国家重点基础研究发展计划(2001CB510003)
- 作品数：21 被引量：81H指数：7
- 相关作者：张学光於葛华朱一蓓施勤陈永井更多>>
- 相关机构：苏州大学上海第二医科大学苏州大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 天花粉蛋白通过激活CD8Tc2亚群诱导人体免疫抑制被引量：10
- 2005年
- 为了探讨天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的机制,采用抗原非特异性T淋巴母细胞增殖系统,筛选了37个Tk致敏的抑制性T细胞系。分析表明,健康人体内Tk相关抑制性T细胞的频率为5.0×10-7～10.8×10-7,该细胞系属CD8+TCRαβ+,细胞因子表达格局呈现向IL-4和IL-10明显偏移和IFN-γ分泌明显下降的格局。结合我们已有关于CD8+T细胞介导Tk相关应答而不显示细胞毒性的工作,可从表型和功能分析上确认,Tk针对体外人体淋巴细胞增值的免疫抑制,由CD8Tc2细胞介导。
- 周芸周洪王保龙陶箭江阳辛利军张冬青周光炎
- 关键词：天花粉蛋白免疫抑制
- CD40配基化的肿瘤特异性树突状细胞介导Th1细胞分化的研究
- 2006年
- 目的:探讨CD40配基化的肿瘤特异性DCs在介导Th1细胞分化中的作用。方法:采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DCs,并利用mCD40L-CHO和TNF-α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的DCs制备DCs瘤苗;3H-TdR掺入试验检测DCs对T淋巴细胞的促增殖效应;ELISA测定细胞培养上清中IL-10、IFN-γ、IL-12的含量;胞内染色和流式细胞术检测经成熟DCs活化的T细胞中CD4+IFN-γ+T和CD4+IL-4+T的比例。结果:体外刺激T细胞增殖能力在CD40配基化DCs组最高(P<0.05),CD40配基化DCs能更有效地促进活化T细胞分泌IFN-γ和介导CD4+IFN-γ+T细胞的分化(P<0.05),同时,CD40配基化DCs分泌IL-12的量也明显高于TNF-α组(P<0.05)。结论:CD40配基化的肿瘤特异性DCs体外能有效介导Th1细胞的分化。
- 陈成朱一蓓瞿秋霞周桓王勤於葛华李文香张学光
- 关键词：树突状细胞CD40TH1细胞
- 系统性红斑狼疮患者外周血白介素2和白介素6及其受体的研究被引量：9
- 2003年
- 目的探讨白介素2(IL-2)、白介素6(IL-6)及其受体在系统性红斑狼疮(SLE)患者治疗前后的变化及其意义。方法采用酶联免疫吸附法和免疫荧光标记流式细胞仪检测技术对SLE患者治疗前后和正常人外周血IL-2和IL-6及其受体水平进行测定分析。结果①SLE患者IL-2水平显著低于正常人对照(P<0.05),而sIL-2R、IL-6、sIL-6R均显著增高;②SLE患者sIL-2R、IL-6、sgp80与SLE病情活动指数(SLEDAI)呈显著正相关;③SLE患者治疗后sIL-2R和sgp80水平与治疗前相比,差异均有显著性。结论IL-2、IL-6及其受体是参与SLE免疫病理机制的重要细胞因子,其中sIL-2R、IL-6及sgp80与病情活动性密切相关,sIL-2R、sgp80对判断疗效可能具有重要意义。
- 钱齐宏张学光殷昌硕顾宗江邱玉华王宝涛刘铭杨晓惠
- 关键词：SLESIL-2R受体白介素6白介素2
- LacZ基因在哺乳动物细胞中的稳定表达及其检测方法被引量：3
- 2002年
- 目的 构建含有LacZ标记基因的真核表达载体和稳定表达LacZ的转基因细胞 ,并建立简易有效的检测方法。方法 采用脂质体转染法将装有LacZ基因的真核表达载体 pcDNA3导入鼠成纤维细胞L92 9,G418筛选LacZ基因稳定表达细胞株 ,并应用超声波破碎和贴壁细胞悬浮培养的方法来检测转基因细胞的转染率及目的蛋白的表达。结果 成功构建了稳定表达LacZ基因的转基因细胞 ,超声波破碎后其上清与 β-半乳糖苷酶 (LacZ)的底物X - gal反应显兰色 ;铺有固体琼脂粉的平皿中细胞培养至第 4天开始显兰色 ,并随时间的延长 ,比率增加 ,最终可高达 10 0 %。结论 LacZ基因在哺乳动物细胞中可稳定表达 。
- 陈永井施勤徐宽枫周斌张学光
- 关键词：LACZ基因哺乳动物细胞
- 胃癌组织中B7-H3的表达及其与预后的关系被引量：10
- 2006年
- 吴昌平朱一蓓赵洁敏王赫徐宽枫张光波张学光
- 关键词：B7-H3胃癌组织预后细胞毒T淋巴细胞肿瘤免疫应答B7家族
- CD40配基化调节小鼠树突状细胞上B7-H3分子表达的研究被引量：5
- 2006年
- 目的探讨CD40配基化对小鼠骨髓来源树突状细胞上B7H3分子表达的调节作用及其生物学意义。方法采用GMCSF和IL4联合方案体外诱导小鼠髓系DC,并利用mCD40LCHO和TNFα分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的DC制备成熟DC;采用间接免疫荧光标记法检测成熟DC上B7H3分子的表达;RTPCR检测B7H3mRNA转录水平;混合淋巴细胞反应(MLR)和B7H3单抗阻断实验分析CD40配基化的DC表面B7H3分子在T细胞活化中的作用;3HTdR掺入试验检测DC对T淋巴细胞的促增殖效应;ELISA测定各组MLR反应和DC培养上清中IFNγ的分泌水平。结果B7H3分子在DC不同分化发育阶段均有表达,CD40配基化能显著上调凋亡肿瘤细胞负载的DC中B7H3表达,TNFα激发的DC弱表达(P<0.05);阻断CD40配基化的DC上B7H3分子能抑制T细胞增殖和IFNγ的分泌;CD40配基化促进凋亡肿瘤细胞负载的DC分泌IFNγ的量也明显高于TNFα组(P<0.05)。结论体外CD40配基化DC的B7H3分子上调性表达有助于其刺激T细胞增殖和IFNγ的产生。
- 陈成朱一蓓周桓瞿秋霞王勤马倩茹胡玉敏张学光
- 关键词：树突状细胞CD40B7-H3
- 鼠抗人CD28功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定被引量：8
- 2003年
- 以天然表达CD28分子的人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞:XG-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,CD28转基因细胞株(T-28)及XG-1为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和多次的克隆化培养,最终获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为10F3。对这株单抗生物学功能的研究结果表明,这株抗体能特异性地识别人CD28分子和介导有效的共刺激信号,激发T细胞的活化和增殖。
- 居颂文刘琳居颂光於葛华潘建忠邱玉华张学光
- 关键词：CD28杂交瘤多发性骨髓瘤单克隆抗体
- 人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究
- 2005年
- 目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及IL2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。
- 施勤陈永井孙建军马泓冰姜智毛一香张学光
- 关键词：OX40L生物学功能
- 人OX40转基因细胞株的建立及其对树突状细胞的促分化作用被引量：7
- 2003年
- 应用RT PCR方法 ,从PHA活化的扁桃体T细胞的mRNA中 ,扩增获得编码人OX4 0分子的cDNA ,并将其克隆到pMD18 T载体 ,经PCR、酶切和测序鉴定确证。进而构建pcDNA3 1 OX4 0重组真核表达载体 ,脂质体法转染L92 9细胞 ,经G4 18筛选 ,获得能稳定高表达OX4 0分子的细胞株。经OX4 0 FITC单抗标记和FCM检测 ,阳性表达率为 89 1%。转基因细胞在可溶性CD4 0L共存条件下 ,与未成熟DC共育 ,能促进DC的进一步分化成熟 ,使DC膜分子CD4 0、CD86和CD83呈上调性表达。
- 孙建军施勤王勤朱一蓓陈洁陈永井张学光
- 关键词：基因转染共刺激分子树突状细胞
- 人乳腺癌OX40L转基因细胞株的构建及其对T细胞的共刺激作用被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:共刺激分子OX40(CD134)和OX40配体(OX40L、CD134L)分属TNFR、TNF家族,OX40-OX40L信号能促进细胞因子的产生及提高抗原特异性记忆T细胞的数量,发挥重要的免疫调节作用。本实验旨在构建稳定表达OX40配体(OX40L)的人乳腺癌转基因细胞株,进而研究OX40-OX40L信号对T细胞体外活化和功能的调节作用。方法:运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人成熟树突细胞(dendriticcell,DC)获得全长人OX40L基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-OX40L转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435;经过G418抗性筛选和亚克隆,获得稳定表达OX40L的转基因细胞,并经RT-PCR和免疫荧光标记确证靶分子的表达;采用MTT、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光标记等方法分析转基因细胞对T细胞的增殖、IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌和T细胞上Fas分子表达的影响。结果:成功地获得稳定表达人OX40L分子的人乳腺癌MDA-MB-435转基因细胞株,该细胞株可有效地促进T细胞增殖,促进T细胞分泌IL-2和IFN-γ,在第7天,T细胞、T细胞+M435、T细胞+M435-mock、T细胞+M435-OX40L各组IL-2的浓度依次为:315ng/ml、322ng/ml、586ng/ml、973.4ng/ml;IFN-γ浓度依次为:(2518±117.6)pg/ml、(2490±124.2)pg/ml、(2695±134.5)pg/ml、(3755±187.75)pg/ml,该基因转染细胞同时还能下调T细胞上Fas分子的表达[(68.3±5.6)%,P<0.05]。结论:稳定表达人OX40L的乳腺癌转基因细胞在体外能有效地活化T细胞,介导其增殖、分泌细胞因子及抑制T细胞活化诱导的细胞死亡。
- 施勤王勤陈永井孙建军葛彦张学光
- 关键词：T细胞
