国家自然科学基金(30271660)
- 作品数：6 被引量：22H指数：4
- 相关作者：顾春红陈芳源韩洁英欧阳仁荣王海嵘更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院上海第二医科大学附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 凋亡相关基因PNAS-2 siRNA质粒表达载体的构建、鉴定及转染后筛选方法的选择被引量：5
- 2006年
- 硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis—related protein）表达显著降低。Busch等认为PANS-2基因与细胞增殖有关。我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者白血病细胞及NB4细胞PNAS-2基因表达特异性下调，且呈时间依赖性而K562和U937细胞则无此较应。为了进一步研究封闭该基因后对细胞凋亡的影响，我们扩增其5’端未知序列，构建了PNAS-2 siRNA质粒表达载体并转染U937细胞，筛选、纯化转染细胞后检测U937细胞凋亡的变化以初步了解PNAS-2的作用。
- 王海嵘顾春红钟济华王婷韩洁英陈芳源欧阳仁荣
- 关键词：细胞凋亡相关基因转染细胞U937细胞凋亡NB4细胞
- 凋亡相关基因PNAS-2参与硫化砷抗APL细胞的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨凋亡相关基因PNAS2在硫化砷抗急性早幼粒细胞白血病(APL)中的作用。方法应用基因表达谱芯片检测NB4细胞在10mg/L硫化砷作用前后的基因表达改变,RT-PCR方法验证基因表达谱芯片结果和检测白血病原代细胞中PNAS2基因的表达情况。结果10mg/L硫化砷作用后的NB4细胞中,PNAS2基因表达特异性下调,且呈时间依赖性,类似变化在K562和U937细胞中未见;10mg/L硫化砷作用后2例M3患者的原代细胞PNAS2基因表达明显下调,1例M4患者原代细胞该基因表达未见明显改变。结论PNAS2基因可能是硫化砷抗APL的靶基因之一。
- 朱坚轶顾春红陈芳源滕晔韩洁英欧阳仁荣
- 关键词：凋亡相关基因L细胞基因表达谱芯片基因表达改变
- 流式细胞术结合G418筛选重组质粒稳定转染细胞被引量：11
- 2006年
- 目的:探索优化重组质粒转染细胞后的筛选方法,以得到高纯度U937转染细胞。方法:选择带Neor及GFP基因的质粒pRNATU6.1/Neo。根据流式细胞仪可分选GFP阳性细胞这一特点,在质粒转染细胞后比较单用G418筛选与合并使用流式细胞仪分选后的筛选效果。结果:单用G418筛选时最高筛选效率为72.0%;合并使用G418及流式细胞仪分选后的筛选效率均在90.0%以上。结论:合并使用G418及流式细胞仪分选是一种高效的筛选方法。
- 王海嵘顾春红钟济华王婷韩洁英陈芳源欧阳仁荣
- 关键词：质粒GFPG418流式细胞术
- 抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变被引量：4
- 2007年
- 目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNAT U6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamHⅠ及HindⅢ黏性末端的shRNA插入片段,转化感受态细菌,并行测序鉴定。将阳性shRNA质粒载体进行细胞转染,合并使用G418及流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,应用半定量PCR鉴定shRNA封闭效果;用Annexin V-APC/7-AAD标记后,使用FCM及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果:测序鉴定证实,PNAS-2特异的shRNA质粒表达载体构建正确;合并使用G418及FCM分选出GFP阳性细胞后,半定量PCR鉴定示shRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组对PNAS-2的抑制率分别为78.1%、75.4%及51.4%。FCM显示shRNA对照组的细胞凋亡率为(3.52±1.25)%;而shRNAⅠ组为(9.23±1.88)%(P<0.01);shRNAⅡ(8.85±1.80)%(P<0.05);shRNAⅢ组为(7.19±2.09)%(P>0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示,shRNA对照组细胞凋亡率为7.3%;shRNAⅠ组为14.7%;shRNAⅡ为13.8%;shRNAⅢ为10.3%。结论:测序结果表明,本研究成功构建了PNAS-2的shRNA质粒表达载体。半定量PCR显示shRNA抑制PNAS-2表达效果佳;抑制PNAS-2后可促使细胞凋亡,提示该基因是抗细胞凋亡基因。
- 王海嵘顾春红钟璐钟济华韩洁英陈芳源欧阳仁荣
- 关键词：PNAS-2细胞凋亡短发夹RNA
- 应用cDNA末端快速扩增法扩增PNAS-2基因5’端未知序列的实验研究被引量：5
- 2006年
- 硫化砷是中药雄黄的主要成分，其在白血病的治疗中取得了令人瞩目的疗效。我们应用基因表达谱芯片对硫化砷作用前后的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的基因表达进行检测，结果发现凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis-related protein，GeneBank ID：AF229832）在硫化砷作用后表达显著降低。有文献报道PNAS-2是一条与NB4细胞凋亡密切相关的基因，也有学者认为与细胞增殖有关。
- 王海嵘韩洁英钟济华顾春红王婷朱坚轶陈芳源欧阳仁荣
- 关键词：基因表达谱芯片NB4细胞凋亡白血病细胞株急性早幼粒细胞PROTEIN凋亡相关基因
- 硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RTPCR技术,检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示,硫化砷作用于NB4细胞后,PNAS-2基因表达下调;RTPCR结果发现,NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调,并呈时间依赖性;APL原代细胞经硫化砷作用后,PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达,推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。
- 黄洪晖朱坚轶顾春红王海嵘滕晔陈芳源
- 关键词：急性早幼粒白血病细胞基因表达谱芯片NB4细胞株砷诱导
