国家林业局948项目(2004-Z41)
- 作品数：9 被引量：80H指数：5
- 相关作者：张富强宋建领胡媛媛王金萍郭松辉更多>>
- 相关机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南农业大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划云南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- H9 N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达被引量：1
- 2006年
- 根据已知H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计、合成PCR引物。自H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶扩增血凝素基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组血凝素,分子质量约75 ku。采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组血凝素的免疫反应性,结果表明,重组血凝素能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。
- 王金萍宋建领张富强胡媛媛
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型血凝素
- 禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的研究
- 基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及:H5N...
- 张应国宋建领胡媛媛王金萍张富强
- 关键词：禽流感病毒血凝素神经氨酸酶多重RT-PCR
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆及表达被引量：11
- 2006年
- 根据已知H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列设计,合成克隆引物。自H9N2亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNAPolymerase)扩增NA基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组NA,分子量约54·7ku。经免疫印迹及ELISA分析重组NA的免疫反应性和免疫动物分析其免疫原性,结果表明:重组NA能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免疫动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有良好的抗原性。
- 宋建领张富强王金萍胡媛媛
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型神经氨酸酶
- H5N1和H9N2亚型禽流感病毒型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2005年
- 采用禽流感病毒多克隆抗体及型特异性单克隆抗体,研究建立了型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5N1和H9N2亚型禽流感病毒。优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性进行了分析,并与病毒分离鉴定的结果进行了比较。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于临床样品及鸡胚、细胞培养物中禽流感病毒的检测。
- 宋建领张富强胡媛媛王金萍
- 关键词：禽流感病毒
- 禽流感病毒M1蛋白的表达及其免疫反应性分析
- 根据已知禽流感病毒M1基因序列设计合成PCR克隆引物。自接种H5N1亚型病毒的鸡胚组织中提取RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTM DNA Polymerase)经PCR扩增M1基因,采用Invit...
- 宋建领王金萍胡媛媛张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫反应性
- 文献传递
- 猪链球菌PCR检测技术研究进展被引量：4
- 2006年
- 猪链球菌是猪的一种重要病原菌，并且也会引起人的链球菌病。有35个英膜血清型（1／2、1～34），通常自发病或死亡猪体分离获得1，2，7，9型和14型菌株，其中2型是毒力最强的血清型。根据已知猪链球菌16S rRNA及溶血素（sly）、谷氨酸脱氢酶（gdh）、荚膜多糖（cps）、胞壁蛋白或溶菌酶释放相关蛋白（mrp）、胞外因子（epf）编码基因序列设计特异性引物，建立猪链球菌群和1（14），2（1／2），7型和9型特异性PCR或多重PCR，建立2型致病性菌株和1型高致病性菌株毒力鉴定PCR或多重PCR，用于检测和鉴别临床病料和细菌分离物中的猪链球菌，具有高敏感性和高特异性，与其他致病菌及其他血清的猪链球菌型无交叉反应，为疫病诊断及流行病学的研究提供了快速、简便和有用的工具。
- 张文东张应国宋建领张富强
- 关键词：猪链球菌血清型毒力聚合酶链反应
- 猪圆环病毒基因组结构及其分子特征研究进展被引量：7
- 2006年
- 目前,国际上已分离获得2个不同血清型的猪圆环病毒(PCV),并命名为猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2)。PCV-1对猪无致病性,而PCV-2被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PCV基因组为单股环状双向DNA,由2个头-头相对排列的开放性阅读框和基因间隔区组成,包含rep基因、cap基因及病毒DNA复制起始区茎环序列。rep基因编码2种不同的复制酶相关蛋白,cap基因编码病毒结构蛋白或衣壳蛋白,茎环序列在病毒蛋白合成、DNA自身复制及子代病毒产生中发挥重要作用。PCV-2衣壳蛋白110位(P→A)和191位(R→S)氨基酸突变,提高PCV-2在体外组织培养中的增殖效率,而减弱其对动物的致病性和毒力。
- 张应国张文东宋建领张富强
- 关键词：猪圆环病毒基因组
- 禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的建立被引量：34
- 2005年
- 研究建立了禽流感病毒(AIV)A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型AIV.所建立的RT-PCR和多重RT-PCR从核酸提取、基因扩增到产物分析在3～4h内即可完成,经对36株AIV及相关病毒分离物检测,与病毒分离鉴定的结果完全一致,且与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用多重RT-PCR检测80份棉拭子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,二者H5N1、H9N2亚型的鉴定结果完全吻合.结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,为临诊样品中AIV型及H5N1、H9N2亚型鉴定和诊断的有效方法.
- 张应国宋建领胡媛媛王金萍张富强
- 关键词：禽流感病毒多重RT-PCRH5N1亚型
- 禽流感病毒M1蛋白的表达及其免疫反应性分析被引量：3
- 2005年
- 根据已发表的禽流感病毒M1基因序列设计合成PCR克隆引物,自接种H5N1亚型病毒的鸡胚组织中提取RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Polymerase)经PCR扩增M1基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组蛋白,分子量约29.8 kDa。采用单克隆抗体和阳性血清经ELISA、阻断ELISA、免疫印迹分析重组蛋白的免疫反应性。结果发现:重组M1蛋白能与单克隆抗体和阳性血清发生特异性结合,且此结合能被天然病毒抗原阻断。研究表明:重组蛋白M1具有良好免疫反应性。
- 宋建领王金萍胡媛媛张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫反应性
- H5N1亚型禽流感病毒NP基因的克隆与表达被引量：1
- 2007年
- 根据已知H5N1亚型禽流感病毒NP基因序列设计、合成PCR克隆引物。自H5N1阳性病料中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶,经PCR扩增NP基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组NP蛋白,分子质量约66.0ku。采用单克隆抗体和阳性血清经ELISA、免疫印迹分析重组蛋白的免疫反应性。结果表明:所获得的重组NP蛋白在ELISA分析中均能与阳性血清和单克隆抗体发生特异性结合,但在免疫印迹分析中仅与阳性血清发生特异性结合。
- 胡媛媛宋建领张富强郭松辉王金萍
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型核蛋白
