国家自然科学基金(81172399)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：于春江王轩康春生韩磊佟小光更多>>
- 相关机构：天津市环湖医院首都医科大学三博脑科医院天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-20a/106b调控NKG2D途径介导儿童型脑干胶质瘤免疫逃逸的实验研究被引量：4
- 2021年
- 目的探讨miR-20a/106b在儿童脑干胶质瘤(BSG)恶性进展中的作用及其机制。方法回顾性纳入2012年1月至2017年12月天津市环湖医院(天津市脑系科中心医院)神经外科接受手术切除的13例儿童BSG患者和5例成人BSG患者。采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织标本中自然杀伤细胞2家族成员D(NKG2D)配体MICA的表达情况,采用生物信息学方法筛选出调控MICA的miRNA。应用人脑胶质瘤LN229和U251细胞株通过荧光素酶报告基因方法验证筛选出的miRNA与MICA的靶向调控关系,通过蛋白质免疫印迹(WB)实验检测miR-20a/106b转染LN229和U251细胞株后MICA的表达情况,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫细胞对LN229细胞株的毒性能力。通过向去胸腺幼年(3周龄)和成年(10周龄)雄性SD大鼠脑桥区立体定向注射LN229细胞株的方法制备BSG幼鼠(J-rat)和成年鼠(A-rat)模型,并根据注射细胞株不同各分为3组,依次为J-rat组、J-rat-scr组、J-rat-miR-20a/106b-d组和A-rat组、A-rat-scr组、A-rat-miR-20a/106b-u组(每组各3只),通过免疫组织化学染色方法检测MICA的表达情况,采用MCID软件检测肿瘤的侵袭性,采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果成人患者的MICA总阳性表达率较儿童患者高(分别为5/5、10/13,P<0.05)。检索结果显示,有23个可能调控MICA的microRNA,其中包括miR-20a和miR-106b。在LN229细胞株中,荧光素酶报告基因结果显示,转染pGL3-MICA-wt(野生型)质粒的荧光强度较对照组和转染pGL3-MICA-mut(突变型)质粒的强(均P<0.05);WB结果显示,与空白对照组和无义序列组比较,AS-miR-20a组、AS-miR-106b组及AS-miR-20a/106b组MICA的表达均增加(均P<0.05)。上述实验在U251细胞株得到相似的结果。不同效靶比(20∶1,10∶1,5∶1)情况下,AS-miR-20a/106b组LDH的活性高于对照组和AS-miR-20a/106b+MICA mAb组(均P<0.05),但后两组的差异无统计学意义(均P>0.05)。术后头颅MRI结果显示,3组幼鼠和3组成年鼠均成
- 王轩陈钦尚彦国施铭岗王虎佟小光韩磊康春生于春江
- 关键词：脑干儿童肿瘤逃逸
- 儿童型与成人型脑干胶质瘤差异性的相关miRNA表达谱初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的筛选儿童型脑干胶质瘤（BSG）对照于成人型BSG差异表达的miRNA，为探索儿童型BSG发病机制和治疗中的miRNA干预策略提供可供选择的目标miRNA。方法利用miRNA芯片检NJL童型与成人型BSG原位动物模型的miRNA表达谱，分析二者差异性表达的miRNA，并挑选差异表达最明显的miRNA在两种BSG的人体标本中进行qRT-PCR和原位杂交验证。结果两个组别中共检测到216个miRNA表达，以成人型BSG为比照，儿童型BSG中3．5倍以上差异表达上调的miRNA10个、下调的29个。其中差异最明显的为miR-20a和miR-106b，选取二者在两种BSG的人体标本中进行qRT—PCR和原位杂交验证，结果提示芯片结果适用于人类。结论研究两种BSG的差异性表达的miRNA，将会为解释儿童型BSG较之成人型BSG的恶性进展及以此为控制BSG这-严重威胁儿童生命的疾病提供新的思路。
- 王轩张宏伟于春江张安玲韩磊浦佩玉申长虹康春生王坤
- 关键词：脑干肿瘤微RNAS基因表达谱微阵列分析
- 腺病毒载体介导shRNAs共调控胶质母细胞瘤细胞中miR-221／222的表达及功能的体外研究被引量：2
- 2016年
- 目的构建能够对胶质母细胞瘤小分子RNA（miR）-221和miR-222达到多层次、半定量、共调控效果的腺病毒载体系统。方法应用载体融合和短发夹RNA（shRNA）引导链3＇端突变的策略构建出突变型（mut）-shmiR-221/222和经典型（class）-shmiR-221/222 2种共表达腺病毒载体并转导入LN229和U251细胞中，分别为class-shmiR-221/222转导组、mut-shmiR-221/222转导组，同时设空白对照组，采用实时荧光定量PCR检测3组细胞miR-221/222的表达，Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（1Bp27kip1）蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞周期G1期阻滞情况，倒置相差显微镜观察细胞形态的变化，Caspase-3/7萤光素酶法检测细胞凋亡，编写基于核苷酸循环基序（NCM）的软件，推断shRNA和靶miR的准确三维结构并计算相应的自由能状态。结果空白对照组、mut-shmiR-221/222转导组、class-shmiR-221/222转导组细胞miR-221/222的表达依次下调；p27kip1表达水平依次上调；G0/G1期比例依次上调，S期比例依次下调，G1期阻滞比例依次上调；细胞破坏和丧失原有形态的程度依次上调，细胞数量依次下调；细胞凋亡依次增加，差异均有统计学意义（P〈0.05）；自由能计算结果显示，mut-shmiR-221/222转导组（-32.7、-32.7）的引导链与靶miR结合时发生作用的热力学稳定性较class-shmiR-221/222转导组（-42.1、-41.5）减低。
结论成功构建shRNA共表达腺病毒载体，利用shRNA引导链3＇端突变的策略影响热力学稳定性可以对胶质母细胞瘤细胞miR-221/222多层次、半定量调控。
- 王轩韩磊张安玲王广秀浦佩玉于春江申长虹佟小光康春生
- 关键词：胶质母细胞瘤小分子RNA腺病毒载体
