国家自然科学基金(30872602)
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
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- 联合应用Y27632和TDZD-8促进大鼠DRG神经元轴突再生被引量：3
- 2011年
- 目的探讨联合应用ROCKⅡ（ Rho - associated coiled - coil - containing protein kinase Ⅱ, ROCK Ⅱ）和糖元合成酶-3β（glycogen synthase kinase，GSK-3B）抑制剂对新生大鼠背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）神经元轴突再生和延长的影响。方法（1）取新生sD（Sprague—Dawley，SD）大鼠（〈5d）2只，显微操作下取胸腰段背根节，进行原代培养。（2）健康雌性成年sD大鼠15只，随机数字表法分为：手术瘫痪组（5只）、假手术对照组（5只）和正常组（5只），瘫痪组用WD（weight—drop，WD）法制成SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型，假手术组仅做椎板切除，造模7d后取1r8。节段脊髓制作脊髓提取液。（3）将Y27632（ROCKⅡ抑制剂）、TDZD-8（GSK-3β抑制剂）及伤后7d全瘫脊髓提取液与新生大鼠DRG神经元分组培养2d。A组：DRG神经元＋PBS，B组：DRG神经元＋全瘫脊髓提取液，C组：DRG神经元＋全瘫脊髓提取液＋不同浓度的Y26732，D组：DRG神经元＋全瘫脊髓提取液＋不同浓度的TDZD-8，E组：DRG神经元＋全瘫脊髓提取液＋Y26732＋TDZD-8，观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管蛋白Bm（TubulinβⅢ）荧光表达强度。结果（1）与A组比较，B组轴突长度明显减小（P〈0．01），轴突远端TubulinβⅢ表达强度明显减弱（P〈0．01）。（2）C组中，5、10μmoL／LY27632治疗组轴突长度以及轴突远端和生长锥Tubulinl3llI表达强度比B组有所增加，但小于A组（P〈0．05）；20～50μmoL／LY27632治疗组轴突长度以及轴突远端和生长锥TubulinβⅢ表达强度较B组增加明显（P〈0．01），其中30μmoL／LY27632治疗组最明显。（3）D组中，0．5—3μmoL／LTDZD-8治疗组轴突长度比A和B组明显增加（P〈0．01），其中1μmoL／LTDZD-8治疗组轴突长度最长；而5—25μmoL／LTDZD-8治疗组轴突长度明显缩短，与B组比较，差异无统计学�
- 冯大雄黄贻泽李骏叶飞康建平
- 关键词：脊髓损伤
- 大鼠损伤脊髓提取液对新生大鼠DRNGs体外培养的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨损伤脊髓提取液对新生大鼠DRGNs(Dorsal Root Ganglion neuron,背根节神经元)轴突生长和延长的影响。方法:将正常、假手术及全瘫脊髓提取液同新生大鼠DRGsN共同培养,观察神经轴突平均长度和轴突远端微管(TubulinβIII)荧光表达。结果:全瘫组DRGNs平均轴突长度明显缩短,生长锥塌陷,轴突远端和生长锥的TubulinβIII表达明显减弱,与空白组比较有显著统计学差异;假手术组DRGNs平均轴突长度比空白组略缩短,但生长锥无塌陷,轴突远端和生长锥TubulinβIII表达强;正常组DRGNs平均轴突长度与空白组比较无差异,轴突远端TubulinβIII表达明显。结论:完全瘫痪脊髓提取液能明显抑制DRGNs轴突生长,导致生长锥塌陷;假手术脊髓提取液能轻度抑制轴突生长,但生长锥无明显塌陷;正常脊髓提取液不影响轴突生长。
- 黄贻泽李骏叶飞冯大雄
- 关键词：脊髓损伤背根节
- TDZD-8对新生大鼠背根节神经元轴突再生影响的体外实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨葡萄糖原合成酶-3β(glycogen synthase kinase3β,GSK-3β)的抑制剂TDZD-8对新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突生长和延长的影响。方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段背根节进行原代培养、提纯和鉴定。用WD法制成健康成年雌性SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液。将不同浓度TDZD-8与成年大鼠脊髓提取液和新生大鼠DRG神经元分组培养:A组,DRG神经元+磷酸缓冲液(phosphate-bufered saline,PBS);B组,DRG神经元+正常脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术脊髓提取液;D组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液;E组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液+不同浓度TDZD-8。培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(Tubulin βⅢ)荧光表达强度。结果:A组、B组和C组之间平均神经轴突长度及轴突远端Tubulin βⅢ表达强度比较,无统计学意义,D组明显减小,与A、B和C组分别比较,有统计学意义(P<0.01)。0.5～3μM TDZD-8处理组平均轴突长度及Tubulin βⅢ荧光表达强度均明显高于A、B、C组,与D组比较,更为显著,差异均具有统计学意义(P<0.01)。5～25μM TDZD-8处理组平均轴突长度与A、B、C组分别比较,明显缩短且有统计学意义(P<0.01),与D组比较无统计学差异(P>0.05);轴突远端Tubulin βⅢ表达比A、B、C、D组及0.5～3μM TDZD-8处理组明显增强,有统计学意义(P<0.01)。结论:完全瘫痪脊髓提取液明显抑制DRG神经元轴突生长,轴突回缩。低浓度TDZD-8能促进轴突生长,形成多个轴突或轴突分支,而高浓度TDZD-8明显抑制轴突生长,导致轴突回缩。
- 黄贻泽李骏康建平叶飞冯大雄
- 关键词：背根节轴突再生
- 联合应用ROCKII及GSK-3β抑制大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的体内实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的观察联合应用ROCKII和GSK-3β抑制剂对成体大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法①健康雌性SD成年大鼠80只,其中75只大鼠采用WD法制作成T10平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,并在L4平面蛛网膜下腔植入注药导管后随机分为5组,每组15只,A组为TDZD-8治疗组,B组为Y27632治疗组,C组为TDZD-8+Y27632联合治疗组,D组为PBS对照组,E组为手术对照组;F组5只正常大鼠作为空白对照组。所用试剂均在手术后1h内经导管鞘内注射。②脊髓损伤后各组在8、24h和1w三个时间点,采用TUNEL法检测脊髓细胞凋亡情况。结果在各观察时间点,A组至E组平均凋亡细胞数均高于F组,A组至C组在各观察时间点均低于D、E两组,C组在各观察时间点均低于A、B两组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Y27632和TDZD-8均可减少脊髓损伤后细胞凋亡,联合应用比单独应用的作用更明显。
- 张戈冯大雄雷飞周际
- 关键词：脊髓损伤RHOGSK-3Β细胞凋亡
- Y27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨Rho蛋白激酶Ⅱ(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinaseⅡ,ROCKⅡ)特异性抑制剂Y-27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突再生和延长的影响。方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段DRG神经元进行原代培养、提纯和鉴定。将健康雌性SD成年大鼠15只随机分为脊髓损伤组、假手术组和正常组,每组5只;用WD法制成T9平面脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液。将新生大鼠DRG神经元分为5组进行培养:A组,DRG神经元+PBS;B组,DRG神经元+正常组脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术组脊髓提取液;D组,DRG神经元+损伤脊髓提取液;E组,DRG神经元+损伤脊髓提取液+不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)Y27632。培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(TubulinβⅢ)荧光表达强度。结果:A、B和C组平均神经轴突长度及轴突远端tubulinβⅢ表达强度比较无统计学差异(P>0.05);D组明显减小,与A、B和C组分别比较有统计学差异(P<0.05)。5、10μmol/LY27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulinβⅢ表达强度比D组有所增加(P<0.05),10μmol/LY27632治疗组增加更明显,但小于A、B和C组(P<0.05)。20～50μmol/LY27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulinβⅢ表达强度三组间比较无统计学差异(P>0.05);与5～10μmol/LY27632治疗组、D组比较明显增加(P<0.05);与A、B、C组比较平均轴突长度无统计学差异(P>0.05),平均荧光密度明显增加(P<0.05)。结论:损伤脊髓提取液能明显抑制新生大鼠DRG神经元轴突生长,导致轴突回缩。加入5～10μmol/LY27632能促进轴突生长,20～50μmol/LY27632更能明显促进轴突生长。
- 黄贻泽冯大雄李骏康建平叶飞
- 关键词：脊髓损伤背根节轴突再生
- GSK-3β抑制剂对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:观察GSK-3β抑制剂对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法:健康雌性SD成年大鼠45只,采用WD法制作成T10平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,并在L4平面蛛网膜下腔植入注药导管后随机分为3组,每组15只。A组为TDZD-8治疗组;B组:PBS治疗组;C组:手术瘫痪对照组。所用试剂均在手术后1 h内经导管内注射,TDZD-8(1 mg/kgd)和PBS(60μL/d),连续注射3周。各组在损伤后2 h、4 h、8 h、24 h、7 d(每个时相点3只大鼠)用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:脊髓损伤后2 h开始出现凋亡细胞,此后,凋亡细胞逐渐增加,损伤后8 h阳性细胞达到高峰,50.3±4.3、58.7±2.2、58.9±2.8,损伤后24 h、7 d凋亡细胞数逐渐减少。不同的时间点TDZD-8治疗组阳性细胞数量均明显低于PBS治疗组和手术瘫痪对照组(P<0.05)。结论:TDZD-8能够抑制脊髓损伤后神经细胞凋亡,减少继发性脊髓损伤。
- 雷飞何雯杨函周庆忠康建平冯大雄
- 关键词：脊髓损伤GSK-3Β抑制剂细胞凋亡
- SD大鼠脊髓损伤后微环境中髓鞘相关抑制因子的表达被引量：1
- 2018年
- 目的观察SD大鼠在不同致伤势能的Allen’s模型和脊髓全切模型微环境中不同时间点的髓鞘相关抑制因子表达。方法选择125只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组25只, A组(假手术组), B组[20 g×5 cm,即致伤势能100 gcf (gram-cm force)], C组(20 g×10 cm,致伤势能200 gcf), D组(20 g×15 cm,致伤势能300 gcf)和E组(脊髓全切组)。采用Western blotting印迹分析法,在制模成功后1 d、5 d、7 d、14 d、28 d观察大鼠脊髓损伤(SCI)组织中勿动蛋白-A(Nogo-A)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)等髓鞘相关抑制因子表达。结果整个实验中大鼠死亡24只(16.67%); B、C、D、E组SCI后1 d可见Nogo-A、MAG、OMgp表达,Nogo-A与MAG表达于SCI后7 d达峰值,28 d恢复到假手术组水平; SCI后1 d可见髓鞘中OMgp表达,5 d达峰值,28 d恢复至假手术组水平。结论 Nogo-A、MAG、OMgp在SCI后普遍呈现高表达,并在SCI后5～7 d达到峰值。
- 贾叙锋龙苗戢勇黄光平周玉冯大雄
- 关键词：SD大鼠动物模型
- 硫酸钙人工骨复合培养骨髓间充质干细胞对骨诱导脊柱融合的影响被引量：4
- 2016年
- 背景:硫酸钙人工骨可降解,且具有良好的生物相容性,是作为一种骨移植替代物应用于脊柱融合治疗中。目的:观察硫酸钙人工骨复合培养骨髓间充质干细胞对骨诱导脊柱融合的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,并与硫酸钙人工骨进行复合,电镜下观察复合材料情况。纳入行脊柱融合患者67例,按照植骨融合材料的不同分为对照组32例和观察组35例,分别予以自体髂骨移植和自体骨髓间质干细胞复合硫酸钙移植,术后进行脊柱融合Lenke分级和腰背疼痛疗效结果评分。结果与结论:(1)电镜下观察材料细胞形态:硫酸钙人工骨具有良好的孔状结构,骨髓间充质干细胞在硫酸钙人工骨材料上生长良好,细胞贴敷于材料上;(2)脊柱融合情况:术后对患者的脊柱融合Lenke分级情况进行比较,观察组的Lenke分级情况稍优于对照组,但差异无显著性意义(P>0.05),与术前相比,两组腰背疼痛疗效结果评分均显著增高(P<0.05);(3)结果表明:利用硫酸钙人工骨为支架材料,骨髓间充质干细胞为种子细胞,构建组织工程骨,并应用于脊柱融合之中可以发挥出良好的骨诱导作用,获得理想的治疗效果。
- 应吕方贾叙锋程尹冯大雄
- 关键词：干细胞脊柱生物材料脊柱融合硫酸钙人工骨种子细胞骨髓间充质干细胞骨诱导
- 脊髓损伤后髓磷脂抑制分子及作用机制的研究进展被引量：1
- 2011年
- 脊髓损伤(SCI)常导致损伤平面以下运动、感觉以及括约肌永久性功能障碍。尽管国内外学者对此进行了不懈的探索,但是如何治愈SCI迄今仍是一全球性的医学难题。脊髓损伤后轴突不能再生的主要原因包括髓磷脂相关抑制分子的存在、含抑制分子的胶质瘢痕形成、硫酸软骨素蛋白多糖等。其中,髓磷脂相关神经生长抑制因子对中枢神经再生抑制起着关键作用,其相关抑制因子主要包括三种髓磷脂源性生长抑制蛋白:髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白、Nogo-A。所有这些生长抑制因子都结合共同抑制蛋白受体—Nogo-66(NgR)受体复合体,激活远端的Rho信号途径。激活Rho与其下游的效应器蛋白-Rho蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ),激活的ROCKⅡ作用于多种蛋白质底物而产生级联瀑布信号传递,调节生长锥内细胞骨架的重组,改变神经的生长方向,影响肌球蛋白的收缩等,引起轴突生长锥的回缩及塌陷,介导脊髓损伤后轴突的再生抑制。本文简要综述SCI后几类髓磷脂相关抑制分子及其通过Rho-ROCKⅡ信号途径传递及机制的研究进展。
- 屈一鸣冯大雄肖百敏叶飞朱宗波
- 关键词：脊髓损伤
- SD大鼠脊髓损伤后微环境的模拟实验被引量：4
- 2016年
- 背景:通过制作SD大鼠的轻、中、重度脊髓损伤模型,使之符合基础实验研究的脊髓损伤类型,可进一步了解SD大鼠脊髓损伤后的微环境变化,为临床治疗提供帮助。目的:模拟SD大鼠脊髓损伤后微环境,观察不同致伤势能的Allen’s模型和脊髓全切模型SD大鼠脊髓损伤后不同时间点的神经功能、病理以及运动诱发电位的变化。方法:选择125只成年雌性健康SD大鼠,随机分为假手术组、打击势能100 gcf组(20 g×5 cm)、打击势能200 gcf组(20 g×10 cm)、打击势能300 gcf组(20 g×15 cm)、脊髓全切组,每组25只,在制模成功后第1,5,7,14,28天采用BBB后肢运动功能评分、运动诱发电位监测、病理切片鉴定,观察各组大鼠脊髓损伤程度。结果与结论:1整个实验中SD大鼠死亡24只,脊髓全切组的死亡率和并发症最高,每组的BBB评分均降低,随着时间延长BBB评分逐渐增高。各手术组与假手术组在对应时间点比较,差异有显著性意义(P<0.05),打击势能300 gcf组和脊髓全切组在对应时间点比较,差异无显著性意义(P>0.05)。2各手术组在伤后1 d病灶处出现炎性细胞浸润,神经元细胞肿胀明显,随着时间推移,神经细胞减少;伤后28 d发现大量星形胶质细胞增生,瘢痕及脊髓空洞形成,打击势能300 gcf组、脊髓全切组明显重于打击势能100 gcf组、打击势能200 gcf组。3各手术组与假手术组的波幅及潜伏期在对应时间点比较,差异有显著性意义(P<0.05);打击势能300 gcf组和脊髓全切组在对应时间点比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明致伤势能为20 g×5 cm,20 g×10 cm,20 g×15 cm,可模拟SD大鼠轻、中、重度脊髓损伤模型的微环境;不同势能的改良Allen’s模型较脊髓全切模型并发症低,更符合基础研究。
- 贾叙锋龙苗戢勇黄光平周玉张方德冯大雄
- 关键词：脊髓损伤SD大鼠微环境国家自然科学基金
