北京市教委科技计划面上项目(KM200810020013)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 相关作者：周双海邵小雪谢俊岭高峰冉多良更多>>
- 相关机构：北京农学院新疆农业大学天津市宁河原种猪场更多>>
- 发文基金：北京市教委科技计划面上项目北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒Ⅱ型感染性DNA克隆的构建被引量：2
- 2012年
- 为了构建猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染性DNA克隆,并为PCV2的突变体构建及其致病机理研究建立基础。用PCR方法从PCV2 DNA质粒中扩增出PCV2全基因组片段,将其插入到pBluescript-SK载体中,构建出单拷贝PCV2 DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV2 DNA克隆,将PCV2 DNA克隆转染PK-15细胞,以获得PCV2拯救病毒,并初步测定了拯救病毒的体外增殖能力。结果显示:成功获得了PCV2拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到10-6.05/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的感染滴度。研究结果表明,成功构建了具有较高感染性的PCV2感染性克隆,为PCV2的生物学特性及致病机理研究奠定了基础。
- 谢俊岭邵小雪孟凡伟周双海
- 关键词：增殖能力
- 嵌合猪圆环病毒对仔猪的免疫保护研究
- 将10头28日龄普通健康仔猪随机平均分成2组,一组免疫10TCID嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)作为免疫组,另一组不予免疫作为对照。在免疫后28天,所有仔猪均予以10TCIDPCV2野毒攻击,以测定PCV1-2免疫对仔猪...
- 邵小雪谢俊岭高峰周双海
- 关键词：猪圆环病毒2型仔猪免疫保护
- 文献传递
- 嵌合猪圆环病毒对仔猪的免疫保护研究
- 2012年
- 为分析嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)对仔猪的免疫效力,检测了PCV1-2免疫诱导仔猪产生抗猪圆环病毒II型(PCV2)感染的保护性免疫。将10头28日龄健康普通仔猪随机平均分成两组,一组肌注免疫106.05TCID50PCV1-2作为免疫组;另一组不予免疫作为对照。到免疫后28天,免疫组仔猪血清中PCV2ORF2蛋白抗体全部转为阳性。在免疫后28天,所有仔猪经口鼻予以106.95TCID50PCV2攻击。攻毒后,免疫组仔猪全部保持临床健康,而对照组仔猪全部出现了PCV2疾病的临床症状;免疫组血清和淋巴组织中PCV2DNA载量均显著(P<0.05)减少;对照组仔猪淋巴组织普遍出现中度到重度的淋巴细胞减少与组织细胞浸润,而免疫组没有。研究数据表明:PCV1-2免疫诱发了仔猪对PCV2感染的保护性免疫,有望成为候选PCV2弱毒疫苗。
- 邵小雪谢俊岭高峰周双海高洁王婷谭伟
- 关键词：猪圆环病毒II型仔猪免疫保护疫苗
- 嵌合猪圆环病毒的构建被引量：3
- 2016年
- 【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。
- 邵小雪杨倩孟凡伟于红欣周双海
- 嵌合猪圆环病毒对仔猪致病性与免疫原性的研究
- 将嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)接种30日龄健康仔猪,测定其对仔猪的致病性与免疫原性。结果显示,仔猪接种PCV1-2后未出现可见的临床症状和大体病理变化,仔猪增重和饲料转化效率未受影响。血清中猪圆环病毒2型(PCV2)O...
- 周双海邵小雪谢俊岭
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- 文献传递
- 嵌合猪圆环病毒对仔猪的致病性与免疫原性研究被引量：2
- 2012年
- 为分析嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)对仔猪的致病性与免疫原性,检测了健康普通仔猪接种PCV1-2后的临床症状、病理变化、血清与组织中的病毒含量及血清学变化。结果显示:仔猪接种PCV1-2后增重和饲料转化效率未受影响,未出现可见的临床症状和大体病理变化,仅部分出现轻微的组织病理变化。血清中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2蛋白抗体在接种后第14天出现阳转,第28天时抗体阳性率达到100%,表明PCV1-2诱发仔猪快速产生了针对PCV2ORF2蛋白抗原的特异性抗体反应。荧光定量PCR结果显示,血清中PCV1-2DNA含量在接种后逐渐上升,第28天时达到最高,之后迅速下降;第35天宰杀时组织中病毒含量以肺门淋巴结中最高,心脏中最低;而常规PCR难以检出血清和组织中的PCV1-2DNA,表明PCV1-2接种后只引起仔猪的轻微感染。研究数据表明,PCV1-2对仔猪具有良好的免疫原性,其致病性明显减弱。
- 邵小雪高峰谢俊岭周双海
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- 猪圆环病毒1型感染性克隆的构建被引量：6
- 2011年
- 为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)感染性DNA克隆,并为PCV1基因突变体的构建及PCV2的相关研究奠定基础,采用PCR方法从PCV1质粒中扩增出了PCV1全基因组片段,将其插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中,构建了单拷贝PCV1DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV1DNA克隆;将双拷贝PCV1DNA克隆转染入PK-15细胞以获得拯救病毒,并初步测定了拯救病毒在体外细胞培养的增殖能力和遗传稳定性。结果表明,成功获得了PCV1拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到106.55/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的增殖能力。
- 邵小雪周双海谢俊岭冉多良
- 关键词：猪圆环病毒1型
- 猪圆环病毒2型北京株全基因组的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 为探索近年来北京地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学和变异规律,用PCR技术从北京不同猪场的临床发病猪和死亡猪病变组织中分别扩增和克隆获得4株PCV2分离株全基因组序列,并进行测定和分析。结果显示,4株PCV2基因组全长均为1 767 nt,其核苷酸同源性高达99%,与其他北京分离株的同源性也达98%以上,与国内外其他地区PCV2的核苷酸同源性也在95%以上。由此表明,各个PCV2分离株在进化方面存在地域相关性。
- 汤世坤张雪周双海王霞泰吴国娟
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组克隆
- 猪圆环病毒1型北京株全基因组克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 参照GenBank上猪圆环病毒1型（PCV1）全基因组序列设计1对引物，用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列，并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示，该株PCV1基因组全长为1759bp，与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性为99．4％。主要开放阅读框（ORF）序列结果显示，该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别在97．5％～99．8％和92．7％～100％。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高，但仍然呈现出一定的地域相关性。
- 邵小雪郭星周双海冉多良汤世坤
- 关键词：猪圆环病毒1型北京株全基因组克隆
- 猪圆环病毒1型天津株全基因组的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 从天津地区分离和克隆出1株猪圆环病毒1型(PCV1),并进行基因组序列分析。参照GenBank上PCV1全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从天津一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长1759bp,与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性达98.2%以上。主要开放阅读框(ORF)序列结果显示,该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别为97.5%～99.8%和92.7%～99.9%。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但还是呈现出一定的地域相关性。
- 韩玉环高峰周双海邵小雪王志军王保有刘玉洁
- 关键词：猪圆环病毒1型全基因组克隆
