d平均潜伏期为（41.17±10.76）s,搜索策略得分（27.13±2.34）分,30 Gy照射后120d平均潜伏期为（78.49±9.32）s,搜索策略得分（16.52±2.71）分,均与照射前及对照组差异有显著性.20 Gy照射后120 d海马突触后膜厚度为（22.03±6.84）nm,30 Gy照射后120 d海马突触后膜厚度为（23.19±7.65）nm,与放射前及对照组比均差异有差著性（P＜0.05）.同时还观察到20Gy和30Gy照射后均较对照组突触活性带长度短,突触界面曲率小,突触间隙宽度变窄（P＜0.05）.结论 迟发性放射性脑损伤后学习记忆能力下降,并且可能与海马突触病理改变有关.
- 刘运林张谦肖颂华刘军邢诒刚
- 关键词：海马突触学习记忆
- 外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射后大鼠学习记忆能力的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对放射后大鼠学习记忆能力的影响。方法利用分割照射建立的迟发性放射性脑损伤（RIB）模型鼠24只，采用尾静脉直接注射给药法给予外源性bFGF，3个月后进行学习记忆能力检测，同时观察脑组织病理变化及FGF受体1（FGFR1）表达情况。结果bFGF组平均寻台潜伏期[（56．57±4．29）s]和第一象限路径与总路径长度百分比[（21．57±1．47）％]均较模型组[（118．24±10．79）s，（6．95±0．75）％]有显著改善（P〈0．01）；HE染色海马区域完整细胞计数bFGF组[（115．61±12．82）个]较模型组[（70．86±8．51）个]明显增多（P〈0．01）；IHC结果显示，bFGF治疗组海马内FGFR1表达水平（31．50±1．59）较模型组（12．03±1．68）明显增高（P〈0．01）。结论外源性bFGF可通过诱导FGFR1表达对RIB模型鼠学习记忆能力起到一定的保护作用。
- 周海红刘军肖颂华刘运林邢诒刚赵斌
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子学习记忆
