上海市博士后基金(04214119)
- 作品数：2 被引量：14H指数：1
- 相关作者：孙红立曲志虎芮云峰戴尅戎王友更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院上海交通大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金上海市博士后基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白细胞介素-1受体拮抗蛋白和白细胞介素-10联合基因转染人骨关节炎软骨细胞的研究被引量：14
- 2007年
- 目的探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL- 1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性。方法构建含目的基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10,经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内目的基因的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-IRa和ML-10蛋白表达量的水平。结果酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真核表达载体。稳定转染软骨细胞后,RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10 mRNA片段。ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的ML-1Ra和ML-10表达,单个基因转染组中分别为(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;联合基因转染组为(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L。未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL-1Ra和hIL-10表达,基因转染组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论逆转录病毒载体PLXRN介导的hIL-1Ra和hIL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达,为将表达hIL-1Ra和hIL-10目的基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据。
- 芮云峰王友张晓玲孙红立曲志虎戴尅戎
- 关键词：白细胞介素-1受体白细胞介素-10基因转染骨关节炎软骨细胞
- 人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞,研究其相关特性。方法利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定。实验分为3组:未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达。结果酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3×104CFU/mL。原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒。RT-PCR结果显示在C组出现311bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达。ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达。结论构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据。
- 芮云峰王友张晓玲孙红立曲志虎戴尅戎
- 关键词：逆转录病毒载体骨关节炎软骨细胞基因治疗
