国家自然科学基金(30772223)
- 作品数：14 被引量：22H指数：4
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- 应用热诱导凋亡法制备靶向胶质瘤细胞的树突状细胞疫苗
- 2012年
- 目的应用热诱导凋亡U251细胞致敏树突状细胞，观察其诱导特异性细胞毒性T细胞的能力，探讨其对肿瘤细胞的杀伤机制。方法应用改良Inaba法，从小鼠骨髓细胞中诱导出树突状细胞，应用电镜和流式细胞技术行表型鉴定，然后和经热诱导凋亡的胶质瘤细胞共培养获得树突状细胞疫苗，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测疫苗在体外促T细胞增殖和杀伤肿瘤细胞作用，将疫苗经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内，检测体内肿瘤生长抑制作用。结果44℃孵育3h能有效诱导胶质瘤细胞凋亡，凋亡率达（40．10±1．08）％。负载凋亡细胞抗原的树突状细胞在体外能有效促进T细胞增殖，增加干扰素（IFN）-γ的分泌，并随效靶比增加，对胶质瘤细胞的杀伤率增大。体内注射疫苗4周后，治疗组肿瘤体积（301．704±21．659）mm2，空白对照组为（487．116±65．975）mm2，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论热诱导凋亡胶质瘤细胞致敏的树突状细胞能在体外有效促进T细胞增殖，诱导特异性细胞毒性T细胞杀伤胶质瘤细胞，有效抑制体内肿瘤生长。
- 冀保卫陈谦学刘宝辉吴立权田道锋郭振涛纪振刚
- 关键词：脑胶质瘤树突状细胞肿瘤疫苗免疫疗法
- 热诱导凋亡胶质瘤细胞致敏树突状细胞疫苗的制备与鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的制备热诱导凋亡胶质瘤细胞致敏树突状细胞疫苗，探讨其增强树突状细胞抗原递呈、诱导细胞毒性T淋巴细胞产生更强肿瘤细胞杀伤作用的机制。方法采用改良Inaba法，在重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rmGM—CSF）和重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）作用下，体外诱导扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞，电子显微镜和流式细胞术检测其生物学特征；分别以不同加热温度处理U251细胞，制备凋亡U251细胞致敏树突状细胞疫苗，^3H-TdR掺入法和MTT法检测T淋巴细胞增殖能力和活化细胞毒性T淋巴细胞杀伤率。结果在rmGM-CSF和rmIL-4作用下，小鼠骨髓来源细胞体外培养6～7d即可诱导出树突状细胞，经倒置相差显微镜和电子显微镜证实细胞表面呈典型树突状结构；流式细胞术检测证实其表达特异性表面标记物CD11c，同时表达功能相关性抗原CD80、CD86和MHCⅡ。倒置相差显微镜和流式细胞术确定热诱导U251细胞凋亡的最佳条件为：44℃处理3h再常规培养12h，凋亡U251细胞可更好地负载树突状细胞，负载的树突状细胞可以激发T淋巴细胞增殖，诱导活化细胞毒性T淋巴细胞具有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。结论在rmGM—CSF和rmIL-4作用下，经体外成功制备的小鼠骨髓来源的树突状细胞，可热诱导凋亡胶质瘤细胞致敏树突状细胞疫苗于体外有效激发T淋巴细胞增殖，诱导细胞毒性T淋巴细胞产生较强的杀伤肿瘤细胞能力。
- 吴立权沈恒陈谦学冀保卫刘宝辉张申起田道锋
- 关键词：神经胶质瘤树突细胞癌症疫苗免疫疗法
- 转染人β干扰素基因的骨髓间充质干细胞治疗大鼠颅内胶质瘤被引量：3
- 2010年
- 目的 观察转染人β干扰素基因（hIFN-β）的骨髓间充质干细胞（MSCs-hIFN-β）治疗大鼠颅内恶性胶质瘤的作用.方法 重组腺病毒介导hIFN-β基因转染的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs-hIFN-β）和C6胶质瘤细胞体外共培养,噻唑蓝（MTT）比色法检测C6细胞活力,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养液上清hIFN-β含量 制作SD大鼠颅内胶质瘤模型,并用MRI和组织病理学检查予以证实 MSCs-hIFN-β瘤内注射观察荷瘤鼠的临床表现和生存时间,MRI检查肿瘤的大小,并行大鼠C6胶质瘤组织病理学检查和肿瘤组织hIFN-β免疫组织化学染色.结果 体外共培养发现C6细胞的生长被不同程度地抑制,C6细胞培养上清hIFN-β的含量随着MSCs-hIFN-β的密度增加,其含量也增加 体内实验发现MSCs-hIFN-β、MSCs、生理盐水瘤内注射治疗10 d后肿瘤平均体积分别为（8.43±1.32）、（35.84±2.36）、（37.26±2.91）mm3,治疗组和对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01） 治疗组较对照组生存期明显延长（P＜0.01）.结论 MSCs-hIFN-β能抑制胶质瘤细胞的增殖,延长颅内荷瘤鼠的生存期.
- 田道锋陈谦学吴立权冀保卫张申起刘宝辉王龙陈治标蔡强
- 关键词：骨髓间充质干细胞腺病毒恶性胶质瘤
- 胶质瘤干细胞的研究新进展
- 2008年
- 胶质瘤干细胞存在于多种脑胶质瘤组织和细胞系。胶质瘤干细胞具有类似神经干细胞的特性,但在基因表达、分化、动物体内成瘤性、耐药性和耐辐射性等方面又不同于神经干细胞。CD133和nestin作为目前公认的神经干细胞表面标志,被应用于胶质瘤干细胞的分离鉴定。靶向胶质瘤干细胞的树突细胞疫苗的开发和靶向肿瘤干细胞信号传导通路的实验研究为脑胶质瘤的治疗提供了新途径。
- 冀保卫陈谦学易伟
- 关键词：脑胶质瘤肿瘤干细胞
- 靶向脑胶质瘤干细胞的树突状细胞疫苗治疗恶性脑胶质瘤的体外实验研究
- 2012年
- 目的研究应用脑胶质瘤于细胞抗原制备的树突状细胞（DC）疫苗对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法反复冻融法获得源于胶质瘤细胞系U251中的肿瘤干细胞的胞溶物，和源于小鼠间充质干细胞的DC共培养，获得胶质瘤干细胞疫苗。流式细胞仪检测疫苗表面标志变化；CCK-8法检测其促T细胞增殖能力以及对胶质瘤细胞的靶向杀伤作用；ELISA法检测培养基中干扰素-γ的含量。用热处理U251细胞制备的DC疫苗作为对照组。结果与对照组相比，脑胶质瘤干细胞疫苗的CD80、CD86、CD11c和MHCU等表面标志表达显著提高，具有更强的促T细胞增殖能力（P〈0．01），对U251细胞特异性靶向杀伤率随效靶比的提高而增加，最高为（78．508±4．156）％，相应的干扰素-γ分泌水平也达到最高。结论胶质瘤干细胞疫苗能更有效地诱导特异性细胞毒性T细胞，表现出更强的抗肿瘤特性。
- 冀保卫陈谦学刘宝辉吴立权田道锋郭振涛纪振刚
- 关键词：神经胶质瘤树突状细胞疫苗
- 树突细胞肿瘤疫苗对U251细胞的作用被引量：4
- 2011年
- 自体树突状细胞（DC）诱导刺激人体产生特异性抗肿瘤T细胞免疫的主动免疫治疗是目前恶性脑胶质瘤免疫治疗的热点和发展方向。本实验旨在观察树突状细胞对肿瘤细胞的作用。
- 刘宝辉沈恒陈谦学冀保卫郭振涛吴立权
- 关键词：U251细胞肿瘤疫苗树突细胞自体树突状细胞主动免疫治疗恶性脑胶质瘤
- 骨形成发生蛋白4在胶质瘤细胞株U251中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的 观察骨形成发生蛋白4（BMP4）在U251细胞中的作用.方法 阿霉素、BMP4质粒体分别给予U251细胞,BMP4的小干扰给予阿霉素处理过48h的U251细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量PCR和Western blot检测转染是否成功及BMP4的表达量.噻唑蓝（MTT）检测细胞活性,应用公式（1-处理组A/空白组A）×100%计算处理组细胞增长抑制率.结果 RT-PCR、荧光定量PCR和Western blot证明转染是成功的.在给予BMP4质粒体0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/孔后,细胞的抑制率分别为（23.4±1.1）%、（54.8±1.3）%、（58.8±1.6）%、（57.2±1.4）%、（56.1±0.9）%（P〈0.05）,0.5μg/孔与1.0、1.5、2.0、2.5 μg/孔的抑制率差异有统计学意义（P〈0.05）,1.0、1.5、2.0、2.5μg/孔之间差异无统计学意义（P〉0.05）.单用阿霉素对U251细胞的抑制率为（45.2±1.1）%（P〈0.05）.给予阿霉素后给予BMP4的siRNA,细胞的抑制率为（23.1±2.7）%,与阿霉素组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 BMP4可以抑制胶质瘤细胞U251的生长.
- 刘宝辉陈谦学田道锋吴立权董慧敏张申起
- 关键词：靶向治疗胶质瘤
- 携带hIFN-β的骨髓间充质干细胞体外抑制C6胶质瘤细胞被引量：1
- 2010年
- 目的研究携带人β干扰素基因(hIFN-β)的重组腺病毒转染骨髓间充质干细胞(MSCs-hIFN-β)以及其在体外抑制大鼠C6胶质瘤细胞。方法转染的MSCs行PT-PCR检测细胞内hIFN-βmRNA的表达;ELISA法检测培养液上清hIFN-β的分泌情况;MTT法检测细胞活力并绘制转染后MSCs生长曲线,MSCs-hIFN-β和C6胶质瘤细胞体外共培养,检测C6胶质瘤细胞活力和共培养液上清hIFN-β含量。结果 Ad-hIFN-β转染的MSCs分化后有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR证实MSCs中有hIFN-βmRNA表达,ELISA测定显示MSCs分泌hIFN-β,而且转染MSCs的增殖能力无改变。体外共培养发现C6胶质瘤细胞的生长被不同程度的抑制,C6胶质瘤细胞培养上清hIFN-β的含量随着MSCs-hIFN-β的密度增加而增加。结论在体外MSCs-hIFN-β能抑制大鼠C6胶质瘤细胞的增殖。
- 田道锋陈谦学吴立权冀保卫张申起刘宝辉王龙
- 关键词：骨髓间充质干细胞腺病毒C6胶质瘤细胞
- 热诱导人胶质瘤U251细胞凋亡作用被引量：1
- 2009年
- 目的观察不同加热温度及不同加热时间对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法采用恒温加热（43、44、45℃各1、2、3、4h）处理细胞，后继续培养12h。应用Annexin V-FITC／PI双染、瑞氏-姬姆萨染色、PI单染检测细胞凋亡率、凋亡细胞形态学、细胞周期生化学特征的变化情况。结果随温度升高和诱导时间延长U251细胞凋亡率增加，44℃3h凋亡率最高达40．10％（P〈0．01）；光镜下可见凋亡细胞出现膜小泡，凋亡小体；PI单染有凋亡峰及细胞周期改变。结论44℃热诱导3h是促使U251细胞凋亡的最佳条件，热诱导凋亡细胞具有典型的形态、生化学特征变化。
- 王军民沈恒田道锋陈谦学冀保卫刘宝辉
- 关键词：胶质瘤细胞高热凋亡流式细胞术
- 阿霉素和BMP4在U251细胞中的作用及其信号通路被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨骨形成发生蛋白4（BMP4）在人脑胶质瘤细胞株U251中的作用及其信号通路.方法 阿霉素、BMP4质粒体分别给予U251细胞,BMP4的小干扰给予阿霉素处理过48 h的U251细胞,RT-PCR、荧光定量PCR和Western blot检测转染是否成功及BMP4、SMAD4的表达量.MTT检测细胞增殖活性,应用公式（1-处理组OD/空白组OD）×100%计算处理组细胞增长抑制率.结果 与空白组相比,阿霉素组和BMP4转染组,细胞增殖活性降低,BMP4高表达,SMAD4低表达;干扰组与阿霉素组相比,细胞增殖活性升高,BMP4低表达,SMAD4高表达.结论 阿霉素可以抑制U251细胞,BMP4与细胞抑制相关,BMP4通过BMP4-SMAD4信号通路抑制U251细胞,BMP4可能是胶质瘤治疗的新靶点.
- 刘宝辉田道锋吴立权王军民易伟冀保卫董慧敏陈谦学
- 关键词：神经胶质瘤SMAD4U251
