国家自然科学基金(30772025)
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 短双链RNA在病毒性心肌炎小鼠模型中的抗病毒研究
- 2010年
- 目的:通过在小鼠病毒性心肌炎动物模型研究短双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对病毒感染和复制的抑制作用,研究RNAi在治疗病毒性疾病的可行性。方法:利用质粒载体将siRNA转染至HeLa细胞和Balb-c小鼠后感染病毒,荧光显微镜观察GFP表达量观察细胞内质粒转染效率和持续时间,通过病毒致细胞病变作用(CPE)保护实验病毒空斑形成实验检测病毒受抑制程度,动物模型中观察动物死亡率和易感组织病理变化评价siRNA的保护作用。结果:在HeLa细胞中针对CVB3 2B区的siRNA能显著抑制柯萨奇病毒B3的感染和复制,抑制率可达90%。动物模型中siRNA质粒可改善动物存活率(30%),并降低易感脏器中病毒含量,减轻病理反应。结论:针对CVB3基因组2B区的siRNA在病毒性心肌炎动物模型中具有保护作用。
- 王彩虹姚海兰刘哲伟
- 关键词：质粒载体COXSACKIEVIRUS抗病毒作用
- 抑制Itk表达对Jurkat细胞分泌细胞因子的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 研究在Jurkat细胞上敲减Itk蛋白的表达对细胞增殖及炎症相关的细胞因子产生的影响,为Itk作为小分子药物靶标提供可行性实验依据.方法 针对Itk基因设计合成三个shRNAs,通过与pEGFP-C1-hItk质粒共转染,观察其抑制Itk-GFP融合蛋白的表达情况,筛选有效序列包装成慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染Jurkat细胞,观测Itk蛋白的表达水平、细胞增殖情况及细胞因子的变化.结果 Itk-shRNA1感染Jurkat细胞后Itk基因的mRNA水平与细胞对照组及感染shRNAnon的对照组相比,敲减率约55%,差异有统计学意义P＜0.05.Itk蛋白的敲减导致Jurkat细胞在受刺激时增殖降低,以未感染病毒的Jurkat细胞受刺激后酶标仪检测的A值为1,Itk-shRNA1感染组平均比值为0.54,shRNAnon对照组平均比值为0.83,两组差异有统计学意义,P＜0.05.Itk-shRNA1感染组中IL-2、IL-5、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平均较shRNAnon对照组低,差异有统计学意义,提示Itk蛋白的表达减少导致Jurkat细胞产生细胞因子减少.结论 抑制Itk表达能有效降低淋巴细胞的增殖,同时减少与炎症相关细胞因子分泌.
- 姚海兰何峰肖宗慧韩继生张阳德黄伯云刘哲伟
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶RNA慢病毒属
- 短双链RNA对CVB3病毒细胞内清除作用的可行性研究及其机制探讨
- 2008年
- 目的通过观察短双链RNA（Short interfering RNA，siRNA）体外转染HeLa细胞评价siRNA抗CVB3病毒感染的可行性和抑制作用机制。方法通过细胞病变作用保护实验，选择合适的siRNA剂量。Western Blot、RT．PCR等方法在体外检测siRNA抗CVB3病毒复制作用及作用途径。结果siRNA．3753通过脂质体转染试剂能高效转入HeLa细胞，转染效率可达98．77％，在细胞内可稳定长达48h。siRNA-3753的浓度为0．6gmol／L对病毒抑制率高同时对细胞不会产生毒性作用，该浓度作为本次研究的实验剂量。siRNA-3753抗CVB3病毒感染作用是通过siRNA直接降解病毒基因得到的，而不是通过激活PKR或干扰素等其他未知因素起效的。结论siRNA可以高效、较长时间的转染入HeLa细胞内，在低剂量时即产生较好的抗病毒感染作用，通过直接降解病毒基因组的途径特异性抑制CVB3病毒的复制及感染。
- 肖宗慧韩继生姚海兰刘哲伟
- 关键词：RNA柯萨奇病毒感染细胞
- ITK蛋白调节小鼠脾淋巴细胞增殖分化的研究被引量：2
- 2009年
- 目的应用RNA干扰技术特异性抑制Itk基因的表达，观察Itk蛋白在淋巴细胞增殖和相应免疫因子合成分泌中的作用，进行Itk作为药物靶标的确认。方法设计合成针对Itk基因的siRNA，将siRNA电转染至小鼠脾淋巴细胞，WestemBlot检测Itk蛋白的表达、MTS方法检测细胞增殖率、ELISA方法检测细胞因子的含量。结果实验组Itk—siRNA在细胞水平上有效抑制了Itk蛋白的表达；Itk受抑制后细胞增殖率与对照组相比明显降低，差异有统计学意义，P〈0．05；细胞因子IL-2，IL-4，IL-5，IFN-γ的分泌水平下降，P〈0．05。结论Itk表达受抑制后有效降低脾淋巴细胞的增殖率及细胞因子分泌的减少，研究验证了Itk在细胞增殖和炎性细胞因子分泌方面的重要免疫调节作用，为将其作为药物的靶基因提供实验依据。
- 肖宗慧何峰姚海兰韩继生刘哲伟
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶细胞细胞因子类
- Itk蛋白在人PBMC增殖和细胞因子产生中的作用研究被引量：1
- 2010年
- 利用RNA干扰的方法抑制人外周血单个核细胞(PBMC)中Itk基因的表达,探讨其抑制Itk后对人PBMC增殖和炎症性相关细胞因子产生的影响。设计针对Itk基因的siRNA序列,与外源表达Itk的pEGFP-C1-hItk质粒共转染至HeLa细胞,筛选出有效的干扰序列;利用电转染的方法将有抑制Itk作用的siRNA转染至人PBMC,检测Itk抑制状态,同时观察细胞增殖率及炎症性细胞因子产生水平的变化。实验表明,Itk-siRNA有效地抑制了Itk蛋白的表达;Itk受到抑制后细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05);几种重要炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-5、IL-10和IL-4产生水平下降。实验验证了Itk蛋白在人PBMC增殖和炎性细胞因子产生方面的重要作用。
- 何峰姚海兰肖宗慧韩继生刘哲伟
- 关键词：ITKRNAI人PBMC
