国家自然科学基金(81241076)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 胰岛素样生长因子结合蛋白-3通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路调控多胶母细胞瘤增殖的机制被引量：1
- 2019年
- 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在胞内高表达及胞外刺激促进胶质母细胞瘤U87MG增殖的机制。方法培养胶质母细胞瘤U87MG细胞株,构建的pCMV/IGFBP-3质粒转染U87MG细胞,分为未处理组(Control)、转染pcDNA3.1(+)、空载体组(NC1)、转染pCMV-Myc空载体组(NC2)、转染pCMV-IGFBP-3组(Ⅰ)、转染pcDNA3.1(+)/ pCMV-Myc组(NC1+NC2),采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot检测IGFBP-3、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表达;采用噻唑蓝(MTT)比色法分析IGFBP-3细胞因子对U87MG细胞的增殖作用,U87MG细胞经IGFBP-3于0、5、10、30 min时间段刺激后,提取的各时间段细胞总蛋白,定量后进行蛋白印迹分析,观察ERK1/2、bcl-XL蛋白的表达及ERK1/2磷酸化的变化。结果Real-time PCR显示ERK1、ERK2、bcl-XL的mRNA相对表达量为(1.32±0.45)、(1.19±0.14)、(2.83±0.56),ERK1的mRNA表达有升高趋势(P<0.01),ERK2的mRNA表达无明显变化(P>0.05),bcl-XL的mRNA明显升高(P<0.01);Western blot发现ERK1/2的灰度值(178.86±4.89,188.19±5.07)蛋白表达量无变化,但其磷酸化水平明显增强,bcl-XL的灰度值(151.85±5.71,214.37±4.71)蛋白表达量明显升高。MTT比色法检测结果表明IGFBP-3浓度的增加,细胞株呈明显增殖效应,其中500 ng/ml的IGFBP-3细胞因子刺激作用较大(P<0.01);刺激U87MG细胞株培养,蛋白印迹实验显示0、5、10、30 min、1、2 h时间段表达量,ERK1/2为163.18±4.45、159.36±5.67、161.27±3.23、172.41±4.01、177.41±2.42、169.11±1.45没有变化;pERK1/2(27.51±2.34、52.25±3.56、51.75±3.67、57.55±5.01、66.75±3.67、47.49±2.76)随时间延长而逐渐增加,2 h后出现减弱;bcl-XL(18.77±2.78、46.14±3.29、52.43±3.62、82.87±2.71、60.02±0.18、56.94±2.16)随时间延长而先增加后降低,在1 h出现下降。结论IGFBP-3胞内高表达和从胞外刺激U87MG细胞后均能增加ERK1/2下游调控基因bcl-XL的表达,进一步促进
- 扈玉华吴玉鹏王刘帅王程业吴建瓴
- 关键词：胶质瘤胰岛素样生长因子结合蛋白-3细胞外信号调节激酶1/2增殖
- 不同级别恶性脑胶质瘤中N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14的表达差异被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14 （GalNAc-T14）在不同级别恶性胶质瘤中的表达差异及其与胶质瘤恶性程度的关系.方法 采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（QPCR）方法和免疫组织化学染色方法检测16例正常脑组织标本、11例Ⅱ级脑胶质瘤组织标本、14例Ⅲ级脑胶质瘤组织标本和9例Ⅳ级脑胶质瘤组织标本中GalNAc-T14的表达水平.结果 QPCR方法显示GalNAc-T14在正常脑组织标本及Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤细胞标本中的电泳条带的吸光度值分别为0.956 4±0.079 1、0.525 6±0.0647、0.298 9±0.080 8、0.151 4±0.0624.单因素方差分析及LSD、SNK-t分析比较,GalNAc-T14在胶质瘤细胞组中的表达与正常脑组织组差异有统计学意义（P＜0.05）;GalNAc-T14在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级星型胶质瘤中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组织化学染色方法结果显示GalNAc-T14在正常脑组织标本中和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤细胞标本中的阳性表达率分别为68.7％、63.6％、42.9％和33.3％,x2检验及Fisher确切概率法分析比较,GalNAc-T14在胶质瘤细胞组中的表达与正常脑组织组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;不同级别的脑胶质瘤细胞中,表达存在一定差异.结论 GalNAc-T14在恶性胶质瘤细胞中的表达水平较正常脑组织中明显降低,与病情进展密切相关.
- 扈玉华吴建梁刘兵田红伟
- 关键词：胶质瘤脱噬作用
- 长链非编码RNA中LINK—A及缺氧诱导因子-1α在胶质细胞瘤中的表达及相关性被引量：1
- 2018年
- 本研究旨在探讨长链非编码RNA（1ncRNA）中LINK．A及其相关蛋白缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在不同程度恶性胶质瘤中的表达差异及其与胶质瘤恶性程度的关系。
一、材料与方法
1．一般材料：收集河北医科大学附属第二医院神经外科2016年至2017年不同级别的神经胶质瘤组织标本共72例，用液氮妥善保存固定，其中Ⅰ～Ⅱ级46例、Ⅲ级14例、Ⅳ级12例，正常脑组织标本7例作为对照。
- 扈玉华吴建梁王乐朋吴玉鹏吴建瓴
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α非编码RNALINK胶质细胞瘤恶性胶质瘤HIF-1Α
- 不同级别恶性脑胶质瘤中胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达差异被引量：7
- 2015年
- 目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在不同级别恶性胶质瘤中的表达差异及其与胶质瘤恶性度的关系.方法 采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法和免疫组织化学染色方法检测11例Ⅱ级脑胶质瘤组织标本、14例Ⅲ级脑胶质瘤组织标本、9例Ⅳ级脑胶质瘤组织标本和16例正常脑组织标本中IGFBP-3的表达水平.结果 Real-time PCR方法显示IGFBP-3在正常脑组织标本及Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤细胞标本中的电泳条带的吸光度值分别为1.082 2±0.334 7、1.535 0 ±0.226 7、4.3831 ±0.5218、5.094 1±0.652 5.单因素方差分析及多重比较（LSD）、SNK-t检验比较,IGFBP-3在胶质瘤细胞组中的表达与正常脑组织组差异有统计学意义（P＜0.05）;IGFBP-3在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级星型胶质瘤中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组织化学结果显示IGFBP-3在正常脑组织及胶质瘤标本中的阳性细胞率（％）分别为20.0％、33.3％、57.1％、80.0％.x2检验及Fisher确切概率法分析比较,IGFBP-3在胶质瘤细胞组中的表达与正常脑组织组差异有统计学意义（P＜0.05）;在各个级别的胶质瘤中,IGFBP-3的表达差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 IGFBP-3的表达水平在不同级别脑胶质瘤中差异有统计学意义,且随恶性胶质瘤级别的增高呈递增趋势,可能与病情进展密切相关.
- 薛贵生扈玉华吴建梁刘兵
- 关键词：胶质瘤胰岛素样生长因子结合蛋白-3脱噬作用
- N-乙酰氨基半乳糖转移酶14通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路调控多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制被引量：1
- 2019年
- 目的探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GalNAc-T14)在胞内高表达促进多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制。方法培养多形性胶质母细胞瘤U87MG细胞株,构建的pcDNA3.1-T14质粒转染U87MG细胞,分为未处理组(Control组)、转染pcDNA3.1(+)空载体组(NC1组)、转染pcDNA3.1-T14组(T组),采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测GalNAc-T14、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表达、ERK1/2的磷酸化水平;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况。应用SPSS 13.0统计软件分析,计量资料均值±标准差(Mean±SD)表示。结果质粒转染前GalNAc-T14、ERK1/2、bcl-XL相对表达量为1,在U87MG细胞内高表达GalNAc-T14相对量为(15393.43±30.35)。qPCR显示ERK1、ERK2、bcl-XL的mRNA相对表达量:NC1组为(0.98±0.12)、(0.91±0.05)、(0.89±0.11),T组为(0.74±0.29)、(0.68±0.31)、(0.68±0.23),T组ERK1/2与抗凋亡蛋白bcl-XL的基因表达水平较对照组下降;Westernblot分析显示:Control组、NC1组、T组ERK1/2的灰度值分别为(85.42±3.11、86.25±4.25、66.36±4.25),抗凋亡蛋白bcl-XL的灰度值为(82.57±3.71、79.52±3.78、46.85±4.52)。通过Annexin V-FITC/PI双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡显示高表达GalNAc-T14时U87MG细胞株早期凋亡与晚期凋亡的百分数分别为(7.74±1.23)%、(10.08±2.41)%,高于对照组(1.12±0.18)%、(0.51±0.14)%及NC1组(1.37±0.12)%、(0.90±0.08)%,差异有统计学意义(t=3.417,P<0.05)。结论GalNAc-T14通过抑制ERK1/2及bcl-XL的表达促进多形性胶质母细胞瘤细胞的凋亡。
- 郝书锋吴建粱王程业王刘帅扈玉华
- 关键词：多形性胶质母细胞瘤细胞外信号调节激酶通路脱噬作用
