国家自然科学基金(30870741)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：刘永彪姚志峰吴银霞潘志尧肖楠更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院江苏联合职业技术学院更多>>
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- PEI介导的E1A基因对结肠癌细胞放疗增敏效应的研究
- 2011年
- 以自行合成的聚乙烯亚胺纳米凝胶(Polyethylenimine,PEI)为载体转染E1A基因,观察E1A基因对结肠癌细胞体外生长的抑制作用和对电离辐射的增敏效应,并初步探讨其作用机理。经PEI介导将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv-E1A导入人结肠癌细胞系SW480,RT-PCR证实其转染,G418筛选出阳性克隆细胞。通过测绘生长曲线,观察E1A基因对该细胞系生长的抑制作用。流式细胞术检测转染前后SW480细胞的细胞周期分布变化。用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定电离辐射对SW480转染E1A基因前后的效应。用Western-blot方法测定结肠癌细胞SW480转染质粒psv-E1A前后HER-2蛋白表达量的变化。(1)G418筛选出阳性克隆细胞。(2)RT-PCR结果显示PEI能转染质粒psv-E1A并有稳定的表达。(3)流式细胞仪测细胞周期,与SW480细胞相比,SW480-E1A细胞S期呈下降趋势(p<0.001);G2/M期增加显著(p<0.001);G1期细胞无明显变化(p>0.05)。(4)MTT法测量SW480细胞及SW480-E1A细胞不同时间的吸光度值,可见转染E1A基因细胞群体生长缓慢。(5)转染E1A基因后,SW480-E1A细胞对电离辐射的敏感性显著提高(p<0.001)。(6)E1A基因明显降低结肠癌细胞中HER-2蛋白的表达量。PEI能转染质粒psv-E1A,E1A基因能够明显抑制结肠癌细胞的生长,并明显提高其对放射线的敏感性。
- 吴银霞刘东方刘永彪徐冬梅姚思德盛康龙
- 关键词：E1A基因基因转染结肠癌细胞聚乙烯亚胺放疗
- 多聚乙烯亚胺介导肿瘤细胞基因转染被引量：1
- 2012年
- 目的:利用阳离子多聚物多聚乙烯亚胺(PEI)纳米凝胶将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转入同步化的肿瘤细胞中并检测绿色荧光蛋白的表达率,探讨PEI作为载体介导肿瘤细胞基因转染中细胞周期对转染效率的影响。方法:通过6 MV X线照射及药物阻滞使Hela及A549细胞同步化,在5个PEI/DNA梯度比(2/2、4/2、6/2、8/2、10/2μg/μg)下利用PEI介导EGFP报告基因转染进入上述同步化细胞,流式细胞仪和荧光显微镜下测定绿色荧光蛋白表达率,通过梯度试验分析细胞周期时相与表达率之间的关系。结果:在不同增殖状态及PEI/DNA比值梯度下,一定剂量-时间的X射线和顺铂可以使Hela细胞同步化于S期,一定剂量-时间的艾素可以使A549细胞同步化于G2/M期,而血清饥饿法培养则可以使细胞阻滞于G0/G1期,在不同细胞周期时相下EGFP的转染效率不同,两种同步化细胞均表现出S期及G2/M期细胞的转染率显著高于对照组(P<0.05)和G0/G1期细胞(P<0.0001)。结论:PEI导入基因的表达效率受细胞周期制约,PEI介导的基因转染受到宿主细胞摄取、转运入核及转录能力的影响,而该进程都是细胞周期依赖性的。
- 鲁悦杨航袁林徐国平姚志峰刘永彪
- 关键词：多聚乙烯亚胺转染细胞周期HELA细胞A549细胞
- 荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖及其辐射敏感性的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探讨荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖以及辐射增敏性的影响。方法体外培养人肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验。采用活细胞计数盒(CCK-8)法测定荜茇酰胺对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术观察细胞周期和凋亡。结果荜茇酰胺明显抑制A549细胞的增殖,引起细胞凋亡和细胞G_0/G_1期的阻滞。荜茇酰胺联合X射线照射能明显增加细胞的增殖抑制率和细胞凋亡。结论荜茇酰胺可明显抑制人肺腺癌细胞的生长增殖。低浓度的荜茇酰胺增加了人肺腺癌细胞的辐射敏感性,可能与其促进细胞的增殖抑制、诱导细胞凋亡、引起G_0/G_1期阻滞有关。
- 肖楠姚建新徐党辉李占峰潘志尧姚志峰
- 关键词：肺腺癌A549细胞增殖细胞周期凋亡
- MiR-100在卵巢癌中的表达及调控作用被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨微小RNA-100(miR-100)与卵巢癌之间的相关性,以及miR-100调控卵巢癌细胞功能的机制。方法:采用实时荧光定量反转录PCR技术(qRT-PCR)对7例卵巢癌组织样本和细胞株A2780、Skov3进行检测,分析组织和细胞中miR-100的表达差异。通过细胞功能实验分析miR-100调控卵巢癌发生发展的机制。结果:卵巢癌患者组织中miR-100的相对表达水平显著低于正常对照组织(P<0.05),在两种卵巢癌细胞株中miR-100的相对表达水平也显著低于对照组人永生化卵巢上皮细胞(P<0.05)。细胞功能实验显示,过表达miR-100能显著抑制卵巢癌细胞株的细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡。结论:MiR-100在卵巢癌中表达降低,揭示其可能在卵巢癌的发生发展过程中发挥着抑癌基因的功能。
- 袁林靖璟刘永彪
- 关键词：卵巢癌MICRORNAMIR细胞功能
- 叶酸靶向顺铂聚合物胶束对肺癌细胞SPC-A-1的毒性和辐射增敏作用
- 2012年
- 以顺铂为对照,使用具有叶酸靶向基团的聚乙二醇枝接聚天冬氨酸聚合物胶束顺铂载体FA-PEG-g-PAsp-CDDP和无叶酸靶向基团的mPEG-g-PAsp-CDDP,通过比较这3种药物对肺癌细胞SPC-A-1体外的细胞毒性以及单独用药和同步放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,验证FA-PEG-g-PAsp-CDDP的肿瘤抑制和辐射增敏效果。在体外CCK-8实验中比较顺铂、FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP对过表达叶酸受体的肺癌细胞株SPC-A-1的细胞毒性作用,在体内试验中比较顺铂、FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP单独用药和同步放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制及放射增敏作用,并观察对裸鼠体重的影响。结果显示:含过量叶酸的普通培养基中FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP的细胞毒性作用相似,而在不含叶酸培养基中FA-PEG-g-PAsp-CDDP的细胞毒性高于mPEG-g-PAsp-CDDP,IC50约为后者的1/(3p<0.05)。单独用药实验中FA-PEG-g-PAsp-CDDP和CDDP体内抑瘤效果无统计学差异(p>0.05),但均高于mPEG-g-PAsp-CDDP组和空白对照组(p<0.05);同步放化疗实验中FA-PEG-g-PAsp-CDDP的抑瘤效果优于CDDP(p<0.05),并且两者均优于mPEG-g-PAsp-CDDP组和单独放疗组(p<0.05)。裸鼠CDDP给药后体重下降明显,最多下降约10%,而FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP组裸鼠体重无明显下降。FA-PEG-g-PAsp-CDDP能有效抑制肿瘤生长,叶酸靶向基团增强了其对过表达叶酸受体肿瘤的抑制作用,并且较CDDP有更强的放射增敏效果和更低的毒副作用。
- 黄宇翔王萱怡刘永彪吴银霞杨航姚志峰徐国平
- 关键词：顺铂叶酸聚合物胶束肿瘤靶向肺癌细胞
