重庆市自然科学基金([2005]54)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 相关作者：张晓刚常静李卫东蒋芳萍更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养方法被引量：7
- 2008年
- 背景：目前已经建立了数百个小鼠的胚胎干细胞系，这些细胞系大多数来源于129，C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠，而昆明株小鼠的胚胎干细胞建系的成功率很低。目的：探寻昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的方法，以期提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的成功率。设计、时间及地点：以细胞为对象的观察性实验，于2006—04/2007—06在重庆市神经病学重点实验室完成。材料：昆明白小鼠3．5d和4d胚龄的囊胚。方法：分别将昆明白小鼠3．5d和4d胚龄的囊胚培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，四五天后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，分别采用2．5g/L胰蛋白酶-0．4g/L乙二胺四乙酸与1g/L胰蛋白酶-0．2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械离散胚胎干细胞集落。主要观察指标：观察集落的生长情况，通过碱性磷酸酶染色、OCT-4染色、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定。结果：①4d胚龄胚胎的贴壁率、内细胞团出现率及克隆形成率高于3，5d胚龄（P〈0．05）。②采用1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械作用，分离克隆胚胎干细胞效果较好。③胚胎干细胞呈集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性，悬浮培养胚胎干细胞能得到囊状胚体。结论：采用4d胚龄的囊胚和1g/L胰蛋白酶-0．2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min，并辅以机械作用的消化方法，有助于提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的能力。
- 李卫东张晓刚常静蒋芳萍
- 关键词：干细胞成纤维细胞细胞分离
- 与心肌细胞共培养的小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化被引量：4
- 2009年
- 目的探讨心肌细胞促进胚胎干细胞（ESCs）分化为心肌样细胞的诱导作用。方法收集小鼠3.5 d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4-5 d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3-5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2-3 d的拟胚体（EBs）,再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T（TnT）、α-肌动蛋白（α-actin）的表达。结果诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12 d时第2组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于其他各组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、β-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,高于其他各组,并且分化的细胞形态较单一。结论心肌细胞和心肌细胞裂解液均可诱导ESCs向心肌细胞定向分化,且心肌细胞的诱导作用强于心肌细胞裂解液。
- 李卫东张晓刚常静蒋芳萍
- 关键词：胚胎干细胞共培养分化心肌细胞
