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食管鳞癌中HPV-16/18感染与c-erbB-2、p53和Rb表达及其意义被引量：11: 2002年; 目的 :探讨食管鳞癌组织中人乳头瘤病毒HPV 16 / 18感染与c erbB 2、p5 3和Rb表达及其意义。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)法检测 90例活检存档的食管鳞癌蜡块中HPV 16 / 18的感染情况 ,从中随机选择 2 0例 ,采用免疫组化法检测单独的HPV 16感染及c erbB 2、p5 3和Rb表达。结果 :PCR检测食管癌组织HPV 16 / 18的感染率为 31 1% (2 8/ 90 ) ;免疫组化法检测食管癌组织中单独的HPV 16的感染率为 5 5 % (11/ 2 0 )。食管癌组织表达c erbB 2、Rb和p5 3和Rb的阳性率分别为 75 % (15 / 2 0 )、6 5 % (13/ 2 0 )和 80 % (16 / 2 0 )。HPV 16感染与c erbB 2、Rb和p5 3表达之间未见相关性。HPV 16感染以及c erbB 2、p5 3和Rb表达与淋巴结转移之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。p5 3表达与食管癌组织学分级之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,而HPV 16感染以及Rb和c erbB 2表达与食管癌组织学分级之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :食管癌组织中HPV 16 / 18感染与c erbB 2、p5 3和Rb表达之间的关系是复杂的 ,尚有待于进一步研究。; 牛永东李恩民吴贤英郑瑞明沈忠英许丽艳; 关键词：食管鳞癌 C-ERBB-2 P53 RB

双向凝胶电泳图像分析方法的建立被引量：10: 2002年; 目的 :建立一套双向凝胶电泳图像分析方法 ,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据。方法 :采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白。经双向凝胶电泳分离后 ,应用Bio Rad公司的双向电泳凝胶图像分析软件PDQuest 6 .2分析SHEE与SHEEC之间可溶性总蛋白的差异表达情况。结果 :SHEE和SHEEC细胞的双向电泳图谱经背景消减、点检测和匹配后 ,获得了各自的差异蛋白点。其中有 7个蛋白点只出现在SHEE细胞中 ,有 2个蛋白点只出现在SHEEC细胞中。结论 :利用PDQuest 6 .2凝胶图像分析软件可快速有效地对两个密切相关的生物系统之间蛋白质样品双向凝胶电泳结果的差别进行分析处理。; 熊兴东许丽艳沈忠英蔡唯佳韩溟牛永东韩雅莉李恩民; 关键词：双向凝胶电泳蛋白质组蛋白鉴定

MMP-9与MMP-2在食管癌中的表达及其意义被引量：4: 2002年; 目的 :阐明MMP 9(matrixmetalloproteinase 9)和MMP 2 (matrixmetalloproteinase 2 )在食管癌组织中的分布特点及其活性变化。方法 :采用免疫组织化学法和酶谱法 (Zymography)分别检测食管癌组织中MMP 9和MMP 2蛋白的分布及其活性。结果 :MMP 9和MMP 2在食管癌组织中的分布呈多样性 ,既存在于癌细胞中 ,也存在于成纤维细胞和组织巨噬细胞中 ;在角质细胞以及细胞间隙中也发现存在着MMP 9和MMP 2蛋白。在食管癌组织、癌旁组织和远端食管组织中存在着各种形式的MMP 9(130× 10 3-异源二聚体、92× 10 3-前酶形式和 84× 10 3-活性形式 )和MMP 2 (72× 10 3-前酶形式和6 2× 10 3-活性形式 )。 84× 10 3(活性形式 )的MMP 9以及 72× 10 3(前酶形式 )和 6 2× 10 3(活性形式 )的MMP 2在食管癌组织中的活性明显比癌旁组织和远端食管组织中的强 (P <0 0 5 )。结论 :MMP 9与MMP; 韩溟许丽艳李淳吴贤英沈忠英李恩民; 关键词：MMP-9 MMP-2 食管癌金属蛋白酶类免疫组织化学

食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析被引量：2: 2003年; 目的 :筛选出能高效表达且可溶性好的NGAL(neutrophilgelatinase associatedlipocalin)融合表达载体。方法 :将NGALcDNA全长片段分别定向克隆到表达载体的BamHI +EcoRI位点 ,构建NGAL基因的 4种融合表达载体 ,然后分别转化大肠杆菌并进行IPTG诱导小样表达 ,监测各NGAL融合蛋白在不同诱导时间内的表达量及其可溶性等。选择pHis NGAL和pDsbA2 0 NGAL进行IPTG诱导大样表达 ,通过SDS PAGE比较表达产物的量与可溶性。结果 :成功构建出 4种NGAL融合表达载体。经IPTG诱导小样表达后 ,4种载体的表达水平及其可溶性明显不同 ,DsbA2 0 NGAL、His NGAL和Trx NGAL融合蛋白表达量分别占菌体总蛋白的 33 3%、32 3%、2 8 7% ,而它们的可溶性部分分别占各自总NGAL融合蛋白的96 8%、95 3%和 6 3 0 %。对pDsbA2 0 NGAL和pHis NGAL进行IPTG诱导大样表达后发现 ,DsbA2 0 NGAL融合蛋白的表达量与可溶性较好。结论 :pDsbA2 0 NGAL表达载体是能高效表达且可溶性好的NGAL融合蛋白表达载体。; 王朝阳许丽艳荣举韩溟吉坤美沈忠英李恩民; 关键词：基因生物合成大肠杆菌基因表达

NGAL蛋白Ni^(2+)-金属鏊合层析纯化及其鉴定被引量：3: 2004年; 背景与目的 :通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 +_金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定 ,最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白。材料与方法 :将 pDsbA2.0 -NGAL融合表达载体转化大肠杆菌 ,进行IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE分析表达产物的产量与可溶性 ,然后将表达产物进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定。结果 :将 pDs bA2.0 -NGAL融合表达载体进行IPTG诱导表达 ,SDS-PAGE分析显示表达的NGAL融合蛋白产量高、可溶性好 ;对表达的NGAL蛋白进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化后其纯度>95 %,MALDI-TOF-MS鉴定结果提示纯化后NGAL蛋白分子量与其理论分子量的误差仅为0.91‰。结论 :通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定 ,最后确切获得了一定丰度电泳纯的NGAL蛋白。; 王朝阳许丽艳荣举李劲涛李恩民; 关键词：NGAL MALDI-TOF-MS

NF-κB及其在肿瘤中的生物学行为特征被引量：7: 2002年; NF κB是一类普遍存在的转录因子 ,参与着 15 0余种基因的转录调控 ,主要涉及免疫炎症反应、细胞增殖与凋亡等生物学过程。NF κB可被许多刺激因素激活。近年来 ,围绕着NF κB在肿瘤中的生物学行为特征这一问题进行了大量研究 ,本文综述NF κB在肿瘤的发生、浸润、转移和耐药中的作用等方面的进展。; 牛永东; 关键词：NF-ΚB 肿瘤生物学行为信号传导通路

KEGG及其在顺式作用元件预测中的应用被引量：1: 2003年; 随着生物信息学的飞速发展,与之相应的各种类型的数据库不断涌现,KEGG数据库便是其中之一。本文详细介绍了KEGG数据库的主要内容及其功能,并以运用该数据库Mat Inspector V2.2软件预测NGAL基因5’端转录调控区增强于元件为例说明了KEGG数据库在基因转录调控研究中的应用。; 王子良许丽艳李恩民; 关键词：生物信息学

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国家自然科学基金(30170428)