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人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达: 2008年; 为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.; 王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲; 关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

防御素基因转导人气管上皮细胞的实验研究被引量：4: 2000年; 采用脂质体转导法将人中性粒细胞防御素 HNP1 c DNA重组真核表达质粒 p Babe- Neo- HNP1 导入无血清培养的人气管粘膜上皮细胞 ;制备 HNP多克隆抗血清 ,用免疫组化法检测防御素 (Hum an neutrophil peptide- 1,HNP1 )在气管上皮细胞的表达。结果表明 :脂质体转导法可使 HNP1 c DNA重组真核表达质粒 p Babe- Neo- HNP1 在人气管粘膜上皮细胞有效表达 ,免疫组化显示转导组织呈强阳性反应。本实验为进一步研究应用内源性抗生素肽转基因治疗呼吸道感染性疾病打下了基础。; 黄宁唐彬吴琦王伯瑶; 关键词：防御素基因转染基因治疗

β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达被引量：3: 2001年; 目的 :检测大鼠 β -防御素 - 1基因表达的组织分布。方法 :从GenBank检索到的Norway大鼠 β -防御素 - 1cDNA序列 ,据此设计一对特异引物 ,采用RT -PCR技术在Wistar大鼠 10种受检测组织的总RNA中 ,扩增其特异cDNA片段 ,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果 :在 10种大鼠组织中 ,仅从皮肤和肾脏扩增出一条长度为 2 72bp的cDNA片段 ,在气管、子宫、骨髓、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、腮腺等均未检测出其mRNA。其RT -PCR产物经测序分析证明系大鼠 β -防御素 - 1cDNA。结论 :本研究显示大鼠 β -防御素 - 1基因除在肾脏表达外 ,亦在皮肤组织固有表达 ,提示 β -防御素 - 1亦可能在大鼠皮肤天然抵抗微生物感染机制中发挥作用。; 黄宁吴琦唐彬陈新年王伯瑶; 关键词：基因表达皮肤

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆被引量：3: 1999年; 为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究，作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ，并重组到ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ载体，经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定，证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ。; 黄宁唐彬吴琦陈新年潘小玲王伯瑶; 关键词：Β-防御素 CDNA 克隆粘膜感染基因表达

兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定被引量：1: 2008年; 目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。; 石艳娥李恒彭媛媛邓璐霞周新娥赵媛黄宁; 关键词：HMGN2

人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究被引量：4: 2003年; 目的　构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法　采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆入 PGEXλ1T质粒中 ,转化大肠杆菌 JM10 9,并用 IPTG诱导 ,表达的 FAL L -3 9- lys3 2经纯化后与 FAL L - 3 9进行抗菌活性比较。结果　 DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后的FAL L - 3 9- lys3 2蛋白对大肠杆菌 ML - 3 5 p的抗菌活性明显增强 ,其最低抑菌浓度 ( MIC)和最低杀菌浓度 ( MBC)分别由 FAL L - 3 9蛋白的 18.75和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 10 .94和 2 1.88μg/ m l,对绿脓杆菌ATCC2 785 3的 MIC和 MBC值分别为 FAL L - 3 9蛋白的 3 1.2 5和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 18.75和 3 1.2 5μg/ ml。两种蛋白均在含 Medium E的 L B培养基中表现出较高活性 ,在 L B培养基中抗菌活性最低 ,但在同一种培养基中 FAL L - 3 9- L ys- 3 2蛋白抗菌活性要高于 FAL L - 3 9蛋白。结论　用两步 PCR定点突变技术获得一个 FAL L - 3 9- L ys3 2突变子 ,其表达分子的抗菌活性明显增强 ,提示在 FAL L - 3 9分子中增加碱性?; 杨云霞冯云王伯瑶; 关键词：FALL-39 基因定点突变抗菌活性

利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库被引量：2: 2008年; 背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。; 彭媛媛邓璐霞石艳娥赵媛陈军利王薇冯云吴琦王伯瑶黄宁; 关键词：SMART技术 CDNA文库同源重组酵母双杂交

人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定被引量：7: 2005年; 为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.; 冯云熊文碧王国兴黄宁吴琦鲍朗李绚王伯瑶; 关键词：LAK细胞 HMGN2 抗菌活性

内源性抗生素肽HMGN2抗细菌内化作用及机制初探: 2014年; 目的探讨HMGN2抗细菌内化作用及其机制。方法利用生物学在线软件对人及常见医学模式生物HMGN2进行生物信息学分析;用免疫打点杂交技术检测临床标本HMGN2表达;设置以HMGN2预处理Klebsiella pneumoniae细菌后感染细胞组(简称共孵育组)和HMGN2预刺激细胞后再感染KP组(简称预刺激细胞组),平板菌落计数法检测两种状态下胞内活菌数;用荧光显微镜、流式细胞术观测各组细胞微丝形态和构成变化,用光镜观测HMGN2处理菌及未处理菌细胞骨架表型变化。结果不同属种生物HMGN2具有很高同源性,带阳离子电荷,具有α螺旋结构,分子量小于10kD;在炎性和非炎性标本中均可见HMGN2阳性信号,而在炎性标本中信号强度更大。HMGN2共孵育组和HMGN2预刺激细胞组胞内活细菌数与对照组相比较都明显减少,但共孵育组比预刺激细胞组胞内活菌数减少更为明显;荧光显微镜观察显示,两组微丝均有解聚成颗粒状向核周聚集现象,流式细胞术检测发两组细胞骨架微丝蛋白的平均荧光量减少,而油镜下HMGN2处理菌与未处理菌比较,其菌体长短径无明显的变化。结论 HMGN2属于内源性抗菌肽家族分子,可能通过促进细胞内微丝蛋白解聚成单体,减弱了KP内化入膀胱上皮细胞。; 郭小娟石艳娥刘珉宇殷明吴桂霞沈晓飞杨晓龙郑爽李娜任来彬王馨苑李婧瑜王晓樱黄宁

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美国中华医学基金(98-681)

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