国家自然科学基金(30772216)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：李建军程扬安春厚原泉杨东翔更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间歇性动态压力促进兔胫骨近端骺板梯度增殖分化的实验研究
- 2011年
- 目的观察兔骺板在周期性压应力生物反应器中受到不同时间的间歇性动态压力对其增殖分化的影响。方法取2周龄的兔胫骨近端骺板,置于动态压力生物反应器内培养5d,接受不同时间的间歇性动态压力刺激。A组为无压力刺激组,B～E组分别为每天间歇动态压力1.5、3、6和12h。免疫组织化学染色检测骺板标本中CollagenⅡ、CollagenⅩ、BMP-6、PTHrp、Sox-9和HIF-1的表达和分布。结果与A组比较,B、C、D和E组增殖层明显增厚,且C组增殖层增厚程度明显大于B、D和E组。CollagenⅡ和Sox-9主要在增殖层表达,CollagenⅩ和BMP-6主要在肥大层表达,PTHrp主要在肥大前区表达,HIF-1在全层均有表达,呈现梯度变化特点,在肥大前区表达最强。结论骺板在间歇性动态压力刺激下,分别针对增殖层及肥大层产生不同的梯度压应力,能够促进其梯度增殖分化。HIF-1可能是骺板在力学环境下产生梯度增殖的重要影响因素。
- 李建军杨东翔元香南孔战陈旭赵群
- 关键词：骺板生物反应器
- 胰岛素样生长因子1基因转染兔脂肪间质干细胞的增殖被引量：2
- 2009年
- 背景：基因工程是目前软骨修复的主要方法，脂肪间质干细胞以其来源丰富、取材容易、免疫相容性良好、体外培养可以较长时间保持分化表型、有较强的向软骨细胞转化的能力而成为理想的种子细胞。目的：探讨胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间质干细胞增殖的影响。设计、时间及地点：细胞学基因转染体外观察，于2006-03／2007-03在中国医科大学细胞生物实验室完成。材料：成年新西兰大白兔3只，由中国医科大学实验动物中，心提供。含有全长人胰岛素样生长因子1cDNA片段的质粒pcDNA3．1．hlGF-1由吉林大学徐莘香教授惠赠。方法：取兔颈后皮下脂肪，Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养兔脂肪间质干细胞。取传至第2代细胞，以．0．5×10^6/孔密度接种于6孔板，细胞融合至90％-95％时随机分为未转染组、转染空载体pcONA3．1组、转染质粒pcDNA3．1-hlGF-1组，采用脂质体介导基因转染法进行质粒pcDNA3．1-IGF-1转染，经G418筛选后培养4周。主要观察指标：采用RT-PCR及Westernblot方法检测胰岛素样生长因子1的表达情况，MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果：转染pcDNA3．1-hlGF-1组的脂肪间质干细胞内有大量胰岛素样生长因子1mRNA及蛋白表达，未转染组及转染空载体pcDNA3．1组无表达。细胞增殖曲线显示，转染质粒pcDNA31-hlGF-1组的脂肪间质干细胞增殖速度较其他2组细胞明显加快。流式细胞仪检测显示，转染质粒pcDNA3．1-hlGF．1组的脂肪间质干细胞较其他2组细胞的S期比例显著增加（户〈0．05），G1期比例显著下降（P〈0．05）。结论：质粒pcDNA3．1-IGF-1转染兔脂肪间质干细胞后，可以获得稳定表达，并能明显促进脂肪间质干细胞的增殖。
- 安春厚程扬原泉李建军
- 关键词：脂肪间质干细胞胰岛素样生长因子1基因转染细胞周期
- 组织工程软骨的研究现状与进展被引量：1
- 2011年
- 随着软骨组织工程学技术的不断发展，构建生物特性与正常关节软骨相似的组织工程软骨已经成为目前组织工程研究的热点之一，并且逐步应用于临床。它的基本思想是综合应用工程学和生命科学的基本原理和方法，采集与靶组织或器官功能相关的活细胞种植于可生物降解的三维支架材料上，通过模拟体内环境的体外培养使附着于支架上的细胞大量增殖，形成有生命的组织，而后将其移人体内，修复组织缺损，替代组织、器官的部分或全部功能，最终与机体组织融为一体，成为自体组织或器官的一部分并发挥其相应的生理功能。组织工程软骨的构建主要包括种子细胞、支架材料、体外培养环境和移植物成血管化四方面因素。
- 杨东翔元香南孔战陈旭张传辉李建军
- 关键词：软骨
- 动态压力联合胰岛素样生长因子1基因转染促进兔脂肪间充质干细胞低氧诱导因子1α的表达被引量：3
- 2010年
- 目的 初步探讨兔脂肪间充质干细胞（ADSCs）HIF-1α促进ADSCs成软骨分化的作用机制.方法 观察动态压力联合低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染对兔脂肪间充质干细胞（ADSCs）HIF-1表达的影响.采用I型胶原酶消化法,分离、纯化、扩增兔ADSCs.构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株,以5×107/ml的密度接种于壳聚糖/明胶复合支架材料上,分组培养：A组（空白对照组）接种未转染基因的脂肪间充质干细胞,B组（IGF-1组）接种稳定转染胰岛素样生长因子1的脂肪间充质干细胞,C组（压力组）与D组（压力＋IGF-1组）分别为A、B组的细胞/支架复合物于压力型生物反应器中动态培养（2%at 0.1Hz）,连续培养7 d.进行形态学观察,MrTT法绘制细胞增殖曲线,并应用Di1荧光标记观察细胞在支架上的分布情况.比较组织工程软骨中糖胺聚糖（GAG）含量和相关基因（IGF-1,HIF-1α,Ⅱ型胶原和Sox-9）相对表达的差异.结果 形态学观察,MTr,Dil荧光标记,GAG含量测定以及实时聚合酶链反应结果均显示A组＜C组＜B组＜D组.实验证实单纯基因转染组的HIF-1α、Sox-9等基因表达水平和GAG含最明显高于单纯压力组,而二者联合培养则能够获得更为显著的效果,其结果远大于二者简单的加合.结论 三维立体培养条件下,动态压力与IGF-1基因转染联合作用明显促进细胞自身分泌内源性IGF-1 IGF-1与动态压力刺激均明显上调兔ADSCs HIF-1α的表达水平,并且二者存在协同作用.HIF-1α表达上调对促进兔ADSCs成软骨分化、增殖以及分泌细胞外基质均具有重要作用.
- 杨军张传辉李建军周振东张钦明
- 关键词：软骨干细胞胰岛素样生长因子-1
- 胰岛素样生长因子-1基因转染脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化的研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察胰岛素样生长因子（IGF）-1基因转染的脂肪间充质干细胞（ADSCs）向软骨细胞分化的效果。方法原代培养兔ADSCs，免疫荧光法检测细胞表面抗原CD44、CD49；脂质体介导人IGF-1基因转染兔ADSCs联合低浓度血清培养基向软骨细胞分化诱导，RT-PCR及Western blot方法检测IGF-1的表达，MMT法绘制细胞增殖曲线、甲苯胺蓝染色软骨结节、免疫组织化学检测Ⅱ型胶原的表达。结果脂肪间充质干细胞CD44、CD109表达阳性，基因转染后细胞IGF-1表达阳性，细胞增殖速度增快，出现软骨结节，Ⅱ型胶原表达增高。结论从脂肪组织中能够分离出增殖旺盛的ADSCs，IGF-1在ADSCs内获得稳定表达，细胞增殖能力增强，促进其向软骨细胞分化。
- 原泉程扬李建军安春厚
- 关键词：脂肪间充质干细胞软骨细胞胰岛素样生长因子-1基因转染分化
- BMP-2基因修饰的骨髓基质干细胞种植纳米骨的实验研究被引量：1
- 2009年
- [目的]用携带BMP-2基因的腺病毒表达载体（Ad—BMP一2）转染兔骨髓基质干细胞（MSC），接种于胶原基纳米骨支架（nHAC）体外构建组织工程骨。[方法]将BMP-2基因修饰的MSC接种于nHAC支架，扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况；WesternBlot分析BMP-2基因表达。[结果IBMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架表面和孔隙内黏附、生长良好，仍可高水平表达BMP-2蛋白。[结论]BMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架中黏附、生长良好，继续高水平表达并分泌BMP-2，组织工程骨构建成功。
- 崔少千范广宇李建军周凤华于洪德张磊李雷王欢
- 关键词：骨髓细胞干细胞骨形态发生蛋白质类骨生成
- 兔脂肪干细胞体外构建组织工程软骨:负载胰岛素样生长因子1基因的作用被引量：3
- 2010年
- 背景:前期研究证实在二维培养条件下,转染胰岛素样生长因子1基因能够明显促进脂肪间充质干细胞的增殖。目的:在前期研究基础上,利用壳聚糖明胶复合物为立体培养的载体,观察三维立体培养条件下胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间充质干细胞增殖能力的影响,体外初步构建组织工程软骨。方法:分离、培养成年新西兰大耳白兔脂肪间充质干细胞,构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株,鉴定后接种于壳聚糖三维支架材料上,分组培养:空白对照组接种未转染基因的脂肪间充质干细胞,空载体组接种胰岛素样生长因子1诱导条件下培养的脂肪间充质干细胞,基因转染组接种稳定转染胰岛素样生长因子1基因的脂肪间充质干细胞,培养1周。扫描电镜观察各组细胞形态,MTT法绘制细胞增殖曲线,CM-DiL荧光标记后观察细胞增殖比率及细胞分布,DMMB法测定糖胺聚糖含量。结果与结论:成功构建稳定表达pcDNA3.1-IGF-1的细胞株,转染后的细胞株在mRNA水平上获得胰岛素样生长因子1的表达,并成功翻译为蛋白。扫描电镜示各组细胞在支架上贴附、伸展良好,基因转染组细胞生长最为旺盛。MTT及GAG检测结果提示,基因转染组增殖能力最强、糖胺聚糖最高(P<0.01),荧光标记显示细胞分布均匀,存活率高(P<0.05)。提示胰岛素样生长因子1基因转染联合三维立体培养能够有效促进兔脂肪间充质干细胞的增殖和软骨细胞外基质糖胺聚糖的分泌。
- 张传辉杨军李建军孙仰白
- 关键词：胰岛素样生长因子1软骨组织工程脂肪间充质干细胞
