广东省自然科学基金(06021283)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 微小RNA-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移的影响被引量：5
- 2012年
- 目的调控前列腺癌干细胞（PCSCs）中微小RNA-101（miR-101）表达，观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化。方法通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、Westernblot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR．101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响。结果在PCSCs中转染miR-101后，实验组较未处理组EZH2表达量下降46％（P〈0．05）；双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2；凋亡实验中，实验组细胞凋亡率为（3．79±0．24）％，较对照组凋亡率明显增加（P〈0．05）；周期实验中，实验组细胞G1期比例为（82．95±0．78）％，较对照组比例增加（P〈0．05），细胞被阻滞在G1／S期；迁移试验中，细胞迁移率为0．38±0．01，明显低于对照组（P〈0．05）。结论过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力。
- 周邦奋李奎庆范新兰毕良宽刘成许可慰
- 关键词：前列腺癌干细胞
- 膀胱移行细胞癌组织中Survivin、Bcl-2、p53的表达及临床意义被引量：2
- 2007年
- 目的探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中Survivin、Bel-2、p53的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链酶卵白素-过氧化物酶复合物（sP）方法，检测78例BTCC组织中Survivin、Bel-2、p53的表达，并与15例正常膀胱黏膜组织进行对照研究。结果78例BTCC组织中，Survivin的阳性率为65．4%，Bel-2阳性率为55．1%，p53阳性率为48．7％，而正常膀胱黏膜组织中未见Survivin、p53阳性表达。Survivin、Bcl_2表达与BTCC的病理分级和临床分期显著相关（P〈0．05）。根据Spearman相关分析表明Survivin与Bcl-2、p53表达呈正相关（P〈0．05）。结论Survivin和Bcl-2的高表达提示膀胱癌预后不良，Sttrvivin在BTCC组织中的表达与Bcl-2、p53的异常表达密切相关。
- 许可慰黄健李海刚林天歆尹心宝胡明
- 关键词：膀胱癌SURVIVINBCL-2P53
- RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bel-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA（siRNA）的DNA模板，构建pGenesil-1-Bcl-2siRNA重组质粒，转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bel-2蛋白表达的影响，MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用，Annexin-V—PI双染法流式细胞术（FCM）检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bel-2 siRNA重组质粒，并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70％；转染重组质粒后，T24细胞的活力降低为（66．9±5．6）％；重组质粒组的T24细胞凋亡率为34．55％～45．39％。结论pGenesil-1-Bel-2 siRNA重组质粒明显下调Bel-2在膀胱癌细胞中的表达，并抑制肿瘤细胞生长，促进其凋亡。
- 许可慰黄健林天歆郭正辉胡明尹心宝潘秋辉
- 关键词：膀胱肿瘤BCL-2
- 人膀胱癌bcl-2-siRNA慢病毒载体的构建及稳定转染细胞株的建立被引量：1
- 2011年
- 目的构建表达人膀胱癌bcl-2基因的小分子RNA（siRNA）的慢病毒载体并建立稳定转染细胞株。方法根据GenBank提供的bel-2eDNA序列，设计3条针对bcl-2siRNA序列，分别构建pSIHI—Hl-copGFP重组质粒。筛选出最有效沉默靶基因的siRNA后，将携带目的序列的慢病毒载体转染到293T细胞中，感染膀胱癌细胞株T24，建立稳定转染细胞株。结果设计的针对bcl-2的序列中第3条的抑制效果最好，下调59．0％。以此目的序列构建稳定转染细胞株，对bcl．2mRNA抑制率达65．6％，对bcl-2蛋白的抑制率高达74．5％。结论成功构建表达人膀胱癌bcl-2-siRNA的慢病毒载体，它能有效沉默bcl-2基因在膀胱癌细胞株T24中的表达并建立了稳定转染细胞株。
- 许可慰董文李奎庆张彩霞黄海韩金利
- 关键词：膀胱癌BCL-2SIRNA慢病毒载体
- HER-2和MMP-2在膀胱移行上皮癌组织中的表达及意义被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中HER-2和MMP-2蛋白的表达、相关性及意义。方法:应用免疫组织化学链酶卵白素-过氧化物酶复合物(SP)方法,检测82例BTCC组织标本中HER-2和MMP-2蛋白的表达,并与10例正常膀胱组织进行对照研究。结果:82例BTCC组织中,HER-2蛋白的阳性表达率为51.2%,MMP-2阳性率70.7%;正常膀胱组织中未见HER-2和MMP-2蛋白阳性表达。HER-2和MMP-2蛋白的阳性表达随着BTCC的病理分级和临床分期的增高而增加(P<0.05);HER-2和MMP-2两者在BTCC组织的表达存在正相关(P<0.05)。结论:HER-2与MMP-2在膀胱移行上皮癌组织中高表达,两者的表达密切相关,与促进癌浸润和转移有关,可能提示预后较差。
- 许可慰李海刚黄健韩金利林天歆胡明
- Bcl-2 siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:构建bcl-2特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步观察其对膀胱癌细胞生长的影响。方法:根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与含U6启动子的pGenesil-1质粒定向连接,构建真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555。经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。转染T24细胞,采用半定量RT-PCR观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响;用MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用。结果:构建了bcl-2siRNA的真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555,并经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。转染T24细胞72h后,RT-PCR显示bcl-2基因表达下调接近80%;MTT发现T24细胞的体外生长受到明显抑制。结论:bcl-2的特异性siRNA真核细胞表达载体成功构建,有效沉默bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,抑制了癌细胞的生长。
- 许可慰黄健林天歆郭正辉胡明尹心宝潘秋辉
- 关键词：膀胱肿瘤RNA干扰基因BCL-2
