王宝恩肝纤维化研究基金(20100002) 作品数:9 被引量:22 H指数:3 相关作者: 俞富军 郑建建 董培红 陈必成 高申孟 更多>> 相关机构: 温州医学院附属第一医院 温州医学院附属第三医院 更多>> 发文基金: 王宝恩肝纤维化研究基金 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
松弛素抑制肝星状细胞胶原合成的体外研究 2011年 肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经中间环节,尽早阻止甚至逆转肝纤维化对于改善各种慢性肝病的预后、延缓肝硬化的发生具有重要意义.目前认为,肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节,转化生长因子-β1(TGF-β1)是HSC激活的最强因子,而SKi相关新颖N蛋白(Ski-related novel protein N,SnoN)是TGF-β1/Smad信号通路中最重要的负性调控因子.临床研究发现,松弛素有松弛盆腔韧带和扩张子宫颈而利于妊娠和分娩的作用,另外尚有抗肝纤维化作用.本实验通过观察松弛素对体外分离的大鼠HSC内TGF-β1和SnoN蛋白表达的影响,以及PC Ⅲ、HA含量的变化,了解松弛素抗肝纤维化的作用及可能机制. 董培红 俞富军 范栩妃 王晓峰 陈永平 李骥关键词:肝星状细胞 松弛素 体外研究 胶原合成 抗肝纤维化作用 SMAD信号通路 miR-29b抗肝纤维化的机制研究 被引量:3 2013年 目的:研究miR-29b对肝星状细胞(HSC)中TGF-βⅠ型受体(TGF-βⅠR)表达的调节作用。方法:生物信息学方法预测miR-29b靶基因为TGF-βⅠR。将靶基因3'端非编码区片段克隆至pMIR-re-porter载体构建重组质粒,然后和pRL-TK、miRNA前体共转染入HSC,检测荧光素酶的表达。将miRNA前体转染HSC后检测TGF-βⅠR的mRNA和蛋白质水平。结果:酶切和测序证实重组质粒构建成功;过表达miR-29b时,共转染pMIR-TGF-βⅠR质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组明显降低(P<0.05);而共转染pMIR-空载体质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组无显著差异(P>0.05);上调miR-29b水平后,TGF-βⅠR mRNA和蛋白的相对表达较转染miR-NC组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-βⅠR是miR-29b的靶基因。miR-29b通过负向调控TGF-βⅠR表达而起抗肝纤维化作用。 俞富军 郑建建 高申孟 董培红关键词:肝星状细胞 原发性肝癌血清中高尔基体蛋白73的表达及其与预后的关系 被引量:8 2013年 原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,在我国发病及病死率相当高。由于肝癌组织血供丰富,很多患者术前就已存在微转移,术后就更容易发生复发转移。因此,只有早期诊断及早期治疗才能改善肝癌患者预后。高尔基体蛋白73(Golgiprotein-73,GP73)是近年来发现的有关肝损害的新指标,尤其在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中改变特别明显,甚至有文献报道GP73可以作为HCC的标志物。本研究探讨血清GP73蛋白水平与原发性肝癌肝损害严重程度、术后复发及生存预后的关系,为临床上及时有效的治疗提供一定的实验基础。一。 郑建建 董缪武 董培红 俞富军关键词:蛋白水平 生存预后 高尔基体 血清 CARCINOMA 结直肠癌患者血浆中的miR-106a表达及其与预后的关系 被引量:3 2012年 目的:探讨血浆miR-106a水平与结直肠癌(CRC)患者预后生存的相关性。方法:收集60例健康体检志愿者(对照组),103例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有人均进行血浆miR-106a实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测,同时采用Kaplan-Meier进行生存分析。结果:①血浆miR-106a在CRC组较对照组表达明显升高(P=0.004),与是否发生淋巴结转移有关(P=0.033);且患者术后miR-106a明显降低(P<0.001)。②对入院时CRC患者根据miR-106a相对值进行分组,miR-106a高值组术后3年内癌复发率高于低值组(P<0.001);K-M分析则显示高值组术后3年生存率低于低值组(P=0.003)。结论:血浆miR-106a的测定有助于CRC的诊断,且与CRC的复发转移有一定关系。 郑建建 俞富军 董培红 陈必成关键词:结直肠癌 实时荧光定量聚合酶链反应 纳米壳聚糖携带miR-29b转染肝星状细胞的实验研究 被引量:1 2013年 目的:观察纳米壳聚糖携带miR-29b表达质粒对大鼠肝星状细胞的转染效率和治疗效果。方法:制备载miR-29b表达质粒的纳米壳聚糖,并转染大鼠肝星状细胞,荧光显微镜和流式细胞仪观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR分析Ⅰ型胶原α1链mRNA的表达水平。结果:紫外分光光度计分析纳米壳聚糖的载药率为91.56%。凝胶电泳阻滞实验显示纳米壳聚糖与质粒结合较好。纳米壳聚糖携带miR-29b表达质粒的转染效率为31.9%,脂质体的转染效率为35.1%,两者差别无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,纳米壳聚糖组和脂质体组Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平明显下降,分别为29%和32%,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:纳米壳聚糖载体具有较高的转染效率,携带miR-29b具有较好的抗肝纤维化效果。我们的研究为肝纤维化基因治疗提供了一种新型载体。 董培红 郑建建 卢中秋 洪巧 高申孟 俞富军关键词:肝星状细胞 慢性乙型肝炎患者血清GP73与肝纤维化的相关性 被引量:5 2012年 目的:探讨慢乙肝患者血清GP73与肝纤维化的相关性。方法:收集40例健康志愿者,110例慢乙肝患者进行血清GP73检测,同时病患组均进行HBeAg及肝功能等测定,并对结果进行统计。结果:1.肝纤维化各组较正常组均明显增高(P<0.01),随着纤维化的进展,肝纤维化分期组间也存在明显差别(P<0.01)。45例入院确诊为肝硬化的患者经扶正化瘀等治疗后,第7、30天复查GP73均较治疗前明显减低(P<0.05)且治疗后第30天与第7天相比也有明显差别(P<0.01)。2.所有肝硬化患者经child-pugh分级并与其GP73值进行相关分析,发现两者高度正相关(相关系数为r=0.922,P<0.01)。3.所有患者根据HBeAg阴、阳性进行分组,HBeAg(+)组GP73明显高于HBeAg(-)组(P<0.01)。结论:血清GP73的测定有助于肝纤维化病的诊断和肝损害情况的判断。 郑建建 钱琼信 王斯璐 丁赛丹 俞富军 陈必成关键词:肝纤维化 GP73 肝损伤 酶联免疫吸附试验 TGF-β ⅡR单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白携带miR-29b抗肝纤维化的研究 2012年 目的观察TGF-β ⅡR单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白(简称新型载体)携带miR-29b对体外培养肝星状细胞(HSC)的转染效率和治疗效果,为今后肝纤维化基因治疗提供新裁体。方法脂质体、新型载体和慢病毒携带miR-29b治疗体外培养的HSC,荧光显微镜和流式细胞术观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR和WesternBlot技术分析collagen αl(I)mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,慢病毒组的转染效率最高,为70%;其次为新型载体组,为58%;最后为脂质体组,为29%。各载体组collagen αl(I)mRNA表现出不同的下降,与对照组比较,慢病毒组下降70%(t=6.316,P〈0.01),新型载体组为50%(t=4.082,P〈0.01),脂质体组为38%(t=3.014,P〈0.05)。各载体组collagen αl(I)蛋白也表现出不同的下降,慢病毒组下降为59%(t=4.209,P〈0.01);新型载体组为41%(t=4.033,P〈0.01;);脂质体组为27%(t=2.842,P〈0.05)。结论笔者构建的新型载体具有较高的转染效率,并且携带miR-29b具有较好的抗肝纤维化效果。 俞富军 郑建建 高申孟 董培红关键词:鱼精蛋白类 遗传学 重组融合蛋白质类 遗传学 微RNAS 结直肠癌患者血浆中miR-221的临床价值 2012年 目的:探究结直肠癌(CRC)患者血浆中miR-221的临床价值。方法:收集60例正常健康体检志愿者(对照组),80例就诊我院的CRC患者(病例组),对所有入选者均进行血浆miR-221实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测。结果:(1)血浆miR-221含量在CRC组织较对照组表达明显升高(P<0.001),并随着duke分期的发展呈现递增的趋势(P<0.01)。(2)患者入院后均符合手术治疗条件,并于术后第7天复查miR-221含量,发现较治疗前明显减低(P<0.01)。3.对入院时CRC患者根据血浆miR-221相对值进行分组,miR-221高值组术后2年内发生癌复发的发生率高于低值组(P<0.001)。结论:血浆miR-221的测定有助于CRC的诊断,并对病情的估计和预后的判断有一定的帮助。 郑建建 杨云秀 郭勇 俞富军 洪炜龙 张行 陈必成关键词:结直肠癌 MIR-221 实时荧光定量聚合酶链反应 脂联素抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6的Ⅲ型前胶原和透明质酸的表达 被引量:2 2011年 目的 观察脂联素对肝星状细胞(HSCs)分泌结缔组织生长因子(CTGF)的影响,并观察Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)含量的变化.方法 把大鼠HSCs分成5组,其中4组分别加入不同浓度的脂联素,另外1组作对照.通过RT-PCR和Western Blot技术分析CTGF mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测上清液PCⅢ、HA含量.结果 与对照组比较,A、B、C、D组脂联素HSCs内CTGF mRNA表达均下降,吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组下降最明显(t=2.42,P<0.05;t=2.73,P<0.05;t=3.28,P<0.01;t=4.67,P<0.01);CTGF蛋白表达也抑制,积分吸光度比值分别为1.54±0.18、1.21±0.14、0.96±0.10、0.79±0.08,其中以D组抑制最明显(t=2.84,P<0.01;t=4.05,P<0.01;t=6.25,P<0.01;t=9.72,P<0.01);上清液PCⅢ、HA含量也下降,随脂联素浓度增加,下降越明显.结论 脂联素能够抑制HSCs分泌PCⅢ、HA;脂联素可通过抑制HSCs内CTGF表达而发挥抗纤维化作用. 俞富军 董培红 范栩妃 陈永平 李骥