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江苏省卫生厅资助项目(2006-50)
作品数:
1
被引量:3
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相关作者:
刘明峰
石琼
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2008
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靶向Survivin和FoxM1B的shRNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响
被引量:3
2008年
目的观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤于细胞生长和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤干细胞;依据靶基因序列设计siRNA,建立可克隆入pSilencer^TM 3.1-H1 neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统,鉴定正确后扩增质粒;利用脂质体转染法(Lipofectamin^TM 2000)转染脑胶质瘤于细胞,分别采用逆转录.聚合酶链反应(RT—PCR)、Westernblot在mRNA和蛋白水平检测目的基因的表达,并分别采用噻唑蓝(MTT)法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤于细胞的生长抑制率及凋亡率。结果成功构建Survivin、FoxM1BshRNA表达质粒;RT—PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77.41±10.99、78.10±8.84及72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57;Westernblot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72、45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57及76.55±18.01、73.57±15.41、72.05±11.46。而细胞生长抑制率和凋亡率增加,双干扰组较单干扰组较为明显。结论成功构建Survivin,FoxM1BshRNA表达质粒。shRNA转染脑胶质瘤于细胞后,目的基因表达明显下降,从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖,促进凋亡。而双干扰效果更为显著。
于如同
饶海承
石琼
陈冲
刘明峰
关键词:
SURVIVIN
质粒
短发卡RNA
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