国家重点基础研究发展计划(2002CB513007)
- 作品数：14 被引量：195H指数：5
- 相关作者：吕厚山刘新平苏金于江天陈占昆更多>>
- 相关机构：北京大学第四军医大学清华大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市科委重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 类风湿关节炎滑膜细胞中白三烯B4诱导肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β mRNA表达的测定被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞中白三烯B4(LTB4)诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达的定量测定方法。方法:RA患者的滑膜细胞进行原代培养,加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下,分别加入MK-886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)和苯丁抑制素(Bestatin,LTA4水解酶抑制剂),采用TaqMan PCR来定量检测滑膜细胞中TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达。结果:原代培养的RA滑膜细胞的基本TNF-α和IL-1βmRNA表达水平(TNF-α/GAPDH和IL-1β/GAPDH),分别为0.02±0.00和0.16±0.01。当加入外源性的LTB410-9和10-8mol/L后,LTB410-9mol/L使TNF-αRNA水平的表达增高了7倍,LTB410-8mol/L使TNF-αmRNA水平的表达增高了15倍,LTB410-8mol/L使IL-1βmRNA水平增高了1倍。而加入LIT刺激内源性的LTB4增高后,使TNF-α和IL-1βmRNA水平分别增高了145倍和12倍。在LIT存在的情况下,加入LTB4合成抑制剂MK-886(1μmol/L,10μmol/L)后,使TNF-αmRNA水平的表达分别下降15%和66%,IL-1βm RNA水平的表达分别下降了41%和71%。1100mg/L苯丁抑制剂使TNF-α和IL-1βmRNA水平表达分别降低了86%和79%。结论:RA滑膜细胞中LTB4可诱导TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达,并有助于定量测定mRNA表达水平。
- 陈占昆吕厚山
- 关键词：白三烯B4肿瘤坏死因子Α白细胞介素1类风湿
- NOK通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路(英文)被引量：8
- 2008年
- NOK能激活包含JAK-STAT信号通路在内的多种促细胞有丝分裂信号通路.研究发现,在人胚肾细胞(HEK293T)中,NOK与STAT3具有直接的相互作用.进一步的实验表明,NOK能同STAT3蛋白除螺旋结构域及C端结构域外的其他4个结构域发生相互作用,而NOK的胞内区则介导了NOK同STAT3的相互作用.同时,免疫共沉淀实验显示,NOK能与JAK2发生相互作用.重要的是,共同表达NOK与JAK2蛋白对STAT3信号通路能产生一种非常显著的协同激活作用,但当共同表达NOK和JAK2的激酶活性缺失突变体时,并不产生这种协同激活效应.综上,实验结果显示,NOK可能同STAT3和JAK2形成一个复合物,通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路.
- 李颖华戎煜常智杰刘力
- 关键词：JAK2STAT3免疫共沉淀
- 类风湿关节炎滑膜中促凋亡基因PDCD5的表达被引量：5
- 2008年
- 目的探讨类风湿关节炎（RA）发病机制中促凋亡基因PDCD5的表达与作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（PCR）和Westem blot方法来检测RA滑膜组织中PDCD5在mRNA和蛋白水平的表达，免疫组织化学检测PDCD5在滑膜内的表达特征，用骨关节炎（OA）患者滑膜标本作对照。结果RA滑膜组织中PDCD5 mRNA的表达为1．3±0．9，与OA滑膜组织（4．3±2．7）相比低了约4倍（P〈0．05），二者之间的差异有统计学意义。Western blot检测结果表明与OA滑膜组织相比较，RA滑膜组织中PD—CD5蛋白水平的表达较低。免疫组织化学染色显示在RA滑膜组织与OA滑膜组织之间PDCD5蛋白有不同的表达特征，RA滑膜组织阳性染色强度明显弱于OA滑膜组织，其增生滑膜表现为分散的PDCD5阳性染色．主要集中在衬下层而不是衬里层，衬下层主要分布为成纤维样滑膜细胞，而在OA滑膜中PDCD5阳性染色主要集中在衬里层。衬下层PDCD5表达的细胞较少。结论在RA滑膜细胞凋亡过程中PDCD5表现为下调，至少部分地减少了RA滑膜组织凋亡。
- 陈占昆吕厚山王宁
- 关键词：关节炎类风湿滑膜PDCD5
- GFR/DDR2嵌和受体的构建和稳定表达的鉴定
- 2004年
- 目的 :将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体 2 (DDR2 )的胞内区融合 ,构建一嵌和DDR2受体 ,避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路 ,为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础 .方法 :采用PCR扩增和限制性酶切的方式 ,将表皮生长因子受体 (EGFR)的胞外区与DDR2的跨膜及胞内区进行融合并稳定转染EGFR低表达的 2 93细胞 ,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪检测嵌和受体在膜表面的表达状况 .结果 :成功构建了EGFR/DDR2嵌和表达载体 ;筛选到稳定表达此嵌和受体的 2 93细胞株 .结论 :融合并稳定表达了EGFR/DDR2嵌和受体 .
- 苏金于江天王吉村史曼朱玲张健刘新平药立波
- 关键词：金属蛋白酶类基因表达
- 程序化细胞死亡因子5过表达促进雷公藤内醇酯诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨程序化细胞死亡因子5(progrmmed cell death5,PDCD5)过表达对雷公藤内醇酯(triptolide)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatiod arthritis fibroblast-likes synoviocytes,RAFLS)凋亡的作用。方法:体外分离培养RAFLS进行腺病毒Ad-PDCD5(含有PDCD5基因的腺病毒载体)的转染,分别用免疫印迹法和流式细胞术检测Ad-PDCD5转染后的RAFLS中PDCD5蛋白表达及经雷公藤内醇酯处理后的PDCD5蛋白过表达的RAFLS的凋亡率。结果:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为50、100、200和300的Ad-PDCD5感染RAFLS36h后,PDCD5蛋白表达水平呈现剂量依赖性增加。未经雷公藤内醇酯处理的非感染组、Ad-null组(不含目的基因的空载体)和Ad-PDCD5组RAFLS的凋亡之间差异无统计学意义,经雷公藤内醇酯处理后,其RAFLS的凋亡率分别为(22.51±3.87),(28.77±12.97)和(48.87±12.69)。表明此腺病毒体系能够有效地使PDCD5蛋白过表达,在RAFLS中,单独使用雷公藤内醇酯或者单独转染PDCD5都不能明显地诱导细胞凋亡,但过表达PDCD5再进行雷公藤内醇酯处理可以诱导细胞凋亡。结论:腺病毒Ad-PDCD5转染使PDCD5过表达,从而能够促进雷公藤内醇酯诱导的RAFLS凋亡,为类风湿关节炎的临床治疗提供了一个可能的干预靶点。
- 陈占昆王宁吕厚山
- 关键词：PDCD5类风湿滑膜
- 人p65和IκBα基因真核表达载体的构建及在永生化滑膜细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建人p65和IκBα基因的真核表达载体并检测其在人永生化滑膜细胞MH7a中的表达.方法应用RT-PCR方法从体外培养的HEK293细胞mRNA中扩增出p65和IκBα基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/His(-)A,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染MH7a细胞,WesternBlot检测p65和IκBα的表达.结果测序证实PCR扩增得到的p65和IκBα基因编码区序列正确;脂质体法转染MH7a细胞后检测到预期目的蛋白的表达.结论成功构建了p65和IκBα的真核表达载体并使其在人永生化滑膜细胞中表达.
- 程欣王立峰张健刘娜苏金于江天刘新平
- 关键词：P65IΚBΑ逆转录聚合酶链反应
- 盘状结构域受体2与EGFP融合载体的构建及细胞中的活性分析
- 2006年
- 目的:寻找使盘状结构域受体2(DDR2)在细胞内的表达情况易于检测并能动态追踪其蛋白表达分布的途径方法:采用PCR技术扩增获得DDR2编码区无终止码序列通过限制性酶切将DDR2片段亚克隆入pEGFP-N3载体中,转染293T细胞后通过倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,并用免疫印迹技术检测融合载体的表达及胶原刺激后活化状况.结果:成功构建了DDR2/EGFP融合表达载体,进一步的分析也证明此融合表达载体能在细胞中正确表达并可以被配体所激活.结论:DDR2/EGFP的成功构建及可进一步检测磷酸化,为深入研究DDR2的功能奠定了基础.
- 于江天苏金任婷婷刘新平
- 关键词：盘状结构域受体2EGFP磷酰化
- DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达.方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞;RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达.结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中.结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白.
- 张燕王保莉苏金车红磊于江天刘新平
- 关键词：盘状结构域受体2FC
- 类风湿关节炎中白三烯B4诱导TNF-α和IL-1β的表达被引量：3
- 2006年
- 为了探讨类风湿关节炎的发病过程中白三烯B4(leukotriene,LTB4)对TNFα和IL1β表达的影响.加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下,加入苯丁抑制素(bestatin,LTA4水解酶抑制剂)和MK886(5脂氧合酶激动蛋白抑制剂)后,采用实时PCR和酶联免疫吸附分析法来检测原代培养的类风湿滑膜细胞及培养上清液中TNFα和IL1β在mRNA及蛋白水平的表达.外源性的LTB410-8molL使TNFα和IL1βmRNA水平表达分别增加了14倍和1倍,蛋白水平分别增加了3倍.加入LIT刺激内源性的LTB4增加了14倍后,使TNFα和IL1βmRNA水平表达分别增加了145倍和12倍,蛋白水平分别增加了3倍.在LIT存在的情况下,MK88610μmolL使LTB4合成降低了62%(P<0.0001),使TNFα和IL1βmRNA水平表达分别降低了66%(P<0.05)和71%(P<0.001),它们的蛋白水平分别降低了75%和70%(P<0.01).100μgml苯丁抑制素使LTB4合成降低了78%(P<0.0001),使TNFα和IL1βmRNA水平表达分别降低了86%(P<0.001)和79%(P<0.01),它们的蛋白水平分别降低了84%和76%(P<0.05).在类风湿关节炎中,LTB4诱导TNFα和IL1β的表达.这一结果为类风湿关节炎发病机制进一步探讨提供了一条新思路.
- 陈占昆吕厚山林剑浩许少华蒋东芳
- 关键词：白三烯B4肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-1Β类风湿关节炎
- 骨关节炎的诊治与研究进展被引量：146
- 2004年
- 骨关节炎(osteoarthrisis,OA)是影响人类健康最常见的关节疾患之一,人群发病率约为2％-6％,是导致50岁以上人群功能残疾、造成经济损失和影响社会发展的主要疾病之一。骨关节炎具有临床、病理和影像学多重定义;在其疾病发生与发展过程中,在全身因素和局部因素综合作用下,关节软骨发生生化、结构和代谢改变,最终出现关节软骨软化、破溃和局部剥脱以及关节边缘骨与软骨赘生物形成等病理改变,并引起相应临床症状;骨关节炎相关的滑膜炎症是软骨基质降解产物引起的继发性改变,滑膜炎性病变在骨关节炎的发生中不是旁观者,而是关节结构破坏的参与者,促进了骨关节炎的病程进展。 骨关节炎的治疗目标是控制疼痛、改善关节功能和生活质量,尽可能避免治疗的毒副作用。目前,骨关节炎缺乏治愈的手段。但是,针对患者设计的个体化治疗方案可以减轻疼痛、保持或改善关节活动度,减缓关节功能的受损。应重视对患者的教育和康复治疗,特异性COX-Ⅱ抑制剂减少了胃肠道副反应事件的发生。当内科保守治疗无效,而日常活动进行性受限时,应该考虑关节镜清理、截骨术和关节置换手术等外科治疗。软骨移植、氨基葡萄糖、针对炎性因子或细胞内与炎症相关的信号分子的生物治疗手段为骨关节炎的治疗开辟了新的研究方向。
- 吕厚山孙铁铮刘忠厚
- 关键词：骨关节炎病因年龄性别
