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广东省科技计划工业攻关项目(031800259)
作品数:
1
被引量:3
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相关作者:
付云
张剑英
梁敏
宋祥晨
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付云
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2013
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牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1表达的影响
被引量:3
2013年
目的探讨牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1的调节机制,为牙周炎发病机制的研究提供理论依据。方法标准厌氧环境下培养牙龈卟啉单胞菌W83,分离提纯牙龈蛋白酶。用8.348U/L牙龈蛋白酶处理小鼠成骨细胞MC3T3-E148h,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法4’,6-二脒基.2一苯基吲哚[transferase—mediateddeoxyuridinetriphosphate—biotinnickendlabeling-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidinedihydrochloride,TUNEL—DAPI]双染色法检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测整合素α5、β1蛋白的表达水平。结果精氨酸.蛋白酶活性为(41.74±2.11)U/L,赖氨酸一蛋白酶活性为(1.02±0.25)U/L。TUNEL—DAPI染色显示牙龈蛋白酶作用于MC3T3一E1细胞48h后诱导细胞发生凋亡。在短时间内(≤72h)牙龈蛋白酶呈时间依赖性下调整合素α5、β1的表达水平,48h时整合素α5、β1相对表达量分别为(0.485±0.039)、(0.504±0.002),72h时分别为(0.398±0.058)、(0.179±0.001),与对照组(蛋白相对表达量分别为1.000±0.000、1.000±0.000)相比差异均有统计学意义(P〈0.05);72h后,整合素α5表达水平与对照组相比差异无统计学意义,但整合素B1仍持续下调(96、120h时相对表达量分别为0.604±0.003、0.357±0.002),均显著低于对照组(1.000±0.000)(P〈0.05)。牙龈蛋白酶特异性抑制剂甲苯磺酰.L.赖氨酰.氯甲基酮(tosyl.CL—clysine-chloromethyl—ketone,TLCK)可有效抑制蛋白酶活性,使整合素α5、β1蛋白表达量分别从(0.398士0.058)、(0.179±0.001)显著上升至(0.7814-0.012)、(0.857±0.060)(P〈0.05),但TLCK本身不改变整合素α5、β1的表达水平(P〉0.05)。同时牙龈蛋白酶还呈剂量依赖性下调整合索α5、β1的表达水平,20.8700U/L牙龈�
张剑英
付云
宋祥晨
梁敏
关键词:
细胞凋亡
整合素Α5
整合素Β1
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