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广州市科技计划项目(2008Z1-E191)
作品数:
1
被引量:3
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陶谦
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转染人端粒酶反转录酶永生化成釉细胞瘤细胞的生物学特性
被引量:3
2009年
目的转染人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transenptase,hTERT)基因建立永生化成釉细胞瘤(ameloblastoma,AM)细胞株并观察其生物特性。方法构建hTERT基因反转录病毒载体pLXSN—neo—hTERT转染AM细胞,G418筛选后进行免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)鉴定细胞来源、细胞形态学观察、细胞增殖动力学研究、细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence associated β galactosidase,SA—β—Gal)染色、反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测hTERT基因表达、端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性。结果未转染AM细胞体外培养43d停止增殖,细胞群体倍增数(population doublings,PDL)为6;转染后AM细胞增殖活跃,目前PDL值已达到65;广谱细胞角蛋白阳性、波形蛋白阴性。与未转染细胞相比,转染后细胞形态较未转染细胞不规则;SA—β—Gal染色结果未见阳性衰老信号。RT—PCR检测hTERT mRNA在转染AM细胞中稳定表达,TRAP检测端粒酶活性相对未转染细胞呈高表达。结论转染hTERT基因的AM细胞呈现稳定增殖的永生化状态,为进一步研究AM提供良好的体外模型。
陶谦
吕标
乔彬
郑超群
陈之锋
关键词:
成釉细胞瘤
转染
永生化
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