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影响根癌农杆菌的电击转化条件被引量：12: 2005年; 采用电击转化方法将双元载体质粒pCAM3300导入根癌农杆菌LBA4404,研究了不同实验条件对转化率的影响.结果表明:当电场强度为11 kV/cm时,转化率最高,每微克DNA得到9.8×103CFU;在细胞OD600为1.0时进行电转化,转化率最高,每微克DNA得到9.54×103CFU;在一定的细胞浓度范围内,电击转化率与细菌浓度密切相关,转化率随着细菌浓度的上升而上升;质粒大小与电击转化率之间没有明确的关系.将含pCAMBIA3300的根癌农杆菌与粗糙脉胞菌共培养转化,在含有膦化麦黄桐(PPT)(405 mg/L)的平板上筛选到转化子.PCR扩增转化子的染色体,初步证明Bar基因整合进粗糙脉胞菌的染色体中.; 匡小婴饶志明沈微方惠英诸葛健; 关键词：根癌农杆菌

产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因的克隆、测序及植物表达载体的构建: 2005年; 用PCR的方法,从产甘油假丝酵母WL2002—5中扩增出了产甘油关键酶3-磷酸甘油脱氢酶(glycerol3-phosphate dehydrogenase)和3-磷酸甘油磷酸酶(glycerol3-phosphate phosphatase)的基因GPD和GPP。对这两个基因测序,发现基与酿酒酵母(Saccharomyces.cerevisiae)的GPD、GPP基因的相似性达99%。并构建了其在植物中的表达载体。; 赵有玺林长生饶志明沈微方慧英诸葛健; 关键词：甘油 3-磷酸甘油脱氢酶植物表达载体构建

转基因食品的快速PCR鉴定被引量：4: 2004年; 用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA,经PCR扩增,鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品.该方法的灵敏度可达0.1%,并且具有很好的稳定性.; 赵有玺饶志明王正祥沈微方慧英诸葛健; 关键词：PCR

产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因在酿酒酵母中的表达被引量：5: 2006年; 甘油是一种极其理想的耐高渗透压介质。利用PCR方法,从产甘油假丝酵母WL2002-5中扩增出了2个产甘油的关键酶基因GPD和GPP,分别编码3-磷酸甘油脱氢酶(glycerol3-phosphatedehydrogenase,GPD)和3-磷酸甘油磷酸酶(glycerol3-phosphate phosphatase,GPP)。利用T-Vector在Escherichia coliJM109中克隆得到大量的GPD和GPP基因,并成功构建了重组质粒pYX212-GPD和pYX212-GPP;通过LiAc转化法将重组质粒导入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeW303-1A。初步实验结果表明发酵过程中pYX212-GPD/S.cerevisiaeW303-1A的生物量高于pYX212-GPP/S.cerevisiaeW303-1A和野生型S.cerevisiaeW303-1A;发酵72h后,pYX212-GPD/S.cerevisiaeW303-1A发酵液中甘油含量大约为12mmol/L,明显高于野生型S.cerevisiaeW303-1A的甘油含量,而pYX212-GPP/S.cerevisiaeW303-1A与野生型S.cerevisiaeW303-1A在甘油含量上相差不大,均只有4mmol/L左右。; 赵有玺饶志明沈微方慧英诸葛健; 关键词：甘油 3-磷酸甘油脱氢酶

一株降解除草剂膦化麦黄桐(PPT)菌的筛选与鉴定被引量：3: 2005年; 从喷洒有除草剂的土壤中分离到一株能分解膦化麦黄桐(PPT)的细菌.该菌在以PPT为唯一碳源的培养基上生长,能利用PPT的最高浓度为2. 7g/L.采用常规生理生化鉴定方法,并结合16SrDNA序列分析法对该菌进行鉴定.结果表明,该菌与生癌肠杆菌(Enterobactercancerogenus)序列相似性为99. 3%,在细菌分类学上属于肠杆菌.将它命名为Enterobactersp. PPT.; 匡小婴饶志明沈微赵有玺方惠英诸葛健; 关键词：生物降解菌 RDNA

根癌农杆菌介导酿酒酵母的遗传转化被引量：7: 2006年; 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)可以将它的Ti质粒的一段T-DNA序列转化到广泛的宿主细胞并能整合到宿主染色体中。作者利用根癌农杆菌转化系统成功地实现了产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)乳清苷酸脱羧酶基因(Ura3)对酿酒酵母(Saccharamyces cere-visiae)W303-1A的Ura3缺陷遗传互补转化,转化率约为3.2个转化子/105个酵母细胞。通过转化子PCR和表型验证说明了T-DNA已经整合进入酵母染色体,并能够稳定地进行遗传表达。; 张君胜饶志明吴蕾沈微唐雪明方慧英诸葛健; 关键词：根癌农杆菌酿酒酵母

太湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建被引量：7: 2004年; 采用研磨 /冻融和SDS/蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法 ,直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA .所得粗DNA用透析袋法以及NucleaotrapsuspensionDNA纯化试剂盒进行了纯化 .纯化过的DNA能够满足常用限制性内切酶酶切、细菌 16SrDNA通用引物和随机引物进行PCR扩增的要求 .将所得纯品DNA经过EcoRI部分酶切之后与酶切并脱磷酸的pSK-空载体连接 ,再以大肠杆菌JM10 9为宿主细胞初步构建了土壤微生物基因组文库 .图 6参; 饶志明赵有玺李辉王正祥沈微方惠英诸葛健; 关键词：太湖流域土壤微生物质粒文库

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国家自然科学基金(30300027)