南京医科大学科技创新基金资助项目
- 作品数：9 被引量：48H指数：5
- 相关作者：殷凯生葛海燕姚欣黄茂周建伟更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白三烯受体拮抗剂对哮喘小鼠气道重塑及细胞周期蛋白D1的表达影响被引量：11
- 2006年
- 目的:研究应用白三烯受体拮抗剂(孟鲁司特钠)对哮喘小鼠肺组织中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达影响及对支气管哮喘气道重塑的作用,探讨白三烯受体拮抗剂在哮喘治疗中的作用。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、孟鲁司特钠组3组,每组10只;卵蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠模型;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;免疫组化观察肺组织中CyclinD1的表达及定位;RT-PCR及Western-blot测定各组小鼠肺组织中CyclinD1的mRNA和蛋白表达变化。结果:HE染色提示哮喘组与对照组相比出现嗜酸性粒细胞浸润增多、纤毛脱失、平滑肌细胞层增厚等改变,而治疗组上述改变较哮喘组为轻;免疫组化显示CyclinD1在哮喘小鼠气道平滑肌细胞、内皮细胞、成纤维细胞中皆有表达而在对照组中表达减弱(P<0.05),而治疗组表达量较哮喘组低(P<0.05);RT-PCR及Westernblot检测发现CyclinD1在哮喘组表达较对照组为高(P<0.01),而治疗组表达量低于哮喘组(P<0.01)。结论:哮喘小鼠肺组织中CyclinD1表达量较正常组为高;白三烯受体拮抗剂能够抑制CyclinD1表达,减轻气道炎症反应、延缓气道重塑进程。
- 葛海燕黄茂姚欣殷凯生
- 关键词：支气管哮喘气道重塑细胞周期蛋白D1
- 人γ-干扰素基因导入人大肠癌细胞中的方法及鉴定被引量：5
- 2002年
- 目的：为将人γ－干扰素（ｈｕＩＦＮ－γ）基因尽快用于临床基因治疗，寻求基因导入的有效方法。方法：利用阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将ｈｕＩＦＮ－γ基因导入人大肠癌细胞株，利用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ对该基因的整合和表达进行鉴定，并对细胞培养上清中γ－干扰素的活性进行了检测。结果：该基因已经有效地进入细胞内并实现了表达。结论：利用脂质体可以有效地将ｈｕＩＦＮ－γ基因导入肿瘤细胞内，基因表达的持续时间可以满足肿瘤基因治疗的需要。不同细胞株其上清中ｈｕＩＦＮ－γ的分泌量不同。
- 丁强沈历宗华一兵吴文溪许德华刘新垣
- 关键词：Γ-干扰素阳离子脂质体大肠癌细胞大肠癌
- 人可溶性肿瘤坏死因子α受体真核表达载体pcDNA3.1(+)/sTNFR的构建被引量：4
- 2005年
- 目的构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+)DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接这两个酶切片段进行定向重组,再将重组DNA转化感受态细胞E.ColiCompetent Cells JM109。复苏后,在含氨苄青霉素的LB固体培养基上筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定。结果挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经证实均为阳性克隆,即sTNFR与pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论将sTNFR cDNA成功地插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中,构建了质粒pcDNA3·1(+)/sTNFR。
- 徐艳章锦才张蕴惠
- 关键词：真核载体质粒
- 纤维粘连蛋白与碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞黏附的协同刺激作用被引量：7
- 2007年
- 目的研究纤维粘连蛋白(fibronection,FN)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单独或联合应用时对成骨细胞在生物衍生骨支架上黏附的影响,并探索其潜在机制。方法取第3代成骨细胞,以bFGF(0.1、1、10和100ng/ml)刺激,接种于FN(0.1、1、10和100μg/ml)或多聚赖氨酸(Polylysine)修饰的生物衍生骨支架上,MTT法检测组间细胞黏附效率差异,电镜观察细胞密度与形态。GRGDS肽封闭后再次重复上述步骤。结果单独应用FN与bFGF均可增加成骨细胞在生物衍生骨支架上的黏附效率(P<0.05),联合应用时,产生的效应显著增强,两者存在交互作用(P<0.01)。而Polylysine与bFGF无此交互作用(P>0.05)。电镜观察发现,两者联合应用时细胞密度、铺展效果均优于单独应用。应用GRGDS肽后,FN联合bFGF产生的黏附促进作用被显著阻断。结论bFGF与FN对成骨细胞在生物衍生骨三维支架上的黏附存在协同刺激作用,细胞黏附产生这一效应的机制很可能是由RGD-整合素α5β1途径来介导的,需深入研究探讨。
- 冯立曹晓建任永信
- 关键词：骨组织工程纤维粘连蛋白碱性成纤维细胞生长因子生物衍生骨
- JWA基因参与细胞氧化应激的机制研究被引量：2
- 2003年
- 目的 建立氧化应激模型 ,探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制。方法 用H2 O2处理人乳腺癌细胞株 (MCF 7)和人胚胎肺纤维细胞株 (WI 38)两种细胞 ,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽 (GSH)的含量 ,用RT PCR半定量的方法及Westernblot蛋白质印迹法分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP2 7、HSP70、HSP90的表达。结果 MCF 7细胞培养上清中H2 O2 处理前MDA为 (0 .5 31± 0 .0 38)mmol/L ,处理后为 (0 .6 74± 0 .0 4 1)mmol/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;GSH在H2 O2 处理前为 (0 .0 5 3± 0 .0 0 2 )g/L ,处理后为 (0 .0 4 4±0 .0 0 2 )g/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。WI 38细胞培养上清中H2 O2 处理前MDA的含量为 (0 .5 72±0 .0 35 )mmol/L ,处理后为 (0 .6 83± 0 .0 2 8)mmol/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;H2 O2 处理前GSH含量为(0 .0 5 8± 0 .0 0 2 )g/L ,处理后为 (0 .0 5 0± 0 .0 0 2 )g/L ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。经H2 O2 孵育不同时间后 ,JWAmRNA在MCF 7细胞中明显下降 ,6h下降 6 8.4 % ,在WI 38细胞中则变化不明显 ;JWA蛋白和HSP2 7在两种细胞中的表达水平都有明显增加 ,但增加的程度不同。结论 JWA基因参与细胞氧化应激且在不同类型的细胞中?
- 王南平周建伟李爱萍曹海霞王心如
- 关键词：氧化应激JWA基因热休克蛋白27丙二醛谷胱甘肽
- 急性非淋巴细胞性白血病中JWA基因表达的意义被引量：5
- 2001年
- 目的 :探讨 JWA基因表达与不同病期急性非淋巴细胞白血病 ( ANL L )的相关意义。方法 :应用逆转录 -聚合酶链反应( RT- PCR)技术检测 2 4例不同病期的 ANL L 患者骨髓和 (或 )外周血中 JWA基因的表达。结果 :JWA基因表达在初发 ANL L为13 /13 ( 10 0 %阳性 ) ,完全缓解时为 1/4,复发患者为 3 /4,由骨髓增生异常综合征 ( MDS)转化而来为 1/3。结论 :JWA可能参与原发 ANL L 的某个发病过程 ,其与白血病的发生。
- 沈群盛瑞兰陆化曹海霞夏薇周建伟
- 关键词：JWA基因急性非淋巴细胞性白血病细胞分化基因表达
- Homer与注意缺陷多动障碍关系的研究
- 注意缺陷多动障碍(Attention Deficit Hyperactivity Disorder,ADHD)是儿童常见的神经行为问题，发病率达2.59％～7.25％，严重影响儿童的身心健康和学习生活，因此，有关ADHD...
- 洪琴
- 关键词：注意缺陷多动障碍发病机制
- 文献传递
- 注意缺陷障碍动物模型的行为学检测被引量：1
- 2007年
- 利用动物模型进行研究是注意缺陷障碍（ADHD）基础研究的主要手段之一，而行为学检测则是动物模型研究的重要内容。近年，国外学者根据ADHD的临床特点采用开场实验、Làt迷宫、操作式条件反射、5-CSRTT、Morris水迷宫等多种方法从自主活动水平、注意能力、冲动水平以及学习记忆等方面进行行为学检测，并将其用于ADHD的基础研究。该文就ADHD动物模型研究中应用的行为学检测方法作一综述。
- 洪琴池霞陈荣华
- 关键词：注意力缺陷障碍伴多动动物实验
- Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果:在经HindⅢ和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSm ad4-1、psiSm ad4-2和psiSm ad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%。结论:成功构建Sm ad 4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。
- 季国忠张发明黄曙缪林刘政喻容彬王学浩
- 关键词：RNA干扰SMAD4小发夹RNA293细胞肿瘤
- 细胞周期蛋白D_1在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系被引量：11
- 2006年
- 目的研究细胞周期蛋白 D_1(Cyclin D_1)在支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中的表达,探讨 Cyclin D_1在哮喘及气道重塑中的作用。方法将40只 SPF 级 BALB/c 小鼠按随机数字表法分为正常对照组(A 组)、哮喘雾化2周组(B 组)、哮喘雾化4周组(C 组)、哮喘雾化8周组(D 组)4组,每组10只。用10%鸡卵白蛋白(OVA)致敏和1%OVA 激发小鼠建立哮喘模型。分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞(EOS)计数及分类;用动物肺功能仪检测各组小鼠肺功能状况;用苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症及细胞浸润情况;用图像分析软件观察气道壁及平滑肌层变化情况;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量(Real-time)PCR 测定肺组织中 Cyclin D_1mRNA 水平表达变化;用 Western blot 法观察肺组织中 Cyclin D_1的蛋白表达变化。结果 BALF 分析结果提示,B、C、D 组 EOS 计数分别为(42.6±0.9)×10~4/L、(54.7±1.4)×10~4/L、(44.8±2.4)×10~4/L,与A组[(3.4±0.5)×10~4/L]比较差异有统计学意义(q 值分别为79.75、91.42、84.82,P 均<0.01);对小鼠呼气阻力检测发现,乙酰胆碱浓度为45 μg/kg 时 B、C、D 组分别为(5.27±0.16)cm·L^(-1)·min^(-1)、(6.68±0.20)cm·L^(-1)·min^(-1)、(7.14±0.41)cm·L^(-1)·min^(-1),与 A 组[(4.11±0.15)cm·L^(-1)·min^(-1)]比较差异有统计学意义(q 值分别为5.58、6.39、7.11.P 均<0.05);支气管平滑肌面积/管腔内周长(WAm/Pi)B 组为2.8±0.6,C 组为4.8±0.6,D 组为6.4±0.7,与 A 组(2.4±0.4)比较差异有统计学意义(q 值分别为6.40、8.28、9.27,P<0.05);管壁面积/管腔内周长(WAt/Pi)B 组为6.4±0.8,C 组为8.3±1.2,D 组为9.3±1.0,与 A 组(5.6±1.0)比较差异有统计学意义(q 值分别为2.80、4.83、6.37,P 均<0.05);Western blot 检测发现 Cyclin D_1在 B、C、D 组表达量分别为0.587±0.015、0.808±0.029、0.826±0.022,与 A 组(0.404±0.016)比较差异有统计学意义(q 值分别为5.87、8.08、8.26,P 均<0.01);相关性分析结果提示呼�
- 葛海燕黄茂姚欣殷凯生杨玉
- 关键词：细胞周期蛋白D1哮喘支气管高反应性气道重塑
