国家自然科学基金(30428012)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：叶棋浓杨丽萍王朝云熊志红杨智洪更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 雌激素受体α转录激活系统的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建雌激素受体α（ERα）的转录檄活系统。方法采用PCR技术构建ERa及其不同功能区（AF1、AF2和DBD）重组质粒并进行鉴定。将培养好的293T细胞分为pGAL—ERα组（转染pGAL—ERa重组质粒）、pGAL—ERαAF1组（转染pGAL—ERαAF1重组质粒）、pGAL—ERαAF2组（转染pGAL．ERaAF2重组质粒）、pGAL—ERαDBD（转染pGAL—ERαDBD重组质粒）及空白对照组（转染空载体）5组，各组同时转染0．2ug雌激素受体作用元件荧光素酶报告基因（ERE—LUC）和0．1ug表达B-半乳糖苷酶的质粒，作用4h后将各组细胞分为两部分，一部分加入雌二醇（终浓度10nmol／L）诱导，另一部分继续培养，24h后分别测定各组加入雌二醇诱导及未加雌二醇诱导的细胞的转录激活活性，并计算各组细胞与空白对照组细胞转录激活活性的比值。蛋白印迹法测定各重组质粒蛋白在293T细胞中的表达。结果加入雌二醇诱导后，pGAL—ERα组、pGAL—ERαAF1组、pGAL—ERαAF2组、pGAL—ERαDBD组细胞与空白对照组细胞的转录激活活性比值分别为20．44±1．01、2．09±0．11、8．09±0．30和1．05±0．09。构建的ERα及其不同功能区重组质粒蛋白在293T细胞中均有表达。结论成功构建了ERa的转录激活系统。
- 李杰萍熊志红杨智洪王朝云杨丽萍叶棋浓
- 关键词：转染聚合酶链反应
- 利用RNA干扰抑制具有多种剪接形式的RNA结合蛋白基因的表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)基因siRNA的真核表达载体,观察其对RBPMS表达的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成了2条针对RBPMS基因的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上。将重组质粒和带FLAG标签的RBPMS共转染293T人胚肾细胞,通过Western印迹检验RNAi效应。结果:测序证明成功构建了RBPMSsiRNA真核表达载体;Western印迹表明构建的siRNA能有效地抑制RBPMS基因的表达。结论:构建了RBPMSsiRNA的真核表达载体,该siRNA能有效地抑制RBPMS基因的表达。
- 孙琰张浩吕秋军杨晓叶棋浓
- 关键词：RNAI基因表达
- 细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的:为研究细胞周期蛋白(cyclin)在肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的细胞周期蛋白B1、D1、E的真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:以乳腺cDNA文库为模板,分别扩增细胞周期蛋白B1、D1、E基因全长编码区序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-Cyclin真核表达载体,Western印迹分析表明克隆的载体都能在真核细胞中表达分子大小相符的重组蛋白。结论:构建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表达载体,为细胞周期蛋白及其相关蛋白的研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华袁斌王朝云李杰萍杨丽萍杨智洪叶棋浓
- 关键词：细胞周期蛋白克隆真核表达
