国家重点基础研究发展计划(2010CB530004)
- 作品数：31 被引量：110H指数：5
- 相关作者：吴忠道吕志跃詹希美何蔼杨潇更多>>
- 相关机构：中山大学教育部广东药学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析被引量：1
- 2010年
- 目的克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景。方法利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性。结果该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基。成功构建了重组质粒且目的基因在E.coliBL21中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白。融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景。
- 岳永亮于彦杰杨潇程梅何蔼曲振宇刘静王琳李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫生物信息学原核表达免疫诊断
- 广州管圆线虫感染大小鼠后脑内水通道蛋白4表达水平研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究水通道蛋白4(AQP-4)在广州管圆线虫感染大小鼠脑组织中的表达水平及其与脑水肿的关系。方法在不同感染时期(0 d、7 d、14 d、21 d),用Realtime PCR法检测大鼠感染不同时间组,及米诺环素给药+感染组和单纯感染组小鼠脑组织中AQP-4的表达水平,测定各组小鼠脑组织含水量。结果大鼠感染广州管圆线虫后脑组织中AQP-4的表达水平在7 d时有升高,而其他时间都无明显变化。小鼠感染广州管圆线虫后,脑组织中的AQP-4水平明显升高,且成持续升高状态。用米诺环素抑制小胶质细胞后,给药组小鼠脑内AQP-4的水平明显下降,脑组织含水量也低于单纯感染组。结论AQP-4与广州管圆线虫感染所致的小鼠脑水肿密切相关,小胶质细胞可能是参与调节这一过程的重要细胞。
- 魏洁陈炜吴峰梁锦仪郑焕钦孙希吕志跃张萍吴忠道
- 关键词：广州管圆线虫水通道蛋白4
- 巴贝虫和巴贝虫病的研究进展被引量：7
- 2012年
- 巴贝虫（Babesia spp．）是一种人畜共患的血液寄生虫，主要由蜱传播，呈世界性分布，国内外均有人体感染的报道，人感染巴贝虫后，可导致贫血、高热、血红蛋白尿、黄疸、肌痛等症状，临床症状轻重不一，可由无症状感染到威胁生命，主要取决于宿主的身体状况和寄生虫。常用的检查方法有涂片染色法、动物接种分离法、血清学检测法及分子生物学检测法。该文就巴贝虫的形态学特点、生活史、基因组、致病性、临床与实验室诊断以及预防治疗方面做一综述。
- 陈小光李学荣吴忠道
- 关键词：分子生物学
- 广州市部分高校广州管圆线虫的中间宿主东风螺感染情况调查被引量：3
- 2013年
- 目的调查广州市内有代表性的一部分高等院校广州管圆线虫中间宿主东风螺的情况，了解其分布及广州管圆线虫的感染情况，为制订广州管圆线虫病的防治措施提供依据。方法对广州市中心地带的各区进行调查，每个区选取1～2所高校作为调查点，在野外鼠类活动较多的地方采集东风螺作为调查样本，利用消化法观察并统计其广州管圆线虫的感染率与感染度。结果5个区共8个调查点均发现有东风螺分布，除中山大学北校区与华南农业大学未发现东风螺感染广州管圆线虫外，其余调查点均收集到感染的东风螺。所有调查点共检查东风螺292只，广州管圆线虫的感染率为16．1％（47／292），各地区感染率差异有统计学意义（X^2=186．4，P〈0．01），平均感染度为410．6条／螺。结论广州管圆线虫的中间宿主东风螺在广州各高校分布依旧广泛，且大部分东风螺均不同程度地感染广州管圆线虫．但总体感染率和感染度相对有所下降。
- 吴挺丰聂蔓牛星跃冯嘉荣梁登陈婧何蔼詹希美
- 关键词：广州管圆线虫中间宿主感染率
- 广州管圆线虫Ⅳ期幼虫cDNA文库的筛选及EST序列分析
- 2012年
- 目的筛选和鉴定广州管圆线虫未知基因序列，丰富该虫的基因序列数据，为寻找诊断或药物靶点分子提供实验依据。方法构建广州管圆线虫Ⅳ期幼虫cDNA噬菌体文库，随机挑选单个噬菌斑，提取噬菌体DNA进行PCR，扩增其插入的cDNA片段并对PCR产物进行序列测定；采用生物信息学方法对表达序列标签（expressed sequencetags，EST）序列进行分析。结果获得了51条广州管圆线虫基因的EST序列，并提交至GenBank，这些基因包括半乳糖凝集素10，半乳糖凝集素140，表皮蛋白，CRE—RPS-24蛋白等。序列分析结果提示，表皮蛋白和CRE—RPS-24蛋白可能为具有诊断价值的抗原分子，值得进一步研究。结论获得51条广州管圆线虫基因序列，为进一步研究广州管圆线虫致病机制及候选抗原分子提供了新的序列信息。
- 徐长志吕志跃郑焕钦吴忠道
- 关键词：广州管圆线虫CDNA文库未知基因表达序列标签
- 细胞凋亡发生机制研究进展被引量：13
- 2016年
- 细胞凋亡是通过一系列基因的激活、表达及调控,按照自身程序出现的主动性、生理性的死亡过程。细胞凋亡在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要的意义。细胞凋亡异常会导致疾病的发生,如肿瘤、自身免疫性疾病、神经退化性疾病等。本文对细胞凋亡的生物学意义及其分子机制进行综述。
- 张梦颖吕志跃吴忠道
- 关键词：细胞凋亡线粒体死亡受体基因调控
- 虫源性蛋白酶在寄生虫感染与免疫作用的研究进展
- 2011年
- 蛋白酶是一类广泛分布于微生物、植物和动物中具催化蛋白质肽键水解活性的酶的总称。近年来,随着寄生虫基因组和后基因组研究的深入,发现了一批在寄生虫感染与免疫中发挥重要作用的虫源性分子，寄生虫蛋白酶就是其中的典型代表。本文综述了近年来虫源性蛋白酶在寄生虫入侵、移行、营养及免疫逃避中作用的研究。
- 祝程诚李宝钏吕志跃吴忠道
- 关键词：免疫作用蛋白酶水解活性后基因组免疫逃避
- 大鼠脊髓钙调蛋白Parvalbumin和Calbindin-28 KD阳性神经元的形态与分布特征被引量：1
- 2012年
- 目的观察证实钙调蛋白Parvalbumin(PV)和Calbindin-28KD(CB)阳性神经元在大鼠脊髓不同节段不同区域内的形态及分布特征。方法成年雄性SD大鼠常规灌注固定,取第5～8颈髓、3～6胸髓和1～5腰髓节段;振动切片之后进行免疫组化PAP单标记;光镜观察阳性神经元的形态和分布特征、并进行计数和测量;用Excel软件对阳性神经元数量、胞体大小、突起数量进行统计处理。结果PV阳性神经元主要存在于后角的Ⅱ层和胸核、中间带外侧、中间内侧核、前角的Ⅷ层;CB阳性神经元主要存在于后角Ⅰ～Ⅱ层、中间带,前角的Ⅷ～Ⅸ层之间。后角细胞较中间带及前角细胞数量多,胞体小,突起少。在不同区域,两种阳性神经元的细胞数量,胞体大小,突起数目都存在统计学差异(P﹤0.05);而在不同节段同一区域的比较中,只有腰前角PV阳性神经元的胞体比较大(P﹤0.05)。结论PV阳性神经元在胸核及中间内侧核的聚集以及阳性纤维在薄楔束和后角Ⅱ层胶状质内的密集分布提示其与机体痛觉传入﹑本体感觉及内脏感觉的联系;CB阳性神经元在前角Ⅷ～Ⅸ层之间的特征性分布说明其与闰绍细胞功能有关;两种钙调蛋白在脊髓不同节段之间的形态及分布基本无差别提示它们的功能并没有特异地对应于躯体或内脏。
- 刘宗伟朱亚西欧阳丽斯詹玛琍贾钰马宇昕李幽兰阳桂香雷万龙
- 关键词：脊髓PARVALBUMINCALBINDIN-D28K
- 趋化因子与寄生虫病被引量：3
- 2015年
- 寄生虫的入侵、移行和寄生均伴随宿主受累部位不同程度的炎性细胞浸润,引起宿主免疫病理炎症的同时可对寄生虫起到损伤、杀死和清除作用。趋化因子可定向趋化炎症细胞从而在寄生虫病的发生、发展及预后中起着不可或缺的重要作用。本文就寄生虫病与趋化因子间关系的研究进展进行综述。
- 李颖符洪源岑俊杰李浩李梓雄吕志跃吴忠道
- 关键词：寄生虫病趋化因子炎症
- 广州管圆线虫Asp-1基因的克隆表达及各虫期转录水平研究被引量：1
- 2011年
- 目的构建广州管圆线虫天冬氨酰蛋白酶(Asp-1)基因的原核表达系统,研究该基因在各虫期的转录水平。方法构建重组质粒pET-30a(+)-Asp-1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达载体,经IPTG诱导表达后,Ni-IDA亲和层析纯化表达产物。通过以β-肌动蛋白为内参、以各期虫cDNA为模板的实时荧光定量PCR,研究该基因在各虫期的表达水平。结果获得纯化的重组蛋白,相对分子质量约为43000,与生物信息学分析预测结果一致。qRT-PCR显示该基因在三期幼虫中表达丰度最高,四/五期幼虫、成虫雄虫、雌虫依次降低。结论 Asp-1基因的表达丰度在三期幼虫中最高的实验数据与三期幼虫感染性最强的事实相符,提示天冬氨酰蛋白酶有可能是幼虫入侵宿主的关键酶,为后续广州管圆线虫虫体侵入宿主的机制以及宿主保护机制研究打下基础。
- 王琳杨潇曲振宇刘静刘茜何蔼陈婧李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫原核表达实时荧光定量PCR
