国家自然科学基金(30772080)
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
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- 鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的观察甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C(PKC)的表达,以及鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠脊髓背角PKC表达的影响。方法 32只SD大鼠采用改良Yaksh法进行鞘内置管,随机分为4组(每组8只):对照组(C组)、鞘内注射生理盐水组(NS组)、氯胺酮50μg组(K1组)和氯胺酮100μg组(K2组)。NS、K1、K2组于置管5 d后,复制甲醛炎性疼痛模型。采用疼痛加权评分法(PIS)评估大鼠甲醛致痛后1 h内的疼痛行为,24 h后测量致痛足厚度并用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角PKC的表达。结果与NS组比较,K1组和K2组在甲醛炎性痛第二时相的PIS值明显降低(P<0.01);致痛24 h后,NS组大鼠致痛足厚度与对照组比较明显增加,而K1、K2组致痛足厚度与NS组比较则明显减少(P<0.05);NS组大鼠脊髓背角PKC免疫反应阳性细胞数量及免疫组化评分均较C组明显增加(P<0.01),而K1、K2组则明显低于NS组(P<0.05)。结论鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠具有明显的抗伤害作用;鞘内注射氯胺酮可明显抑制甲醛炎性痛引起的脊髓背角PKC表达的增加,PKC在脊髓水平伤害性信息的传递和调节中可能发挥重要作用。
- 杨勇郭曲练邹望远王锷鄢建勤
- 关键词：氯胺酮鞘内注射蛋白激酶C脊髓背角疼痛
- 不同类型导管用于大鼠改良Yaksh法鞘内置管的比较被引量：4
- 2009年
- 目的比较国内常用的不同类型导管用于大鼠Yaksh法鞘内置管的差异,探讨理想的鞘内置管材料。方法80只SD雄性大鼠,随机分为A、B、C、D四组,测热痛缩腿反应潜伏期(TWL)基础值后分别按改良Yaksh法置入Microspinal、PE-0402,PE-0503和改良硬膜外导管。术后第1、2、3天评估运动功能,记录置管并发症情况。术后第3天取运动正常大鼠测TWL,行利多卡因试验验证导管是否在鞘内。显微镜下解剖所有大鼠观察脊髓。结果(1)A、B组脊髓损伤及并发症较C、D组少(P<0.05)A与B、C与D组间差异不显著(P>0.05)。四组动物利多卡因试验结果差异不显著(P>0.05)。(2)运动协调能力A、B组恢复较C、D组理想(P<0.05),A与B、C与D之间差异不显著(P>0.05)(3)四组动物TWL变化差异不显著(P>0.05)。结论导管的外径、材料和形状可能对改良Yaksh法鞘内置管结果产生影响。Microspinal管及PE-0402管置管成功率高、并发症少,是大鼠鞘内置管较理想的材料。
- 宋宗斌郭曲练邹望远张洁刘畅
- 关键词：鞘内置管导管
- NF-κB上调神经病理性疼痛大鼠脊髓CX3CR1表达被引量：5
- 2009年
- 目的:观察鞘内注射核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)大鼠痛阈和脊髓CX3CR1受体表达的影响.方法:60只成年雄性SD大鼠,体质量250～300g,鞘内置管成功后,随机分5组(n=12):假手术+生理盐水(sham组)、CCI+生理盐水(CCI组)、假手术+PDTC1000pmol/d(PDTC+sham组)、CCI+PDTC100pmol/d(PDTC+CCI组1)、CCI+PDTC1000pmol/d(PDTC+CCI组2).鞘内置管5d后开始鞘内输注生理盐水或不同剂量的PDTC,鞘内注射1d后建立大鼠CCI神经病理性疼痛模型或者假手术模型,分别于术前及术后不同时点测定5组大鼠的痛敏值,并在鞘内注射4d后取脊髓腰膨大部进行Western Blot实验检测CX3CR1的表达.结果:CCI组与sham组比较大鼠术后各时点痛敏阈值明显下降,并在术后第3日降至最低点(P<0.05),脊髓CX3CR1的表达明显升高(P<0.01).PDTC+CCI组与CCI组比较,术后各时点大鼠痛敏阈值增高(P<0.05),脊髓CX3CR1的表达下降(P<0.01).结论:鞘内给予PDTC可减轻CCI大鼠的病理性疼痛,并抑制脊髓CX3CR1的表达.活化的NF-κB可能通过上调脊髓CX3CR1表达而参与了神经病理性疼痛的发生.
- 潘韫丹郭曲练王锷叶治贺正华邹望远
- 关键词：神经病理性疼痛核因子-ΚB吡咯烷二硫氨基甲酸
- 鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体和降钙素基因相关肽表达的影响被引量：8
- 2012年
- 目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11μg,注射药物容量均为20μL。对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9%的生理盐水20μL。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P<0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P<0.01)。与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P<0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P<0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。
- 王懿春郭曲练王明德王锷邹望远赵江洪
- 关键词：神经病理痛舒芬太尼
- 慢病毒介导的RNA干扰对大鼠神经元PKCγ mRNA及蛋白表达的影响
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）对大鼠神经元PKCymRNA及蛋白表达的影响.方法 孕16d的SD大鼠,原代培养大鼠胚胎皮层神经元,随机分为3组,每组6孔,对照组（C组）：不行任何处理;阴性对照组（NC组）：每孔加入阴性对照慢病毒3×10^5个;RNAi组：每孔中加入编码PKCγ shRNA的慢病毒载体（LV-PKCγ shRNA）颗粒3×10^5个.5 d后采用RT-PCR和Western blot法检测PKCγ mRNA和蛋白的表达水平,并计算干扰效率.结果 与C组比较,RNAi组大鼠神经元PKCγ mRNA及其蛋白表达水平均降低（P〈0.05）,NC组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）.基因干扰效率99.3%,蛋白干扰效率85.2%.结论 慢病毒介导的RNAi可有效地下调大鼠原代神经元PKCγ基因及其蛋白的表达.
- 邹望远郭曲练宋宗斌刘畅潘韫丹
- 关键词：RNA干扰慢病毒属神经元
- 神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组图谱的建立被引量：1
- 2008年
- 目的建立神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组图谱。方法成年雄性SD大鼠16只，体重260～320g，随机分为2组（n=8）：假手术组（S组）和神经病理性痛组（NP组）。采用慢性缩窄性坐骨神经损伤法（CCI）制备大鼠神经病理性痛模型，S组仅暴露坐骨神经，不结扎。分别于CCI前1d（基础状态）及CCI后5、7d测定机械痛阈和热痛阈；于CCI后7d痛阈测定结束后取腰段脊髓组织，每组大鼠的脊髓组织混合后提取总蛋白质，测定脊髓组织蛋白质含量。以固相pH值梯度等电聚焦（IEF）为第一向，SDS—PAGE垂直电泳为第二向进行双向凝胶电泳（2-DE），制备脊髓蛋白质2-DE图谱，应用图像分析软件分析2-DE图谱，并观察其差异表达情况。结果与S组比较，NP组CCI后机械痛闽和热痛阈降低（P〈0．05）；两组大鼠脊髓组织总蛋白质经双向凝胶电泳分离，银染显色后得到分辨率高、重复性好的2-DE图谱，蛋白质点主要分布在pH3～10，相对分子质量为8～120的区域；NP组差异表达的蛋白质有23个，其中16个蛋白质表达上调，7个蛋白质表达下调（P〈0．05）；表达上调幅度最大的为SSP2203蛋白，表达下调幅度最大的为SSP1807蛋白（P〈0．05）。结论本研究成功地建立了神经病理性痛大鼠脊髓蛋白质组的图谱。
- 邹望远李茂玉郭曲练宋宗斌张重赵媛贺正华
- 关键词：神经痛脊髓蛋白质组学
- PKCγ基因RNAi慢病毒载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的构建蛋白激酶CT（PKCT）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体。方法针对已经筛选确定的PKCγ基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的短发夹RNA（shRNA）寡核苷酸序列（Oligo）DNA，退火形成双链DNA，与经AgeI和EcoRI酶切后的pGCSIL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接，转化DH5a大肠杆菌，挑选重组阳性克隆行PCR鉴定和DNA测序。用pGCSIL-GFP、pHelper 1．0和pHelper2．0三质粒共转染293T细胞，包装产生慢病毒，逐孔稀释滴度法测定病毒滴度。结果PCR鉴定结果显示，以经双酶切后未插入片断的pGCSIDGFP空载体（PCR产物为306bp）为对照，重组细菌克隆的PCR产物为343bp（插入片段为37bp），鉴定结果与预期相符。测序结果显示，合成的PKC7基因shRNA寡核苷酸链序列插入正确。包装慢病毒，浓缩慢病毒悬液的滴度为1×10^9TU／ml。结论成功构建了PKCT基因shRNA慢病毒载体。
- 邹望远郭曲练宋宗斌罗和国张重刘畅
- 关键词：RNA干扰蛋白激酶C
- 鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠脊髓背角NMDAR、CGRP表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的：观察鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体（NMDAR）、降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠36只,体重220～280g。随机分为4组（n=9）：对照组（C组）、假手术组（Sham组）、坐骨神经分支选择结扎切断模型组（SNI组）和PKC抑制剂组（P组）。SNI组和P组制备SNI模型,P组在SNI术后14d内每天鞘内注射PKC抑制剂11μg,其余各组给予等容量生理盐水。在SNI术前1d（基础值）及术后14d每次注射药物后测定机械痛阈和热缩足潜伏期,分别于SNI术后2、7、14d注射药物后各处死大鼠3只,采用免疫组化法测定L5节段脊髓背角NMDAR和CGRP表达水平。结果：与C组和Sham组比较,SNI组机械痛阈降低,NMDAR和CGRP表达上调（P〈0.01）,热缩足潜伏期差异无统计学意义（P〉0.05）。与SNI组比较,P组机械痛阈升提高,热缩足潜伏期延长,NMDAR和CGRP表达下调（P〈0.01）。结论：鞘内注射PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,并抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。
- 王懿春郭曲练邹望远王明德王锷罗慧
- 关键词：神经病理痛N-甲基-D-天冬氨酸受体
