国家自然科学基金(30170300)
- 作品数：10 被引量：70H指数：5
- 相关作者：刘勇张蓬勃李敏杰吕海侠陈新林更多>>
- 相关机构：西安交通大学西安交通大学医学院第二附属医院西安市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人NT-3重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞系的构建及鉴定被引量：1
- 2002年
- 构建并鉴定携带人NT - 3基因的逆转录病毒载体以及稳定的包装细胞系。方法 :用DNA重组技术将人NT - 3定向克隆入逆转录病毒载体 pLXSN ,并用限制性内切酶进行酶切鉴定 ;磷酸钙转染方法将重组的逆转录病毒转染入包装细胞系PA317,G4 18筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果 :构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ切开 ,电泳分离显示两条阳性条带 ,分别出现于 0 .8kb和 5 .9kb处 ;重组载体转染包装细胞 ,经G4 18筛选 ,可形成抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 4× 10 5cfu/ml,提示构建携带人NT - 3基因的逆转录病毒载体以及稳定的包装细胞系成功。结论 :构建携带人NT - 3基因的逆转录病毒载体可行 ,并且可望成为一种很好的对神经系统疾病进行基因治疗的方法。
- 吕海侠刘勇李敏杰王全颖杨广笑
- 关键词：逆转录病毒载体基因重组DNA重组技术神经系统疾病
- 大鼠脑发育过程中神经干细胞分布的免疫组织化学研究被引量：14
- 2002年
- 目的 观察神经干细胞在大鼠不同发育时期不同脑区的分布。方法 应用免疫组织化学ABC法 ,对不同发育时期大鼠脑的嗅球、室管膜、室管膜下区、顶叶皮质、纹状体、海马齿状回进行nestin免疫组织化学染色及光镜观察。结果 nestin从胚胎 1 8d至出生后 7d在脑内表达较强 ,阳性细胞在所观察的部位较多 ,出生后 1月nestin阳性细胞数急剧下降 ,成年鼠和老年鼠仅在嗅球、室管膜、部分室管膜下区及海马齿状回分布有nestin阳性细胞。结论 嗅球、室管膜、室管膜下区及海马齿状回终生具有神经干细胞存在 。
- 肖新莉刘勇徐曦丁海燕
- 关键词：发育过程免疫组织化学神经巢蛋白
- 波形蛋白阳性细胞在人胚脑中的分布
- 2002年
- 吕海侠刘勇李敏杰肖新莉丁海燕
- 激光显微切割联合功能分类表达谱芯片技术在脑缺血研究中的应用被引量：4
- 2005年
- 目的探讨激光捕获显微切割分离大鼠脑微血管和神经元联合功能分类表达谱cDNA芯片技术在脑缺血研究的应用.方法激光捕获显微切割获取脑切片微血管和神经元,微量RNA提取试剂盒提取总RNA,线性扩增mRNA,紫外分光光度计定量所得aRNA(antisense RNA)扩增效率,基因特异性引物进行cDNA探针合成,进行芯片杂交反应.结果微血管和神经元各自捕获的总点数大约为8000～10000,T7线性扩增所得aRNA的量约为500～1000ng,探针合成效率高,杂交反应格局清晰良好.结论激光捕获显微切割,结合T7 RNA线性扩增及基因特异性引物线性扩增技术,可成功的应用于功能分类表达谱cDNA芯片的分析研究.
- 田英芳魏朝明张蓬勃邱芬陈新林刘勇
- 关键词：激光捕获显微切割微血管神经元芯片
- 人脑不同发育期vimentin阳性细胞的分布被引量：7
- 2002年
- 目的 研究不同发育时期人脑 vimentin阳性细胞的形态特征及其分布情况 .方法 计划生育流产或引产的胚胎(9,13及 2 8wk)大脑经多聚甲醛固定 ,石蜡包埋并连续切片 ,免疫组织化学染色 ,光镜下观察 .结果 免疫组织化学染色结果发现 vimentin阳性细胞形态多样 ,大小不一 ,多呈圆形 ,分布广泛 ,特别是嗅球、海马、纹状体以及脑室下区均可见到 vim entin阳性的细胞 ,并且随发育时期及部位不同 ,细胞形态及突起情况各异 .结论 vimentin阳性细胞形态及分布不同可能与发育阶段有关 .
- 吕海侠刘勇李敏杰肖新莉丁海燕凌凤东
- 关键词：波形蛋白胎儿
- 激光捕获显微切割技术及其在脑研究中的应用被引量：4
- 2005年
- 激光捕获显微切割(lasercapturemicrodissection,LCM),是一项利用激光在显微镜下从组织切片中分离单一类型细胞群的技术。以LCM技术为基础,结合蛋白质、核酸等分子生物学研究方法进行基因诊断、表达谱或蛋白质组学的研究,从根本上解决了细胞异质性问题。本文就LCM技术在脑科学中的应用及所涉及到的脑组织固定、切片、染色、捕获等关键环节做一综述。
- 田英芳刘勇张蓬勃
- 关键词：激光捕获显微切割技术LCM组织切片解剖学
- 灯盏花素改善大鼠局灶性脑缺血后空间学习记忆功能的研究(英文)被引量：5
- 2009年
- 目的:研究灯盏花素对大鼠局灶性脑缺血后空间学习记忆能力的影响。方法:线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞模型,腹腔注射灯盏花素(20、40 mg/kg),1次/天,持续2周,缺血对照组注射同体积10%葡萄糖注射液。其后,进行5天的Morris水迷宫实验检测动物的空间学习记忆能力。结果:与假手术组比较,缺血对照组动物在定向航行实验和空间探索实验中均显现了较为严重的空间学习记忆能力障碍。在定向航行实验中,灯盏花素组动物的平均潜伏期较缺血对照组明显缩短(低剂量组,P<0.01;高剂量组,P<0.05),在空间探索实验中,与假手术组(P<0.01)和灯盏花素组动物(P<0.01)比较,缺血对照组动物在非原平台象限停留时间明显延长,穿越原平台位置的次数明显减少。Nissl组织化学染色和ChAT免疫组织化学染色显示,灯盏花素组动物缺血侧皮质神经元数量和ChAT免疫阳性神经元数量较缺血对照组动物明显增多(P<0.01)。在海马CA区的锥体细胞层,神经元数量和ChAT免疫阳性神经元数量在假手术组、缺血对照组和灯盏花素组之间无明显差异。结论:研究结果表明,灯盏花素可以改善大鼠局灶性脑缺血后空间学习记忆能力障碍,保护新皮质内的神经元/胆碱能神经元可能是其保护作用的机制之一。
- 刘建新刘勇陈新林赵建军宋土生钱亦华
- 关键词：灯盏花素学习记忆脑缺血乙酰胆碱转移酶
- 对大鼠局灶性脑缺血后神经功能障碍判断方法的改进被引量：6
- 2003年
- 目的 :对大鼠大脑中动脉阻塞术后苏醒时间与脑缺血病理损伤的关系进行研究 ,寻找更为准确地判定大脑中动脉阻塞后脑缺血损伤发生与否的方法 .方法 :线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型 ,记录大鼠苏醒时间 ,缺血后 2h进行神经功能缺失的评分 ,2 4h后行TTC染色鉴定脑梗死与否 ,选择具有脑梗死的大鼠进行分析 .结果 :与对照组相比 ,脑梗死大鼠的苏醒时间明显延长 (min ,1 0 8.7± 1 8.6vs 75 .3± 2 0 .7,P <0 .0 5 ) ;神经功能缺失判断脑缺血损伤的灵敏度为6 2 .5 % ,结合苏醒时间后判断脑缺血损伤的灵敏度为 87.5 % .结论
- 李捷张蓬勃刘勇
- 关键词：局灶性脑缺血苏醒时间神经功能障碍
- 局灶性脑缺血后室管膜 /室下区细胞迁移到梗塞区周围并分化为神经元和星形胶质细胞(英文)被引量：25
- 2005年
- 目的研究局灶性脑缺血后室管膜/室下区细胞的迁移分化,揭示梗塞区周围新生细胞的来源.方法大脑中动脉阻塞前,将10μl 0.2%的荧光染料DiI注射于体质量250～350 g的雄性SD大鼠侧脑室以预标记室管膜/室下区细胞.脑缺血后,采用累积式的BrdU标记方法标记新生细胞并通过双重免疫荧光染色确定细胞分化.标记的细胞通过激光共聚焦显微镜观察.结果在非缺血对照大鼠,DiI标记细胞定居于室管膜/室下区.局灶性脑缺血后,DiI标记细胞出现于胼胝体,邻近的纹状体和皮质.此外,缺血14 d后,梗塞区周围纹状体和皮质内可见一些DiI/BrdU/GFAP或DiI/BrdU/NeuN三重标记阳性细胞.结论局灶性脑缺血后,室管膜/室下区细胞迁移到梗塞区周围并分化成神经元和星形胶质细胞,这一发现对于理解成体神经干细胞的起源和开发促进脑损伤后内源性神经发生的新措施具有重要意义.
- 张蓬勃刘勇李捷康前雁田英芳陈新林赵建军石秦东宋土生钱亦华
- 关键词：室管膜细胞神经发生局灶性脑缺血
- 早期人胚神经干细胞分布及分离培养被引量：5
- 2003年
- 目的 研究发育早期人胚脑神经干细胞的形态特征及其分布情况 ,并观察其体外生长分化特性。方法 计划生育流产的 6～ 12周胚胎大脑组织切片用vimentin抗体进行免疫组织化学染色 ,光镜观察。机械分离皮质细胞 ,用无血清培养基和含血清培养基进行悬浮和贴壁培养 ,分别用MAP2 、GFAP及GalC抗体进行免疫细胞化学染色 ,鉴定干细胞和神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结果 发育早期大脑Vimentin阳性细胞分布广泛 ,细胞形态单一 ,多呈圆球形 ,体积较小。体外培养的大脑皮质细胞在培养的第 5～ 7天时 ,形成较多克隆 ,可多次传代 ;贴壁培养时细胞发生分化 ,分别为MAP2 、GFAP、GalC阳性的神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结论 胚胎发育早期大脑神经干细胞分布广泛 ,形态单一 ,皮质Vimentin阳性细胞数量多 ,便于分离 ,是最佳神经干细胞分离部位 ;
- 吕海侠翟伟刘勇李敏杰刘朝晖王桂贤
- 关键词：体外生长免疫细胞化学星形胶质细胞人胚胎
