江苏省预防医学科研基金(Y20020027)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：江苏省血吸虫病防治研究所华中科技大学无锡市第三人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫病诊断分子B细胞表位的预测与鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的 应用生物信息学技术对日本血吸虫病常用诊断分子进行B细胞表位的预测，筛选出具有潜在诊断价值的表位分子，采用基因工程方法制备目的表位的融合蛋白并进行抗原性鉴定。方法 将日本血吸虫膜蛋白22kDa（Sj22）、膜蛋白23kDa（Sj23）、信号蛋白14—3—3（Sj14—3—3）、谷胱甘肽S转移酶（Sj26）分子的全基因序列输入BioSun软件的工作区，经多参数比较筛选可能的B细胞表位，克隆、表达预测表位，用表达的融合蛋白作为抗原与血吸虫病人血清反应，以筛选和鉴定具有抗原性的表位。结果 经预测分析，Sj22的B细胞表位可能在56～62位和127～133位氨基酸区域，Sj23的B细胞表位可能在149～156位和160～167位氨基酸区域，Sj14—3—3的B细胞表位可能在118～225位和130～137位氨基酸区域，Sj26的B细胞表位可能在143～149位和191～197位氨基酸区域。克隆、表达并纯化这8个表位的融合蛋白，经SDS—PAGE和Western blot检测抗原性，筛选出分别来自于Sj22、Sj14-3-3、Sj26的3条具有较强抗原性的表位片段。结论 生物信息学技术结合分子生物学方法可用于筛选具有潜在诊断价值的表位。
- 章辉司进朱荫昌赵松王晓婷殷旭仁曹利民华万全徐明梁幼生
- 关键词：B细胞表位克隆
- 日本血吸虫复合B细胞表位抗原的制备和鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的制备日本血吸虫复合B细胞表位抗原,并对其抗原性进行鉴定。方法用生物信息学软件(BioSun)预测已报告的日本血吸虫Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26等3个B细胞表位片段的基因序列(P2、P6、P7),用随机顺序法连接3个片段,克隆入高效融合表达载体pET-32c(+)中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,经酶切及基因测序鉴定重组子。阳性克隆经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱纯化,用蛋白质印迹(Westernblotting)分析该表达产物的抗原性。结果3个目的表位基因片段按P2-P6-P7和P6-P2-P7的顺序连接为2条复合表位片段(表位间由6个氨基酸组成的柔性接头连接),成功克隆入pET-32c(+)。其重组子均可表达相对分子质量(Mr)约20400的融合蛋白。亲和层析纯化的融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一条带(Mr20400),Western blotting分析显示,这2条重组复合表位蛋白均可被日本血吸虫病患者血清识别,而不与健康者血清反应。结论获得2个具有日本血吸虫病诊断潜在价值的复合B细胞表位抗原。
- 章辉朱荫昌司进赵松王晓婷殷旭仁曹利民曹国群华万全徐明梁幼生
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
