河北省自然科学基金(C2007000819)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：张祥宏邢凌霄王俊灵严霞邢欣更多>>
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- 杂色曲霉素诱导胃黏膜上皮细胞细胞周期G_2期阻滞被引量：3
- 2009年
- 探讨杂色曲霉素(sterigmatocystin,ST)对体外培养的永生化胃黏膜上皮细胞GES-1细胞周期的影响及细胞周期蛋白D1、真核起始因子eIF4E和其结合蛋白4E-BP1在ST诱导细胞周期变化中的可能作用。采用细胞培养、噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞定量检测(FCM)、吉姆萨(Giemsa)染色、蛋白质免疫印迹(Western印迹)以及反转录聚合酶联反应(RT-PCR)等方法,研究不同浓度(100、500、1000、2000μg/L)ST处理24h后,GES-1细胞的增殖、细胞周期分布及eIF4E、4E-BP1及细胞周期蛋白D1表达的变化情况。MTT法检测结果显示,ST可明显抑制GES-1细胞的增殖,ST100、500、1000、2000μg/L处理组的增殖抑制率分别为12.76%、16.35%、21.65%和32.06%。FCM检测结果显示,给予500、1000和2000μg/LST处理24h可剂量依赖性提高G2/M期细胞比例。吉姆萨染色结果表明,在0～2000μg/L的剂量范围内随ST剂量增高,细胞分裂指数逐渐降低,提示ST可诱导胃黏膜上皮细胞周期发生G2期阻滞。Western印迹分析结果显示,在0～2000μg/L浓度范围内,ST可剂量依赖性地上调eIF4E和4E-BP1在蛋白质水平上的表达(eIF4E:r=0.844,P<0.01;4E-BP1:r=0.930,P<0.01),而降低eIF4E和4E-BP1的磷酸化水平(peIF4E:r=-0.663,P<0.01;p4E-BP1:r=-0.656,P<0.01);同时使细胞周期蛋白D1的表达下降(r=-0.559,P<0.05)。RT-PCR检测在mRNA水平进一步证实了ST对eIF4E和4E-BP1表达的影响。研究结果表明,ST可抑制体外培养永生化胃黏膜上皮细胞增殖,诱导细胞发生G2期阻滞,4E-BP1表达升高,而eIF4E和4E-BP1的磷酸化水平降低及细胞周期蛋白D1表达下降可能是ST抑制胃黏膜上皮细胞增殖,诱导周期分布变化的重要机制。
- 邢欣邢凌霄李月红王娟姚志刚王俊灵刘亚玲张祥宏
- 关键词：杂色曲霉素EIF4E细胞周期蛋白D1
- DON对体外培养胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养的胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823细胞经100、500、1000μg/LDON处理72h,以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况及其量效关系,流式细胞术、免疫细胞化学和Westernblot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果FCM定量检测结果表明,DON各处理组细胞凋亡率均高于对照组,且均随DON浓度升高凋亡率相应增加,具有明显量效关系(SGC-7901:r=0.660,P<0.05,n=4;BGC-823:r=0.750,P<0.01,n=4)。FCM、免疫细胞化学和Westernblot结果显示,DON处理后SGC-7901、BGC-823细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论DON可剂量依赖地诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达有关。
- 刘静邢欣邢凌霄周炳娟王俊灵严霞张祥宏
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇SGC-7901细胞BGC-823细胞胃癌
- TAP1真核表达载体的构建及其对GES-1细胞HLA-I分子表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:构建抗原加工相关转运蛋白TAP1真核表达载体,并观察其对HLA-I分子表达的影响。方法:采用基因重组技术,构建含人TAP1基因全长的pcDNA3.1/V5-His-TAP1真核表达质粒,并采用细胞转染、RT-PCR、Western blot以及流式细胞术(FCM)观察TAP1转染对胃黏膜上皮(GES-1)细胞HLA-I分子表达的影响。结果:以人外周血单个核细胞总RNA为模板,经RT-PCR反应获得人全长TAP1基因,以pcDNA3.1/V5-HisB为载体,经酶切、连接、转化等基因重组技术,构建了含人TAP1基因全长的pcDNA3.1/V5-His-TAP1质粒,并经测序结果证实。以GES-1作为靶细胞进行转染,经RT-PCR和Westernblot证实,转染后TAP1基因表达明显增加,细胞适于所构建的TAP1质粒的转染。进一步检测了TAP1转染对GES-1细胞HLA-I类分子表达的影响。结果发现,TAP1转染组HLA-A、HLA-B、HLA-C(重链)在mR-NA水平表达明显增加,β2m(轻链)mRNA水平无明显影响。FCM及Western blot检测结果表明,TAP1转染可以上调HLA-I蛋白的表达。结论:成功构建了TAP1真核表达质粒,细胞转染后TAP1表达的增加,可引起细胞表面HLA-I分子表达的相应增加,从而证实了TAP1在HLA-I抗原表达以及抗原递呈途径中的重要作用。
- 邢凌霄邢欣万晓伟薛丽英张祥宏严霞王俊灵
- 关键词：TAP1GES-1细胞
- eIF4E在食管鳞状上皮癌变过程中的表达及意义被引量：4
- 2009年
- 目的探讨eIF4E在食管鳞状上皮癌变过程中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法,检测食管正常鳞状上皮(15例)、食管鳞状上皮内瘤变(85例)和食管鳞状细胞癌(60例)中eIF4E在蛋白水平的表达情况。结果eIF4E在正常食管鳞状上皮组织,食管鳞状上皮内瘤变组织和鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为26.7%、44.7%和63.3%,eIF4E在食管鳞状细胞癌中表达明显高于食管正常鳞状上皮组织及食管鳞状上皮内瘤变组织(P<0.05);高级别食管鳞状上皮内瘤变组织中eIF4E的阳性表达率显著高于正常食管鳞状上皮组织、低级别食管鳞状上皮内瘤变组织(P<0.05);低分化鳞癌组织中eIF4E的阳性表达率明显高于高分化鳞癌组织(P<0.05)。eIF4E的表达与临床病理特征不相关(P>0.05)。结论在食管鳞状上皮癌变过程中,eIF4E的表达呈增高趋势。eIF4E在食管鳞癌中的表达随肿瘤分化程度降低而增高,提示eIF4E在食管鳞状上皮癌变和进展过程可能发挥一定的作用。
- 丁涛张祥宏李学民严霞邢凌霄王俊灵张杰英薛丽英赵晨燕崔晋峰
- 关键词：癌变免疫组织化学
- p-JNK JNK和PPARγ在食管癌变过程中的表达及其意义被引量：11
- 2008年
- 目的:探讨p-JNK/JNK和PPARγ蛋白在食管癌变过程中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学方法,研究食管正常鳞状上皮(15例)、食管鳞状上皮内瘤变(85例)和食管鳞状细胞癌(60例)组织中p-JNK/JNK和PPARγ蛋白的表达情况。结果:JNK在食管正常鳞状上皮、食管鳞状上皮内瘤变和食管鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为20.0%、37.6%和55.0%,而p-JNK的阳性表达率分别为33.3%、55.3%和73.3%,JNK和p-JNK在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率均明显高于食管正常鳞状上皮和食管鳞状上皮内瘤变(P<0.05)。高级别食管鳞状上皮内瘤变中JNK、p-JNK的阳性表达率显著高于食管正常鳞状上皮和低级别食管鳞状上皮内瘤变(P<0.05)。PPARγ在食管正常鳞状上皮、食管鳞状上皮内瘤变和食管鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%、45.9%和45.0%,食管鳞状上皮内瘤变和食管鳞状细胞癌中PPARγ的阳性表达率明显低于食管正常鳞状上皮(P<0.05)。食管鳞状细胞癌中JNK、p-JNK和PPARγ的表达与肿瘤分化程度相关,JNK、p-JNK和PPARγ的表达均随肿瘤病理分级的增高而降低(P<0.05)。JNK、p-JNK和PPARγ的表达与临床病理特征不相关(P>0.05)。结论:在食管癌变过程中,JNK、p-JNK的表达呈增高趋势而PPARγ的表达呈下降的趋势。但食管鳞状细胞癌中JNK/p-JNK和PPARγ的表达均随肿瘤分化程度降低而降低。提示JNK、p-JNK和PPARγ在食管鳞状上皮癌变和进展过程中发挥不同作用,其机制比较复杂。
- 丁涛张祥宏李学民严霞邢凌霄王俊灵张杰英薛丽英赵晨燕崔晋峰
- 关键词：JNKP-JNKPPARΓ食管癌变
- 杂色曲霉素对小鼠胸腺和脾脏转录因子Foxp3^+调节性T淋巴细胞的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨杂色曲霉素(ST)对机体免疫调节功能的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组、ST3,30,300和3000μg·kg-1组。小鼠ip给药24h后,处死取胸腺和脾脏,采用流式细胞术测定胸腺和脾脏细胞中CD4+和CD8+T淋巴细胞及转录因子Foxp3阳性(Foxp3+)调节性T淋巴细胞的百分率,免疫组织化学法检测胸腺和脾脏组织中Foxp3+调节性T淋巴细胞数量,Western蛋白印迹法和RT-PCR分别测定胸腺和脾脏组织中Foxp3蛋白和mRNA的表达。结果溶剂对照组与正常对照组比较,小鼠胸腺和脾脏CD4+,CD8+和Foxp3+T淋巴细胞百分率均无明显差异。与溶剂对照组比较,ST3μg·kg-1组胸腺CD8+T淋巴细胞百分率降低,ST3和30μg·kg-1组脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率明显升高,ST300和3000μg·kg-1组胸腺和脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率无明显变化。在ST3～3000μg·kg-1内,胸腺和脾脏细胞中Foxp3+调节性T淋巴细胞百分率、胸腺和脾脏组织内Foxp3+调节性T淋巴细胞数量、Foxp3蛋白和mRNA表达均随ST浓度的增高而增加。结论ST可诱导小鼠淋巴器官内Foxp3+调节性T淋巴细胞数量增加,从而影响机体免疫耐受功能。
- 刘亚玲邢欣邢凌霄姚志刚王娟严霞王俊灵张祥宏
- 关键词：杂色曲霉素胸腺脾脏
