国家自然科学基金(30872397)
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 相关作者：冯霞余双庆曾毅杨海儒陈丹瑛更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心北京工业大学北京市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达HIV-1CRF01_AE gp145的rMV MVA疫苗构建及免疫原性评价被引量：1
- 2015年
- 目的 构建携带密码子优化型HIV-1 CRF01_AE gp145基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株（MVA）载体疫苗,并对其免疫效果进行初步评价.方法 利用前期研究获得并改造的HIV-1CRF01_AE env共享基因,去除其胞内区序列得到gp145基因,将此基因克隆至重组MVA载体系统的穿梭质粒pSC11上,以穿梭质粒转染提前感染了野生型MVA病毒的BHK-21细胞,通过同源重组获得携带gp145基因的重组MVA疫苗,即rMVA-AEgp145.经鉴定证实重组MVA疫苗可表达Gp145蛋白后,在BALB/c小鼠中进行rMVA-AEgp145疫苗单独免疫的效果评价.结果 重组MVA疫苗可有效表达Gp145蛋白,单独免疫BALB/c小鼠能诱导较高水平的细胞免疫反应.结论 成功构建了表达HIV-1 CRF 01_AEgp145基因的重组MVA疫苗,在小鼠体内单独免疫可以诱导较强的env特异性CTL应答。
- 湛倩倩陈丹瑛叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗
- HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因改造及其重组DNA疫苗的构建被引量：4
- 2014年
- 目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因（wt.AE env）相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的.
- 陈丹瑛汪孟冉何小周叶景荣余双庆李秦剑徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗密码子
- HIV11C亚型Gp120蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究
- 2009年
- 目的制备HIV-1C亚型Gp120蛋白及其抗体。方法用PCR技术从表达C亚型HIV-1全长gp160基因的质粒上扩增gp120基因羧基末端部分片段，其长度为612个核苷酸，编码204个氨基酸。将测序鉴定正确的gP120基因片段克隆到原核表达载体pET-30a上，以包涵体的形式在大肠埃希菌B121（DE3）中高效表达，Gp120蛋白c端融合6×His标签便于纯化。将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备C亚型Gp120特异性兔多克隆抗体，用间接ELISA法测定抗体滴度，并用WesternBlot方法验证该抗体是否可识别在哺乳动物细胞内表达的C亚型Gp160蛋白。结果成功地获得高纯度的C亚型Gp120融合蛋白，用其制备的多克隆抗体滴度可达1：204800，该抗体可特异性识别在COS-1细胞中瞬时表达的C亚型Gp160蛋白。结论获得了高纯度的C亚型Gp120融合蛋白及其高效价的抗体。
- 杨海儒冯霞余双庆张晓光张晓梅陈国敏李泽琳曾毅
- 关键词：HIV病毒包膜蛋白质类抗体病毒
- Ad5-HIVgag免疫的食蟹猴中腺病毒中和抗体与Gag特异性细胞免疫反应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 观察不同剂量的重组腺病毒疫苗Ad5-HIVgag反复肌内注射免疫食蟹猴后,食蟹猴体内产生的腺病毒中和抗体水平及Gag特异性细胞免疫反应水平,初步探讨腺病毒中和抗体的产生对Gag特异性细胞免疫反应的影响.方法 将24只食蟹猴随机分为4组：对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组.每3周免疫1次,连续免疫5次.免疫前及免疫后不同时间点用中和实验检测动物体内腺病毒中和抗体水平,用Elispot方法检测Gag特异性细胞免疫反应水平.结果 初次免疫后3周3个实验组动物都检测到了较高水平的腺病毒中和抗体,在初次免疫后8周达到高峰,恢复期结束时略有下降.初次免疫后5周三个实验组动物都检测到了Gag特异性细胞免疫反应,除初次免疫后12周反应水平有所下降,其他时间点细胞反应呈逐渐增高趋势,但各剂量组间未见明显的量效关系.结论 在一定的剂量范围内反复多次应用Ad5-HIVgag免疫食蟹猴后,可产生针对腺病毒的中和抗体,随着免疫次数的增多Gag特异性细胞免疫反应有增高趋势,Ad5疫苗免疫后中和抗体的产生对Ad5疫苗反复应用诱导的Gag特异性细胞免疫反应抑制作用并不明显.
- 李芸杨柳杨玲陈丹瑛冯霞余双庆李泽琳曾毅
- 关键词：腺病毒科猕猴属免疫细胞
- rAd5和rAAV2／1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应；而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当；与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强；rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.
- 杨柳李芸杨玲张凌斐冯霞余双庆陈丹瑛李泽琳曾毅
- 关键词：腺病毒科免疫抗体生成
- 含密码子优化的SIV gag基因的DNA疫苗与rAd5疫苗构建及免疫原性评价被引量：3
- 2014年
- 目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方法比较优化前后gag基因表达水平.将优化后的gag基因插入重组腺病毒载体,构建rAd5-SIVgag疫苗.在BALB/c小鼠中分别比较DNA疫苗及rAd5-SIV.gag疫苗单独及联合免疫的效果.结果 密码子优化的SIVgag基因的表达水平远高于野生型SIVgag基因.重组腺病毒疫苗免疫一次或两次诱导的细胞免疫反水平分别高于DNA疫苗免疫一次或两次.两种疫苗联合免疫的反应水平与腺病毒疫苗免疫两次的水平相当,高于DNA疫苗单独免疫及腺病毒疫苗单独免疫一次的结果.结论 成功优化了SIV gag基因,使其不依赖Rev高水平表达；成功构建了表达优化后SIV gag基因的DNA疫苗和rAd5疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答.
- 陈丹瑛何小周汪孟冉余双庆徐柯李秦剑曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗腺病毒科
- 重组HIV-1 gp120 AAV2/1在小鼠和恒河猴体内的免疫原性被引量：1
- 2010年
- 本文旨在研究表达HIV-1中国流行株gp120基因的重组腺相关病毒疫苗在小鼠和恒河猴体内的免疫原性。用rAAV2/1-gp120免疫BALB/c小鼠和恒河猴,分别用ELISA和HIV-1假病毒中和试验检测免疫动物血清中HIV-1特异性IgG抗体水平和中和抗体水平,用ELISPOT方法和体内杀伤实验检测HIV-1特异性细胞免疫应答水平。结果显示在小鼠体内用rAAV2/1-gp120仅免疫一次就能诱导较高水平的IgG抗体,IgG抗体至少能持续21周,但没有检测到中和抗体。rAAV2/1-gp120在小鼠体内诱导微弱水平的HIV-1特异性细胞免疫应答。rAAV2/1-gp120在恒河猴体内诱导的HIV-1特异性细胞和抗体反应均很弱,且检测不到中和抗体。提示rAAV2/1载体在诱导抗体反应方面具有特殊优势,但若希望诱导HIV-1特异性中和抗体,则需要改造env基因以提高其免疫原性。
- 余双庆冯霞刘红梅杨海儒李红霞曾毅
- 关键词：HIV-1重组腺相关病毒免疫原性
- 表达HIV-1 B亚型env基因的质粒DNA及腺病毒载体疫苗的免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELISA方法 检测免疫小鼠中HIV-1 Gp120特异性细胞免疫反应及抗体反应.结果 DNA疫苗单独免疫及DNA疫苗初免/腺病毒疫苗加强免疫的联合免疫方案皆可诱导较高水平的Gp120特异性细胞免疫反应;而在体液免疫方面,各实验组产生的Gp120特异性抗体水平都较低.结论 所构建的DNA疫苗及rAdV疫苗能有效表达Gp160蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应.
- 杨海儒张凌斐冯霞余双庆庄著伦李红霞曾毅
- 关键词：艾滋病疫苗腺病毒科
- 河南省有偿供血者HIV-1外膜蛋白env基因序列分析及表型预测被引量：5
- 2009年
- 应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与国际参考株RL42的基因离散率为4.87%±0.31%,1个为B亚型,与国际参考株HXB2的基因离散率为5.43%。根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并且分析及比较了重要的功能结构域。发现这15个序列的N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及净电荷数目,预测大多数分离株使用CCR5辅助受体;V3环四肽序列以典型欧美B亚型GPGR最多,占40%;gp120/gp41剪切位点高度保守,预测所有gp160前体都能有效剪切;四种广谱中和抗体2G12I、gG1b12、4E10及2F5的识别位点高度保守,表明大多数分离株对这四种中和抗体敏感。有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗研究和药物开发提供依据。
- 冯霞杨海儒余双庆周玲李红霞李泽琳曾毅
- 关键词：供血者HIV-1
- 表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗免疫原性比较被引量：2
- 2009年
- 目的在小鼠体内比较表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗的免疫原性。方法分别用rAAV2／1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB／c小鼠一次或两次，于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答，用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应。结果单次免疫结果显示，在所有检测点tAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2／1-gag强，抗体反应在免疫后4周无明显差异。两次免疫后4周的检测结果表明，rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTE应答比rAAV2／1-gag强，但抗体反应比rAAV2／1-gag组弱。结论rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应，而rAAV2／1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强，但细胞免疫应答较弱。
- 余双庆冯霞刘红梅杨海儒李红霞曾毅
- 关键词：HIV-1腺病毒科艾滋病疫苗
