山西省青年科技研究基金(2010021035-1)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：杨涛杨利军牛勃孙栋栋张栋更多>>
- 相关机构：山西医科大学首都儿科研究所教育部更多>>
- 发文基金：山西省高等学校优秀青年学术带头人支持计划项目山西省青年科技研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ERC(N^5)多肽识别整合素α_vβ_3的特异性及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
- 2012年
- 目的分析含RGD序列的多肽ERC(N5)与整合素αVβ3结合的能力,并探讨其对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响。方法利用流式细胞术检测HepG2细胞表面整合素αVβ3的含量以及ERC(N5)与FITC-αVβ3抗体LM609竞争结合HepG2细胞的情况;用ERC(N5)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,光学显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果 HepG2细胞表面αVβ3的含量为47.0%;浓度为8、16、32和64μmol/L的ERC(N5)均能抑制LM609与HepG2细胞的结合及细胞的增殖活力,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,经16μmol/L ERC(N5)处理的细胞可见形态发生明显改变,细胞凋亡率明显升高。结论 ERC(N5)可特异结合整合素αVβ3,并通过抑制αVβ3的作用来抑制肝癌HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡。
- 刘海桃孙栋栋杨利军张栋杨涛
- 关键词：RGD序列整合素ΑVΒ3细胞增殖
- 多聚甲醛固定对流式细胞术检测HepG2细胞整合素αVβ3的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:检测HepG2细胞表面整合素αVβ3的表达情况,同时探讨多聚甲醛的固定处理对HepG2细胞表面αVβ3检测的影响。方法:分别用0.25%的胰蛋白酶和1%的EDTA消化收集HepG2细胞,以FITC标记的抗αVβ3单抗检测细胞表面αVβ3的表达情况;在检测中,用2%浓度的多聚甲醛固定细胞后,采用流式细胞仪测定多聚甲醛固定组和未固定组HepG2细胞的平均荧光强度和阳性细胞率,对结果进行统计学分析。结果:以胰蛋白酶消化HepG2细胞后,抗αVβ3单抗标记的阳性细胞率为3.6%,远低于EDTA消化组的阳性细胞率(47%)。多聚甲醛固定组的平均荧光强度为2.23,阳性细胞率为4.6%;而未固定组的平均荧光强度为6.97,阳性细胞率为30.1%。以上结果经统计学分析,均具有显著性差异(P<0.05)。结论:HepG2细胞表达整合素αVβ3,多聚甲醛固定处理可干扰对HepG2细胞αVβ3的检测。
- 孙栋栋杨利军杨涛
- 关键词：HEPG2细胞整合素ΑVΒ3多聚甲醛
- 抗TNFα单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件的研究被引量：8
- 2010年
- 抗TNFαscFv在E.coliHB2151中以可溶性形式在胞周质中表达,为了进一步提高其表达量,文章通过摇瓶培养对其诱导表达条件进行了研究。将噬菌体抗体库筛选到的阳性克隆感染E.coliHB2151,分别改变诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG的浓度,并在培养基中加入甘氨酸和Triton X-100等添加剂,观察诱导条件的改变对scFv表达和分泌的影响。结果表明,E.coliHB2151在培养5 h对数生长期时开始诱导,在ITPG浓度为0.5 mmol/L条件下,30℃诱导20 h,胞周质中scFv的表达量比优化前增加了一倍,而且在诱导后期加入甘氨酸和Triton X-100后可增加scFv向培养基的分泌量。免疫学印迹法检测抗TNFαscFv能够与天然结构的TNFα结合,识别抗原的构象表位。该工作为其他可溶性scFv表达量的提高提供了可参考的模式。
- 杨涛杨利军张建林张悦红牛勃
- 关键词：单链抗体肿瘤坏死因子Α大肠杆菌
- 抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定被引量：1
- 2010年
- 应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.
- 杨涛柴蔚然杨利军程牛亮解军牛勃
- 关键词：噬菌体展示技术肿瘤坏死因子-Α单链抗体
- 抗肿瘤坏死因子-α单链抗体在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化
- 2011年
- 目的构建抗肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)单链抗体(Single chain fragment variable,scFv)的原核高效表达体系,并优化表达条件。方法在引物中添加编码6×His的核苷酸片段,使目的蛋白C-末端带有6×His标签。从质粒pCANTAB 5E-scFv中PCR扩增scFv基因,连接至pBV220载体,连接产物分别转化至E.coli BL21(DE3)和DH5α中,42℃诱导表达,并对诱导时间、培养基pH值和类型进行优化,Western blot分析表达产物的反应原性。结果 PCR扩增出的scFv基因片段长度约770 bp,且序列正确;重组表达质粒pBV220-scFv经酶切鉴定证明构建正确;在E.coli BL21(DE3)中可获得表达,在E.coli DH5α中不表达;表达的重组scFv相对分子质量约为28 000,以包涵体形式存在于胞浆中,表达量约占菌体总蛋白的15%,且可与抗His-Tag抗体发生特异性反应;工程菌的最佳诱导表达条件为:以E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在pH 7.4的LB培养基中,42℃诱导5 h。结论将scFv的表达载体更换为pBV220,可提高scFv的表达量,在优化表达条件下,scFv的表达水平进一步提高。
- 杨利军张栋王惠珍牛勃杨涛
- 关键词：单链抗体肿瘤坏死因子-Α大肠杆菌基因表达
- RWR通过与血小板表面整合素α_(Ⅱb)β_3受体作用对血栓形成的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ(3GPⅡb/Ⅲ)a结合,对血小板聚集抑制率、血栓重量、血管组织结构的影响。方法取10名无心脑血管疾病的健康志愿者的全血,分离富含血小板的血浆(platelet-rich plasma,PRP),采用血小板聚集仪检测不同剂量(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)RWR对二磷酸腺苷二钠(ADPNa2)诱导的血小板聚集抑制率的影响;分别用0.3、0.6、1.2mg/kgRWR作用家兔及0.6、1.2、2.4 mg/kg RWR作用大鼠,建立兔动静脉旁路循环血栓模型和大鼠三氯化铁血栓模型,观察血栓重量的变化和血管组织结构的变化。结果随着RWR剂量增加,血小板最大聚集率降低,血小板聚集抑制率增加,RWR对血小板聚集抑制率的半数有效抑制浓度(IC50)为16.0μmol/L。随着RWR剂量的增加,血栓重量减少,血栓形成的抑制率增加,血管腔堵塞程度减弱,血管腔内孔隙增加。结论 RWR小肽通过与血小板表面整合素αⅡbβ(3GPⅡb/Ⅲ)a受体结合,抑制血小板聚集和抗血栓。
- 赵海霞杨涛杨利军
- 关键词：RGD序列血栓
