国家自然科学基金(81241126)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：邓兴力杨智勇宋晓斌林海陈孝祥更多>>
- 相关机构：昆明医科大学云南省第一人民医院昆明医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小胶质细胞与神经干细胞共同培养对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响
- 2018年
- 目的 探讨小胶质细胞与神经干细胞（NSCs）共同培养条件下对NSCs向多巴胺能神经元分化的促进作用。方法 （1）原代培养新生SD大鼠的小胶质细胞并鉴定。原代培养孕14 d SD大鼠胚胎NSCs并鉴定。（2）取鉴定后细胞分为NSCs单独培养组和小胶质细胞与NSCs共同培养组。2组细胞培养6 d后，采用细胞免疫荧光法及Western blotting实验检测多巴胺能神经元分化与成熟相关因子酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运体（DAT）及炎症因子3（Pitx3）蛋白的表达，采用PCR技术检测2组细胞TH、DAT以Pitx3基因转录水平的差异。结果 （1）新生SD大鼠小胶质细胞CD11b/c染色阳性，所得到的小胶质细胞纯度〉95%。孕14 d SD大鼠NSCs巢蛋白染色阳性。（2）细胞免疫荧光染色结果显示：与单独培养组比较，共同培养组NSCs TH、DAT及Pitx3阳性蛋白明显增多。Western blotting实验结果显示：共同培养组细胞TH、DAT以及Pitx3蛋白的表达量明显高于单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）PCR实验结果显示：共同培养组TH、DAT以及Pitx3基因转录水平均明显高于单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 小胶质细胞与NSCs共同培养可促进NSCs向多巴胺能神经元分化。
- 王威李俊君林海徐蛟天陈孝祥宋晓斌杨智勇邓兴力
- 关键词：神经干细胞小胶质细胞多巴胺能神经元
- 大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞的分离和培养被引量：2
- 2017年
- 目的:体外培养大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞(NSCs),观察其生长及诱导分化培养特点。方法:取孕12.5~14.5 d的SD大鼠,采用机械分离法获取中脑腹侧组织,剪碎并吹打成单细胞悬液后,以2×10~5个细胞/ml的密度接种到无血清NSCs培养基中以神经球法培养。培养神经球5~7 d后,按原密度进行传代培养,并取第三代培养的神经球用含10%胎牛血清(FBS)分化培养液分化培养,分化培养7 d后行免疫细胞化学鉴定。结果:神经球呈巢蛋白(nestin)阳性,诱导分化后的细胞作分别呈微管蛋白(βIII-Tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。结论:经神经球法培养得到的大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞可自我增值,并可诱导分化成神经元和胶质细胞。
- 陈孝祥宋晓斌王向鹏周磊徐蛟天林海杨智勇邓兴力
- 关键词：神经干细胞神经球
- 帕金森病基因治疗研究进展被引量：1
- 2013年
- 帕金森病（PD）是中老年人常见的神经退行性疾病，目前临床主要治疗手段仍为口服左旋多巴（L—Dopa）。L—Dopa通过提高纹状体局部多巴胺水平而改善PD的症状，然而L—Dopa不能逆转PD的病理进程，对晚期PD疗效不明显，长期服用还可导致各种不良反应。实验研究表明，移植胚胎脑组织可显著改善PD动物模型症状，但其面临的伦理学问题使得该方法不能应用于临床。
- 王应莉邓兴力
- 关键词：帕金森病基因疗法
- pCDNA3.1-Nurr1真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建核相关受体因子1(Nurr1)基因真核表达载体,观察其在HeLa细胞内的表达。方法利用RT-PCR技术从大鼠脑组织总RNA中扩增Nurr1cDNA,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine 2000介导转染HeLa细胞,应用荧光定量PCR检测鉴定Nurr1在细胞内的表达。结果 RT-PCR的产物经重组质粒pCDNA3.1酶切,DNA测序证实1 797 bp片段的碱基序列与预期目的基因基本一致。将其转染HeLa细胞后,荧光定量PCR结果表明Nurr1在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-Nurr1,为后续的研究奠定基础。
- 刘波黄涛沈勇蒋宏国杨智勇邓兴力
- 关键词：真核表达转染
- 胚胎中脑神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病模型被引量：5
- 2016年
- 目的研究胚胎中脑神经干细胞(mNSCs)移植对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法分离培养大鼠胚胎mNSCs并进行EGFP基因修饰。前脑内侧束和纹状体立体定向注射6-羟多巴胺建立PD大鼠模型。将EGFP基因修饰mN SCs定向移植到PD大鼠纹状体区。免疫荧光组织化学鉴定移植细胞的存活、迁移和分化。行为学实验观察治疗效果。结果 EGFP基因修饰胚胎mN SCs移植能分化为多巴胺神经元和小胶质细胞。移植后行为学实验发现可改善运动功能。结论移植EGFP基因修饰胚胎mNSCs可改善PD大鼠的运动障碍。
- 张海龙李智高李玉王波段奎甲王明国邓兴力
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白中脑神经干细胞帕金森病
- Nurr1及其在帕金森病治疗中的应用被引量：2
- 2015年
- 帕金森病（Parkinson＇s disease）也称震颤麻痹（paralysis agitans,shaking palsy）,是患病率仅次于阿尔茨海默病,以运动迟缓、肌肉强直、静止性震颤、步态姿势异常为特征性表现,以路易（Lewy）小体形成、多巴胺能神经元变性和功能缺失为病理表现的一种神经退行性疾病[1]。核相关受体因子1（nuclear receptor related factor 1,Nurr1）与帕金森病发病,
- 段奎甲邓兴力杨智勇
- 关键词：帕金森病NURR1RECEPTOR神经退行性疾病阿尔茨海默病静止性震颤
- GFP-Nurr1基因修饰神经干细胞的建立及过表达Nurr1对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响被引量：2
- 2017年
- 目的利用慢病毒载体建立GFP-Nurr1基因修饰的原代神经干细胞(NSCs)模型并观察Nurr1过表达后NSCs向多巴胺神经元的分化影响。方法利用基因重组构建pLenO-DCE-Nurr1慢病毒载体,用慢病毒转染第三代NSCs,转染72 h后荧光检测转染效果;设置空白对照组、空载体组及DCE-Nurr1组,分别用Western blot及PCR检测Nurr1的表达差异;并将转染后的NSCs分化培养7 d后分别用免疫细胞化学检测、Western blot及PCR检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果慢病毒转染NSCs 72 h后,转染率可达90%,与对照组相比DCE-Nurr1组高表达Nurr1。经慢病毒载体感染后的NSCs仍具备分化潜能,分化培养后发现DCE-Nurr1组分化的神经细胞中TH阳性细胞分化率90.60%,对照组为21.2%。结论慢病毒载体可高效转染NSCs过表达Nurr1;Nurr1基因过表达可以促进中脑腹侧来源NSCs向TH阳性多巴胺能神经元方向分化。
- 陈孝祥宋晓斌王向鹏徐蛟天林海王威杨智勇邓兴力
- 关键词：NURR1基因修饰慢病毒神经干细胞
- 多巴胺神经元联合中脑神经干细胞移植治疗帕金森病被引量：5
- 2016年
- 目的探讨多巴胺神经元联合中脑神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠的作用效果。方法体外分离大鼠胚胎腹侧中脑神经干细胞并行增强型绿色荧光蛋白(EGFP)修饰。分离大鼠胚胎多巴胺神经元,并用CM-Di I染料标记。构建经典的6-羟多巴胺毁损帕金森病大鼠模型。采用立体定向注射技术,将细胞移植到帕金森病大鼠纹状体区,阿朴吗啡(APO)腹腔注射诱导其偏侧旋转,评估细胞移植后运动障碍改善情况。采用免疫荧光组织化学鉴定移植细胞的定植存活、迁移及分化。结果细胞移植能显著改善帕金森病大鼠的运动障碍,以多巴胺神经元联合中脑神经干细胞移植(联合移植组)治疗最为显著,有更多的神经干细胞分化为多巴胺神经元。绝大多数移植细胞停留在移植部位,仅极少数向周围脑区迁移。结论多巴胺神经元联合神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠可显著改善其运动障碍,其具体相关分子机制还有待进一步研究。
- 王明国李智高杨智勇王波段奎甲张海龙宋晓斌邓兴力
- 关键词：帕金森病神经干细胞移植多巴胺能神经元
