国家自然科学基金(30600021)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 人CD81细胞外区大环原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人CD81-LEL基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:通过PCR扩增得到CD81-LEL基因编码区片段,与pMD18-T载体连接,经序列测定后,再将该扩增片段亚克隆入原核表达载体pET32a(+)中。酶切鉴定正确的表达载体pET32a-CD81-LEL转化表达菌BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白。结果:成功构建了原核表达载体pET32a-CD81-LEL;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达且呈可溶性状态,Western-blot显示目的蛋白正确表达,并用镍离子亲和层析法获得纯化的重组蛋白。结论:CD81-LEL可以在大肠杆菌中表达,为进一步研究CD81与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2的结合提供了有用的研究资料。
- 吕欣方海亮姚敏尹文雷迎峰杨敬康健
- 关键词：CD81基因表达包膜糖蛋白
- HCV截短型E2蛋白在酵母双杂交系统中的表达及自激活作用检测被引量：3
- 2008年
- 目的:获得不包含C末端跨膜区的HCV包膜糖蛋白E2蛋白(E2 661)编码基因,构建酵母双杂交诱饵载体,并检测对报告基因的激活作用。方法:PCR扩增HCV E2661 cDNA片段,先克隆入pMD-18T载体中,经测序正确后,再亚克隆入诱饵载体 pGBKT7,将重组质粒pGBKT7-E2661用醋酸锂法转化入酵母菌AH109,检测目的蛋白在酵母细胞中的表达以及对报告基因有无激活作用。结果:成功构建含有HCVE2661基因片段的酵母双杂交诱饵载体,目的片段可在酵母细胞AH109中正确表达,对酵母菌无毒性且对报告基因无自主激活作用。结论:可利用所构建的pGBKT7-E2661作为酵母双杂交系统中的"诱饵",进行相互作用分子的筛选研究。
- 吕欣尹文雷迎峰杨敬康健姚敏
- 关键词：包膜糖蛋白酵母双杂交诱饵载体
- 丙型肝炎病毒(HCV)截短型E2的原核表达和蛋白纯化
- 2009年
- 对丙型肝炎病毒(HCV)截短型包膜糖蛋白E2-661基因进行原核表达和纯化。利用PCR法扩增出661bp的截短型HCVE2区基因片段,并将测序正确的E2-661基因克隆入原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果表明目的蛋白分子量约为35kDa,主要以包涵体形式大量存在。Western-blot结果显示目的蛋白与抗His标签单抗及HCV阳性血清均具有良好的反应原性。并通过镍离子亲和层析方法获得纯化的重组蛋白。以上结果为HCVE2功能的进一步研究奠定了基础。
- 姚敏方海亮尹文雷迎峰杨敬孙梦宁田江红吕欣
- 关键词：丙型肝炎病毒原核表达
