广东省科技计划工业攻关项目(2003C20310)
- 作品数：5 被引量：49H指数：5
- 相关作者：白俊杰叶星夏仕玲简清王海英更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所上海水产大学暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技基础条件平台建设计划广东省重大科技兴渔项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 唐鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其驱动活性的检测被引量：6
- 2008年
- 利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthy salbonubes)β-actin基因。所克隆的β-actin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAATBox、TATABox、CArGBox等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较高。PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织,在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southernblot验证显示RFPmRNA的表达有所不同;Southern blot检测肌肉组织基因组DNA,可见比阳性载体大的杂交条带。说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合,但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象。本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能,可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达,从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础。
- 王海英叶星白俊杰夏仕玲劳海华简清王琳
- 关键词：唐鱼红色荧光蛋白转基因显微注射
- 转红色荧光蛋白基因斑马鱼的构建
- 采用PCR方法,改造肌球蛋白轻链2启动子,使其适合定向插入红色荧光蛋白载体的多克隆位点,构建成肌肉特异性表达的红色荧光载体。通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转红色荧光蛋白基因的斑马鱼。红色荧光蛋...
- 简清白俊杰叶星夏仕玲劳海华罗建仁
- 关键词：斑马鱼红色荧光蛋白转基因肌球蛋白启动子
- 文献传递
- 斑马鱼Mylz2启动子的克隆与转绿色荧光蛋白基因鱼的构建被引量：34
- 2004年
- 为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启动子插入绿色荧光蛋白基因载体,构建成肌肉特异性表达载体。通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转绿色荧光蛋白基因的斑马鱼。绿色荧光蛋白在胚胎期开始表达,随着鱼体的生长表达量有增加的趋势,成鱼在紫外灯下用肉眼即可观察到绿色荧光。转基因鱼绿色荧光蛋白的表达具有明显的肌肉特异性。本研究为下一步特定基因的表达研究和获得有特色的转基因观赏鱼奠定了基础。
- 简清白俊杰叶星夏仕玲梁旭方罗建仁
- 关键词：斑马鱼绿色荧光蛋白转基因肌球蛋白启动子
- 唐鱼β-actin基因近端和远端启动子的鉴定及其启动活性分析被引量：8
- 2008年
- 利用高保真PCR技术获得唐鱼(Tanichthys albonubes)长为1.3 kb的β-肌动蛋白(β-actin)近端启动调控序列(TA,1.3 kb)。在此基础上采用基因组步移技术(Genome walker)获得5′侧翼上游序列1.7 kb,再根据所获的近端启动子序列和上游序列设计引物,扩增获得全长为3.0 kb的唐鱼β-actin基因远端启动调控序列(TLA,3.0 kb)。此1.3 kb和3.0 kb启动调控序列均包含3个转录活性元件:CAAT Box(-89^-85),CArG Box(-59^-49),TATA Box(-26^-20)。利用启动子分析软件TRANSFAC 6.0分析,结果显示启动调控序列(-105~1261)中含有E-Box、NF-Y、Sp1等多个重要转录因子结合位点,在远端启动调控序列(-1719~1261)中还含有更多的重要转录因子结合位点。将这两个序列分别定向克隆到红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)表达载体中,构建重组表达载体pTLA-DsRed和pTA-DsRed,并分别注射到唐鱼受精卵中,结果显示转pTLA-DsRed基因唐鱼的阳性率较转pTA-DsRed的高,且所发出的红色荧光的强度也比后者的强。采用RT-PCR检测孵化后第15天的转基因唐鱼中RFP的mRNA,结果显示转pTLA-DsRed基因唐鱼中RFP mRNA的表达量比转pTA-DsRed基因唐鱼高35.7%。结果表明两种长度的启动调控序列均能有效驱使外源基因在唐鱼体内表达,且长度为3.0 kb的启动子序列具有更强的驱动活性。
- 王海英叶星劳海华夏仕玲白俊杰简清
- 关键词：唐鱼红色荧光蛋白显微注射转录活性
- 转基因水生动物的应用研究被引量：5
- 2007年
- 1966年Lin首次报道了将外源基因注入小鼠卵中的显微注射方法。1982年诞生了首例转基因动物——转基因小鼠。1984和1985年转基因虹鳟和鲫鱼研究获得成功。经过二十多年来的努力，转基因水生动物尤其是转基因鱼的研究有了长足的发展。转基因水生动物研究可分为基础研究及应用研究两方面。基础研究方面，与哺乳类相比鱼类产卵量大、胚胎经基因转移操作后不需放回母体内培育，且携带的与人类相关的病原体较少，因此硬骨鱼类成为脊椎动物生物学研究的模型动物，通过转基因以研究基因的结构与功能、基因的表达调控、发育生物学、生理学、遗传学等。应用研究方面，通过转基因技术培育经济性状得到改善的水生动物新品种，以提高其生长速度和饲料转化率，改善品质，控制繁殖或性别表型，增强对病原体的抗性、对环境因子的耐受性或生存能力等；通过转基因使水生动物作为生物反应器表达生产重要药物或生物活性物质；通过转基因改变观赏鱼的表型提高其观赏价值等。有学者预测鱼类将会是首先进行商业性应用的转基因动物，也有学者预测转基因鱼进入市场有望在我国首先实现。笔者对转基因水生动物应用研究方面的进展及存在问题作一综述。
- 叶星王海英简清白俊杰劳海华
- 关键词：转基因水生动物
