国家自然科学基金(30271611)
- 作品数：17 被引量：192H指数：8
- 相关作者：陈晓春曾育琦朱元贵沈杰黄天文更多>>
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- A^(β25-35)注射诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化被引量：8
- 2004年
- 目的 观察大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 5后 ,神经元ser199/ser2 0 2、ser396、thr2 31等位点tau蛋白磷酸化的水平以及糖原合成激酶 3β(GSK 3β)的活性变化 ,探讨Aβ2 5 3 5与tau蛋白异常磷酸化的关系及机制。方法 应用脑立体定向技术给成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ2 5 3 55nmol,术后 14d ,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变 ,免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术观察大鼠海马tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的表达水平 ,免疫蛋白印迹技术检测海马GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平变化。 结果 凝聚态Aβ2 5 3 5组神经元纤维走行紊乱、增粗、肿胀 ,密集成宽带状 ,轴突深染。海马神经元tau [pS3 96]、tau [pSpS199/ 2 0 2 ]、tau [pT2 3 1]的阳性表达数 (分别为 38 2± 5 9,10 7 6± 8 4 ,78 4± 3 7)明显高于正常组和生理盐水组 (P <0 0 1) ,GSK 3β和磷酸化GSK 3β的水平亦明显高于正常组和生理盐水组。 结论 海马背侧注射Aβ2 5 3 5可通过激活GSK 3β诱导tau蛋白发生异常磷酸化。
- 彭小松陈晓春黄俊山朱元贵李永坤曾育琦
- 关键词：AΒ25-35注射诱导海马神经元TAU蛋白磷酸化
- 人参皂甙Rb1减轻冈田酸诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化被引量：31
- 2005年
- 为研究人参皂甙Rb1(ginsenoside Rb1)对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能机制,实验随机分为正常组、溶媒对照组、OA模型组和Rb1预处理组。正常组不作任何处理;Rb1预处理组大鼠分别用5、10、20 mg/kg的Rb1预处理,每天一次,共14 d,于第13天向海马背侧注射1.5μl OA[0.483 μl,溶于10% 二甲基亚砜(dimethysulphoxide,DMSO)];OA模型组大鼠于第13天时海马背侧注射OA,溶媒对照组则注射等体积的生理盐水。各组均于第15天收取标本。通过Biescbowski’s染色、免疫组化和Western blot,分别观察大鼠海马神经元胞体和突起内神经原纤维的改变和磷酸化Tau蛋白的表达水平,同时检测蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase-2A,PP2A)活性以探讨其作用机制。结果显示:(1)OA模型组与溶媒对照组及正常组比较,海马神经元胞体和突起着色较深,染色不均匀;神经元中Thr231和Sei396位点磷酸化的Tau蛋白和总Tau含量增多;PP2A活性则明显下降(P<0.01):(2)Rb1预处理组大鼠海马神经元胞体和突起染色均匀,神经原纤维走行规则;海马神经元中Thr231和Ser396位点磷酸化的Tau蛋白和总Tau 含量较OA模型组减少,而PP2A活性明显增高(P<0.01)。以上观察结果表明,人参皂甙Rb1可以减轻OA诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化,其机制可能与提高PP2A活性有关。
- 李永坤陈晓春朱元贵彭小松曾育琦沈杰黄天文
- 关键词：人参皂甙RB1冈田酸TAU蛋白磷酸化
- SH-SY5Y细胞高表达糖原合成激酶3β对tau蛋白磷酸化和微管稳定性的影响被引量：7
- 2009年
- 目的:构建高表达糖原合成激酶3β(GSK3β)的SH-SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞)转基因细胞模型,观察GSK3β高表达对宿主细胞tau蛋白磷酸化、微管稳定性的影响。方法:构建GSK3β真核表达质粒,转染SH-SY5Y细胞,使GSK3β在SH-SY5Y细胞中得到高表达,应用蛋白免疫印迹方法,观察tau蛋白磷酸化、总tau蛋白、微管蛋白乙酰化水平的变化情况。结果:GSK3β真核表达质粒转染SH-SY5Y细胞36h后,GSK3β在SH-SY5Y细胞中的表达达到高峰,tau蛋白Ser199/202、Thr231、Thr205等位点的磷酸化水平在转染后48h达到高峰;tau蛋白总量未有明显变化。转染后60h,微管蛋白乙酰化水平明显减低。结论:高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞可使tau蛋白的磷酸化水平增高,从而降低tau蛋白结合和稳定微管蛋白的能力,导致微管蛋白乙酰化水平明显减低。
- 沈杰陈晓春林旭张静
- 关键词：TAU蛋白质类磷酸化微管蛋白
- MAPK信号通路与阿尔茨海默病中tau蛋白磷酸化的关系被引量：15
- 2006年
- 阿尔茨海默病(AD)是一类神经退行性疾病,tau蛋白过度磷酸化形成的神经原纤维缠结为其主要病理特征之一,是AD发病的重要因素。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类脯氨酸依赖的蛋白激酶,在AD病人体内参与诱导tau蛋白的过度磷酸化。MAPK的三条途径ERK、JNK、p38都参与诱导tau蛋白过度磷酸化,且与Aβ、氧化应激、炎性因子及蛋白磷酸酯酶等因素相关,由此阐述MAPK在AD进程中的重要作用,并提示MAPK可成为AD治疗中的新靶点。
- 宋锦秋陈晓春
- 关键词：促分裂原活化蛋白激酶TAU蛋白磷酸化阿尔茨海默病
- Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白的过度磷酸化被引量：1
- 2004年
- 目的 采用凝聚态 Aβ2 5- 35建立 Tau蛋白过度磷酸化的阿尔茨海默病样细胞模型。 方法 用不同浓度凝聚态 Aβ2 5- 35作用于 SH - SY5 Y细胞 2 4 ,4 8,72 h,通过四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放实验观察 Aβ2 5- 35对 SH-SY5 Y细胞存活的影响 ;选择对细胞存活影响较小的适宜浓度和作用时间处理细胞 ,以蛋白免疫印迹法研究 Tau蛋白磷酸化水平的变化。 结果 Aβ2 5- 35对细胞存活的影响随着作用时间的延长或作用浓度的增加而增强。 1 0μm ol/ L Aβ2 5- 35作用于细胞 72 h或 2 0μm ol/ L Aβ2 5- 35作用于细胞≥ 4 8h时 ,MTT代谢率均明显下降 (P<0 .0 5 )。Aβ2 5- 35作用浓度 >2 0μmol/ L作用 72 h后 ,细胞 L DH释放率明显增加 (P<0 .0 5 )。选用细胞毒性小的 1 0 ,2 0μmol/L Aβ2 5- 35作用于 SH- SY5 Y细胞 0 ,3,6 ,1 2 ,2 4 ,4 8h,蛋白免疫印迹示 Tau蛋白在 Ser396、Ser1 99/ 2 0 2位点的磷酸化水平增高 ,于 6 h达到最高峰。 结论 凝聚态 Aβ2 5- 35可诱导建立阿尔茨海默病样
- 曾育琦陈晓春朱元贵李永坤彭小松
- 关键词：淀粉样Β蛋白TAU蛋白质类磷酸化
- β淀粉样蛋白2535诱导皮质神经元tau蛋白过度磷酸化被引量：8
- 2005年
- 曾育琦陈晓春黄春朱元贵李永坤彭小松陈丽敏
- 关键词：Β淀粉样蛋白脑皮质神经元过度磷酸化TAU蛋白生化改变
- 钙蛋白酶-细胞周期依赖性蛋白激酶5通路参与β淀粉样蛋白25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化被引量：6
- 2006年
- 目的探讨凝聚态β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)对胎鼠皮质神经元中性钙蛋白酶-细胞周期依赖性蛋白激酶5(calpain-CDK5)通路的影响及其对tau蛋白的过度磷酸化和骨架稳定性的影响。方法用荧光酶标仪测定荧光强度来反映calpain活性;用Western-blot和(或)免疫细胞化学检测CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平和tau蛋白Thr205/Ser404位点磷酸化情况来体现CDK5活性;用电镜技术观察微管结构的变化来显示细胞骨架的改变情况。结果20μmol/L的凝聚态Aβ25-35作用于皮质神经元12 h后,检测反映calpain活性的荧光强度(每微克蛋白荧光强度)高达680.25±37.77,与空白对照组167.25±11.67相比,差异有统计学意义(P<0.05);对CDK5有活化作用的p25蛋白水平比空白对照组升高(2.07±0.20)倍,差异也有统计学意义(P<0.05);CDK5的作用底物tau蛋白Thr205和Ser404位点磷酸化程度也显著增加,分别比空白对照组升高(1.80±0.27)和(1.83±0.14)倍,差异均有统计学意义(P<0.05);同时出现神经元微管骨架排列紊乱。结论凝聚态Aβ25-35通过活化皮质神经元的calpain,使p35降解p25来激活CDK5,促使tau蛋白过度磷酸化,破坏了微管骨架的稳定性。
- 黄天文陈晓春张静朱元贵宋锦秋沈杰林智颖陈丽敏
- 关键词：TAU蛋白质类磷酰化
- 人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化被引量：36
- 2008年
- 探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。
- 宋锦秋陈晓春张静黄天文曾育琦沈杰陈丽敏
- 关键词：人参皂苷RB1Β淀粉样蛋白25-35TAU蛋白磷酸化
- p25/cdk5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25-35)诱导的tau蛋白过度磷酸化被引量：14
- 2006年
- 目的探讨在Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对周期依赖性蛋白激酶(cyc lin-de-pendent k inase 5,CDK 5)的激动亚基p35/p25的影响。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠皮层神经元CDK 5的两个亚基cdk5和p35/p25的蛋白水平,以及CDK 5的磷酸化底物tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平。结果凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,可使皮层神经元中p25的数量增多,以及tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,但对cdk 5亚基表达水平影响并不明显。Rb1和calpain特异性抑制剂calpeptin可减少皮层神经元p25的生成,同时人参皂苷Rb 1和CDK 5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化水平。结论p25/cdk 5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。
- 黄天文陈晓春张静朱元贵曾育琦沈杰宋锦秋陈丽敏
- 关键词：人参皂苷RBΒ淀粉样蛋白25-35TAU蛋白CDK
- 凝聚态Aβ_(25～35)可通过JNK/p38 MAPK途径诱导胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化被引量：8
- 2007年
- 目的 探讨JNK／p38MAPK在p淀粉样蛋白多肽片段25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用。方法 应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法，观察Tau蛋白磷酸化和JNK／p38丝裂原活化的蛋白激酶（JNK／p38MAPK）的表达情况。结果凝聚态Aβ25-35（20μmol／L）作用于皮层神经元12h，Tau蛋白sep396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高，同时JNK／p38MAPK的总量及其活性形式．磷酸化JNK／p38MAPK的蛋白表达水平也增加。结论 Aβ25-35可通过激活JNK／p38MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高。
- 宋锦秋陈晓春张静黄天文曾育琦沈杰陈丽敏
- 关键词：TAU蛋白免疫印迹免疫细胞化学
