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国家自然科学基金(81072496H1014)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
胡志东
任晓楠
万延民
仇超
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2012
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HIV-1B`/C、A/E重组亚型pol基因DNA疫苗的构建及其免疫原性研究
被引量:1
2012年
目的构建表达中国BYC和A/E重组亚型HIV-1pol基因的DNA疫苗,并比较其免疫原性。方法按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1CN54(BYC重组亚型)与AE2f(A/E重组亚型)的pol基因进行序列优化,构建DNA疫苗,通过Westernblotting验证其体外表达效率。通过肌肉注射途径免疫小鼠,然后无菌分离小鼠脾淋巴细胞并分别在ConsensusBPol和HIV-1AE2f Pol肽库刺激下,采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测抗原特异性IFN-γ的分泌情况,观察比较两个DNA疫苗免疫原性特征。结果DNA测序结果表明两个pol基因重组质粒构建正确,且两个DNA疫苗均能在体外有效表达。ConsensusBPol肽库刺激后,pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为(636±178)个斑点形成细胞数/10。个脾淋巴细胞,pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为(468±265)个斑点形成细胞数/10^6个脾淋巴细胞(P=0.412);HIV-1 AE2fPol肽库刺激后,pSVAE—Pol活化的总T细胞免疫反应为(1378±611)个斑点形成细胞数/10^6个脾淋巴细胞,pSVCN—Pol活化的总T细胞免疫反应为(713±61)个斑点形成细胞数/10^6个脾淋巴细胞(P=0.134)。将总T细胞反应按肽池分解后发现,pSVAE—Pol活化的特异性T细胞反应主要集中于Pol 1肽池;而pSVCN—Pol除了能够活化针对Pol1的T细胞反应之外,也可以较好地活化针对ConsensusBPol2肽池的T细胞反应。结论两个亚型PolDNA疫苗中以AE-Pol的免疫原性更强,但其所活化的T细胞表位识别谱不及CN—Pol广泛。HIV-1疫苗可能需将两者结合在一起。
万延民
任艳琴
王婧
任晓楠
胡志东
仇超
徐建青
关键词:
HIV
T淋巴细胞
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