国家自然科学基金(30500458)
- 作品数：13 被引量：82H指数：6
- 相关作者：刘景晶吴洁曹荣月尹鸿萍李泰明更多>>
- 相关机构：中国药科大学南京中医药大学徐州师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>
- 热休克蛋白65及其融合蛋白Hsp65-6×P277的分离纯化和稳定性研究(英文)被引量：6
- 2007年
- 来源于牛分枝杆菌的热休克蛋白65(Hsp65)在没有佐剂的情况下可作为载体分子将抗原表位递呈给免疫系统。热休克蛋白具有蛋白酶的催化活性,容易发生自溶而降解,这制约了基于Hsp65疫苗的研究。该研究中,建立了纯化Hsp65及其融合蛋白Hsp65-6×P277(P277为来源于人热休克蛋白60的肽段,线性重复6次)的方法。Hsp65与Hsp65-6×P277以可溶形式表达于大肠杆菌。在低温及添加EDTA的条件下经细胞裂解、硫酸铵沉淀及阴离子交换树脂等纯化方法,可得到电泳纯的目的蛋白。用纯化的融合蛋白Hsp65-6×P277免疫小鼠,可激发机体产生强烈的免疫应答,该融合蛋白有希望作为免佐剂的糖尿病疫苗加以进一步研究开发。
- 陈庆梅吴国君吴洁李泰明曹荣月刘景晶
- 关键词：融合蛋白纯化降解
- 热休克蛋白HSP65DNA疫苗抑制黑色素瘤血行转移的实验研究被引量：4
- 2009年
- 观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65的DNA疫苗对小鼠B16/F10黑色素瘤血行转移的抑制作用。构建含HSP65编码基因的真核分泌表达DNA疫苗pCR3.1-VS-HSP65及其后融合多个T细胞辅助表位的pCR3.1-VS-HSP65-TP-M2。连续8次肌肉注射免疫C57BL/6J雄性小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HSP65-IgG类抗体滴度,于最后一次免疫后第2周,尾静脉接种B16/F10黑色素瘤细胞,考察该疫苗的免疫原性及药效。ELISA结果显示两种HSP65核酸疫苗均能诱发高滴度抗HSP-IgG类抗体。pCR3.1-VS-HSP65-TP-M2诱发抗体滴度较pCR3.1-VS-HSP65显著增加,并能显著抑制B16/F10的血行转移(P<0.05),且与生理盐水对照组对比抑瘤率达到74.8%(肝),53.2%(肺)。HSP65在增强其免疫原性的基础上能显著抑制B16/F10黑色素瘤的血行转移。
- 林明鲁勇张宇谢燕飞胡向兵王华倩李泰明吴洁刘景晶曹荣月
- 关键词：热休克蛋白HSP65DNA疫苗黑色素瘤抑瘤率
- 热休克蛋白保守性B细胞表位黏膜免疫可增强免疫应答(英文)
- 2008年
- 目的:通过分枝杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位多次免疫小鼠,研究热休克蛋白65(HSP65)与动脉粥样硬化之间的关系。方法:PCR技术扩增出HSP65上与动脉粥样硬化密切相关的6个B细胞表位基因。将这6个表位的基因分成两组,分别与CTB基因相融合并在大肠杆菌中表达。两种蛋白表达产物经过分离、纯化、混合复性,复性后的蛋白经GM1-ELISA证明可在体外自组装成5聚体。用复性后的重组蛋白小剂量多次滴鼻免疫ICR小鼠,然后用大量的HSP65蛋白经皮下免疫,采集血样,ELISA检测小鼠血清中抗HSP65的抗体。结果:重组蛋白预免疫ICR小鼠后,可以使免疫组较对照组对随后的大量HSP65刺激产生更加强烈的免疫反应。结论:分枝杆菌热休克蛋白保守性B细胞表位经鼻黏膜的反复预免疫强化了小鼠对随后攻击性免疫的反应。
- 贾绍辉邓双玲熊祺琰张宇刘景晶曹荣月
- 关键词：热休克蛋白65B细胞表位
- 抗动脉粥样硬化核酸疫苗安全性的初步研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究抗动脉粥样硬化核酸疫苗的安全性。方法:观察该质粒在小鼠组织中的分布和急性毒性,并在正常给药的情况下对新西兰大白兔进行6个月毒性试验。采用肌肉注射20μg/只和100μg/只,用PCR法检测外源基因在小鼠组织的分布和存留时间;同样采用肌肉注射,对最高剂量达到50mg/kg体重的小鼠进行急性毒性试验。结果:实验证明该核酸疫苗在注射部位可存留时间为8周,其他组织如心、肝、脾、肺、肾、脑和生殖器官也有低水平分布,急毒试验显示,在剂量达到有效剂量的60倍的情况下,无可观察到的毒性反应发生,小鼠血液学和生化指标亦无异常;新西兰大白兔毒性观察,体内生化指标以及解剖学研究结果表明,该药无可观察到的毒性反应发生。结论:该核酸疫苗无可观察到的明显毒性反应,安全性良好。
- 叶家辉吴洁茅丹顾凯曹荣月刘景晶
- 关键词：核酸疫苗动脉粥样硬化安全性评价急性毒性
- L-天冬酰胺酶表面呈现对P277肽免疫原性及抗NOD小鼠糖尿病作用的影响(英文)
- 2007年
- 将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生高水平抗P277抗体.研究表明,P277肽可呈现于L-天冬酰胺酶表面,有效地克服单独P277的弱免疫原性,激发机体产生较强烈的免疫反应.小鼠胰腺病理学切片也显示:重组嵌合酶AnsB-TTP-P277和单纯P277肽相比,能更有效地抑制NOD小鼠糖尿病的发生.
- 朱爱华刘文涛龙军吴洁刘景晶李泰明
- 关键词：L-天冬酰胺酶胰岛素依赖型糖尿病血糖
- 融合蛋白HSP65-6×P277在NOD鼠中降糖作用的机制研究(英文)
- 2009年
- 目的:探讨融合蛋白HSP65 -6×P277在NOD鼠中的降糖作用机制。方法:融合蛋白HSP65 -6×P277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。观察该融合蛋白对NOD小鼠血糖,细胞因子水平,抗体类型和胰腺炎严重程度的影响。结果:融合蛋白HSP65 -6×P277免疫组动物血清中含有高水平的IL-4和低水平的IL-2 ,P277特异性抗体类型主要为IgGl和IgG2b,IgG2a水平较低;T细胞增殖实验的培养上清中含有较高水平的IL-10和较低水平的IFN-γ;胰腺炎的严重程度和1型糖尿病的发病率显著降低。结论:诱导了Th2免疫反应可能是HSP65-6×P277预防1型糖尿病发生的作用机制之一。
- 金亮王宇朱爱华刘景晶
- 关键词：热休克蛋白65TH1/TH2细胞
- 虫草多糖中单糖组成的柱前衍生化HPLC分析被引量：20
- 2008年
- 建立了柱前衍生化HPLC法测定虫草多糖中单糖的组成及摩尔比。采用C18柱,以0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.7)-乙腈(83∶17)为流动相,检测波长254nm。衍生化试剂为1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮。所测3批样品中虫草多糖由甘露糖、葡萄糖、半乳糖3种单糖组成,单糖的摩尔比约为2∶2∶1。平均回收率分别为101.0%、98.6%和99.2%,RSD分别为1.9%、1.6%和1.2%。
- 凌云王玉峰王莹徐旭东尹鸿萍
- 关键词：虫草多糖单糖高效液相色谱
- 虫草多糖治疗家犬夹闭肾动脉引起的急性肾衰被引量：9
- 2007年
- 探讨了虫草多糖对家犬夹闭肾动脉造成的急性肾衰的治疗作用。将实验动物家犬分为假手术组、阴性模型组、阳性组、虫草多糖高、中、低三个剂量组,观察治疗后犬的肾功能、血液生化指标、尿常规、肾脏病理的变化。发现虫草多糖组肾功能受损程度明显轻于阴性模型组(P<0.01),肾脏病理损伤明显减轻。实验证明虫草多糖能够治疗肾缺血诱发的急性肾功能衰竭,其机理可能与改善肾功能、增加肾血流量、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。
- 尹鸿萍吕小波陈希
- 关键词：虫草多糖肾缺血急性肾衰
- 金针菇菌丝体中多糖的分离、结构鉴定及免疫学活性被引量：29
- 2008年
- 目的:研究金针菇菌丝体的多糖成分进行理化性质及免疫活性。方法:通过热水提取、去蛋白、除色素、乙醇沉淀得到金针菇多糖(Flammulina velutipes polysaccharides,FVP),再通过离子交换法、凝胶柱层析法进行进一步纯化得到精品FVP-1,FVP-2。运用高效凝胶渗透色谱(HPGPC),柱前衍生化高效液相色谱(PDHPLC),IR和13CNMR等方法测定两种多糖的结构。由淋巴细胞转化试验检测多糖的免疫活性。结果:FVP-1相对分子质量为Mw=1.48×104,FVP-2为Mw=2.73×104。FVP-1单糖摩尔比为葡萄糖(Glc):半乳糖(Gal):甘露糖(Man)=100:2.5:1.5;FVP-2为Glc:Gal:Man:岩藻糖(Fuc)=100:14:7:4。FVP-1主要以[α-D-Glc(1→4)-]为主链,带有α-D-Glc(1→6)分支。FVP-2结构较复杂,存在多种单糖组成,葡萄糖具有α,β两种构型。FVP、FVP-1、FVP-2均有显著的促进细胞增值作用。结论:FVP-1,FVP-2相对分子质量、单糖组成及连接方式均存在差别,其中FVP-2具有更强的免疫增强活性。
- 王玉峰王旻尹鸿萍
- 关键词：金针菇多糖分离纯化免疫学活性淋巴细胞转化
- 虫草多糖含药血清对TGF-β_1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达的影响被引量：7
- 2009年
- 目的观察虫草多糖(CP)含药血清对TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达的影响,探讨CP治疗慢性肾衰肾小球纤维化的机制。方法结合血清药理学方法制备CP含药血清样品,用TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖,试验分空白对照组、对照组、高、中、低浓度5组,MTT法检测HMC的增殖及抑制率,ELISA法检测正常人肾小球系膜细胞株(HMC)中Ⅳ型胶原表达。结果CP含药血清均可明显抑制TGF-β1诱导的HMC增殖,含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的HMC中Ⅳ型胶原的表达,以高、中浓度组最显著(P<0.01)。结论CP含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原表达,这可能是CP治疗慢性肾衰的机理之一。
- 陈涛尹鸿萍王莹李海涛
- 关键词：虫草多糖肾小球系膜细胞
